酶联免疫吸附试验在梅毒螺旋体感染诊断中的应用价值

张克华

江西省上饶市弋阳县中医院 (江西上饶 334400)

梅毒作为常见的性疾病，其传染性强且危害较大，极易侵犯、损伤全身各器官功能，故强化对病原体的检测及早诊断并治疗梅毒显得尤为重要[1]。梅毒螺旋体感染为诱发梅毒的常见原因，目前甲苯胺红不加热血清试验(toluidine red unheated serum test，TRUST)作为检测梅毒螺旋体表达的常用方法，临床应用特异度不高，存在一定的假阳性、假阴性[2]。近年来，酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)凭借操作简便、自动化程度高等优点已在梅毒螺旋体检查中逐渐应用[3]。鉴于此，本研究旨在探讨ELISA、TRUST在梅毒螺旋体感染诊断中的应用价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年10月至2018年9月在我院就诊的106例疑为梅毒螺旋体感染患者，男66例，女40例；年龄22～67岁，平均(40.52±5.36)岁。本研究已获院内医学伦理委员会批准，患者均签署知情同意书。

1.2 方法

入选者均接受TRUST、ELISA检查，以及梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(treponema pallidum gelatin particle agglutination test，TPPA)。(1)TRUST检测：将50 μl血清样本加入加样卡片圈，整个卡片圈中均匀涂布，将抗原液摇匀(所用试剂盒由上海荣盛生物药业有限公司提供)；采用针头取抗原液1滴加入，然后向立体脱色摇床中放置卡片，以100 r/min速度震荡8 min，然后于亮光下观察结果，其中圆圈内可见粉色或红色絮状物判定为阳性，圆圈内甲苯胺红颗粒于中央聚集成为一点或均匀分布判定为阴性。(2)ELISA检测：将50 μl血清标本加入预包被板条孔，设置空白对照、阴性、阳性，于37 ℃环境中温育1 h；然后将板条孔取出，将酶标记物50 μl加入对照、阴性、阳性孔内，震荡摇匀，于37 ℃环境中温育0.5 h；然后取出并洗板，将底物缓冲液50 μl加入各个孔中，震荡摇匀，于37 ℃环境中温育0.5 h；将终止液50 μl加入各孔中，混匀，于ST360酶标仪(上海天呈科技有限公司)读出数值，其中样品OD值S/CO<1则梅毒抗体阴性，样品OD值S/CO≥1为梅毒抗体阳性。(3)TPPA检查：将每份标本做孔(9个)，将标本稀释液加入U形反应板，加100 μl至第1孔，另外8孔各为25 μl；通过移液器取25 μl血清向第1孔加入，待混匀后取出25 μl并向第2孔加入，随后取25 μl向第3孔加入，4～9孔同上，混匀最后1孔并弃去25 μl；将未致敏粒子D液25 μl加入第3孔，将致敏粒子C液25 μl加入4～9孔，向振荡器内置入微量反应板，震荡30 s，并置于有盖湿盒内；于37 ℃孵箱静置2 h，观察结果。

1.3 评价指标

观察TRUST、ELISA检查结果，以TPPA检查结果作为金标准，评估TRUST、ELISA检查准确度、灵敏度、特异度。

2 结果

TPPA确诊梅毒螺旋体感染85例(Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期分别为25例、21例、39例)；TRUST检出阳性、阴性各74例、32例；ELISA检出阳性、阴性各82例、24例。以TPPA诊断结果作为金标准，TRUST诊断特异度、灵敏度、准确度分别为61.90%(13/21)、77.65%(66/85)、74.53%(79/106)；ELISA诊断特异度、灵敏度、准确度分别为95.24%(20/21)、95.29%(81/85)、95.28%(101/106)。见表1。

表1 TRUST、ELISA诊断与TPPA诊断情况对照(例)

3 讨论

梅毒属于一种传染性强的流行性疾病，多由于梅毒螺旋体感染所致。获得性梅毒、胎传梅毒为两种常见类型梅毒，其中前者多由性接触传染，而后者则为经脐带血循环胎盘传染所致，且可于胎儿内脏、组织中繁殖，促使胎儿全身感染，导致产妇流产、死亡。经临床发现，梅毒诊治不当极易诱发梅毒性心血管病、脊髓膜炎等并发症。梅毒分为Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期，其中Ⅰ期、Ⅱ期为梅毒早期，传染性小且对患者机体影响较小，Ⅲ期梅毒为晚期，感染性较大、病程长，极易损伤患者机体健康，因此及早发现梅毒并诊治对减轻梅毒损伤具有重要影响。

近年来，TPPA已成为梅毒诊断中的金标准，临床检测准确度较高，但由于其检查价格昂贵，往往无法用于早期筛查中，故临床多将TPPA检查用于梅毒复查，以提升梅毒诊断效能。近年来临床对梅毒的认识逐渐加深且医疗水平日益发展，临床上梅毒检查方法逐渐增多，TRUST、ELISA为梅毒检查的常用方法，其中TRUST作为非梅毒螺旋体抗原血清试验，多被用于评估梅毒筛查及治疗效果[4]。梅毒螺旋体感染后潜伏期较长，感染后1～2个月内血清中仅可检测到部分抗体，特异性抗体出现早于非特异性抗体，且在实施相关治疗后非特异性抗体将逐渐转变为阴性。TRUST检查梅毒Ⅰ期特异性较低，存在假阳性、假阴性现象，而对于梅毒潜伏期，TRUST检查灵敏度不高。

ELISA作为酶免疫测定技术，应用基因工程技术，利于吸附已知抗体或抗原于其固相载体表面，然后通过酶标记抗原抗体反应，利用洗涤法洗掉液相中游离成分，通过对底物盐水进行观察而判定结果[5]。ELISA法检测中紧密结合了酶化学敏感性与抗原抗体特异性，进而可提升诊断结果。本研究结果得出，ELISA法检测梅毒螺旋体感染特异度、灵敏度、准确度较高，表明其利于提升梅毒检出率，可为梅毒的防治提供确切参考。郭家权等[6]研究证实，ELISA法为梅毒筛查、检测中较为有效的方法，临床应用灵敏度较高，本研究结果与其相似。

综上所述，ELISA用于梅毒螺旋体感染诊断准确度较高，利于提升梅毒诊断效能，可指导临床制定治疗方案。