顶空气相色谱法测定硫酸莨菪碱原料药中有机溶剂残留量

刘冬梅 ，郭成林 ，官倩倩 ，宋 军 ，杨慈海

（1.湖北省荆门市食品药品质量检验所，湖北 荆门 448124； 2.湖北百科亨迪药业有限公司，湖北 荆门 448000）

莨菪碱为副交感神经抑制剂[1-2]，药理作用类似阿托品，但水溶性不佳，为满足制剂需求，将莨菪碱制成硫酸盐后增加了溶解性但不改变药理作用。硫酸莨菪碱具有止痛解痉功能，对坐骨神经痛有较好疗效，有时也用于治疗癫痫、晕船等。由于其生产过程中用到乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯4种有机溶剂，根据2015年版《中国药典（四部）》通则0861残留溶剂测定法[3]的规定，二氯甲烷为二类溶剂，限度为0.06%，乙醇、丙酮、乙酸乙酯均属三类溶剂，限度均为0.50%。本研究中参考2015年版《中国药典(四部)》[3]64-65和相关文献[4-11]，采用顶空气相色谱法测定硫酸莨菪碱中4种有机溶剂的残留量，可为药品生产过程的质量控制提供参考。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

TRACE1300型气相色谱仪，TRIPLUS300型自动顶空进样器（美国Thermo Electron公司）；BP211D型电子分析天平（德国Sartorius公司）。

1.2 试药

硫酸莨菪碱（湖北百科亨迪药业有限公司，批号分别为 318-180406，318-170505，318-170502）；二甲基亚砜为色谱纯，乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯均为分析纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 气相色谱条件

色谱柱：DB-624气相色谱柱（30 m×0.53 mm ×3.0 μm）；检测器：火焰离子化检测器，程序升温（35 ℃保持10min，以35℃ ／min的速率升温至180℃，保持6min；以40℃ ／min的速率升温至200℃，保持10 min）；检测器温度：250 ℃；进样器温度：160 ℃；柱流速： 1.0mL／min；空气流速：400 mL ／min；氢气流速：40 mL ／min；氮气流速：30 mL ／min；分流比：10 ∶1；顶空瓶平衡温度：100 ℃，平衡时间 30 min；顶空瓶体积：20 mL；样品体积：5 mL。顶空定量环体积：1 mL，加热箱温度：100℃，定量环温度：110 ℃，传输线温度：200 ℃；进样时间：0.5 min，循环时间：33 min，样品瓶平衡时间：30 min，压力平衡时间：0.5 min。

2.2 溶液制备

称取乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯各适量，精密称定，分置装有二甲基亚砜的10 mL容量瓶中，加二甲基亚砜定容，作为Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ号母液，各取适量，置同一100 mL容量瓶中，制成乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯质量浓度分别为 0.998 0，0.996 6，0.532 8，0.991 8 mg／mL的混合溶液。精密量取5 mL，置50 mL容量瓶中，加二甲基亚砜定容，摇匀；再精密量取10 mL，置50 mL容量瓶中，加二甲基亚砜定容，作为混合对照品溶液。取Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ号母液各适量，分别置4个容量瓶中，加二甲基亚砜稀释，制成乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯质量浓度分别为 99.80，99.88，52.80，98.52 μg ／mL 的定位溶液。取样品约0.2 g，精密称定，置顶空瓶中，精密加二甲基亚砜5 mL使溶解，作为供试品溶液。以二甲基亚砜作为空白溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验：取2.2项下对照品溶液、供试品溶液、定位溶液、空白溶液各适量，按2.1项下条件进样测定，记录色谱图(见图1)。结果空白溶液在与对照品溶液色谱图中相同保留时间处无干扰峰，表明专属性良好。

线性关系考察：精密量取2.2项下混合对照品溶液0.5，5.0，10.0 mL，各置 50 mL 容量瓶中，加二甲基亚砜定容，量取2 mL，各置50 mL容量瓶中，加二甲基亚砜定容，即得1～3号线性溶液；精密量取2.2项下混合对照品溶液 2，5，10 mL，各置 50 mL容量瓶中，加二甲基亚砜定容，即得4～6号线性溶液。精密量取1～6号线性溶液各5 mL，置顶空瓶中，按2.1项下条件进样测定，记录峰面积。以待测成分质量浓度（X，μg／mL）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归。结果见表1。

检测限测定：分别精密量取2.2项下混合对照品溶液适量，倍比稀释，并按2.1项下气相色谱条件进样测定，以信噪比(S／N)3∶1计算检测限。结果见表1。

精密度试验：取2.2项下混合对照品溶液适量，按2.1项下条件连续进样6次，记录峰面积。结果乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯峰面积的 RSD分别为1.1%，1.6% ，0.9% ，0.8%（n ＝ 6），表明仪器精密度良好。

图1 高效气相色谱图

表1 回归方程、线性范围与检测限

表2 加样回收试验结果（n＝6）

加样回收试验：取已知含量样品（批号为318-180406）0.2 g，共 6 份，分别加入低、中、高质量浓度的混合对照品溶液，依法制备供试品溶液，按2.1项下条件进样，记录峰面积，并计算回收率，结果见表2。

2.4 样品中有机溶剂残留量测定

取3批样品各适量，分别按2.2项下方法制备供试品溶液，再按2.1项下条件进样测定，平行测定3次，记录峰面积，并计算含量。结果批号为 318-180406，318-170505，318-170502的样品中乙醇含量分别为0.025% ，0.014% ，0.018% ，丙酮含量分别为 0.068% ，0.092%，0.053%，其他 2种成分未检出。

3 讨论

3.1 进样方式选择

硫酸莨菪碱生产过程中用到的乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯，根据2015年版《中国药典(四部)》通则和人用药品注册技术规定国际协调会议(ICH)规则，应作为控制溶剂[3]105-109。二氯甲烷为二类控制溶剂，采用顶空进样法测定可避免样品溶液对色谱柱的污染及样品基质的干扰，也无需对样品进行前处理，进样量大，可提高有机溶剂残留量的检测力度。

3.2 溶剂选择

硫酸莨菪碱在二甲基亚砜中易溶，选择二甲基亚砜有利于残留溶剂的检出。开始使用分析纯二甲基亚砜，结果乙醇、丙酮有干扰峰存在；后又选择了色谱纯二甲基亚砜，结果消除了干扰峰。

3.3 分析条件选择

采用程序升温，开始以25℃ ／min的速率直接升温到 200 ℃，保持 10 min，柱流速 2.5 mL ／min，结果乙醇和丙酮峰重叠，分离度达不到要求；后改为以35℃ ／min的速率升温至180℃，保持6 min，再以40℃ ／min的速率升温至 200 ℃，保持 10 min，柱流速 1.0 mL ／min，乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯均能达到良好分离，重复性好，测定结果准确。

综上所述，该方法操作简便，专属性、精密度好，可用于硫酸莨菪碱原料药中有机溶剂残留量的控制。参考文献：

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