柏程思

摘   要：当前生物信息学过滤测序接头序列的软件不能涵盖所有Illumina测序平台的接头序列。这样造成了分析NGS数据平台的局限性。本文通过R语言编程利用爬虫技术对Illumina质控文件的分析，挖掘所有不能被过滤软件识别的接头序列。

关键词：生物信息学  R语言编程  爬虫  Illumina測序

中图分类号：Q811.4                                文献标识码：A                       文章编号：1674-098X（2019）02（b）-0136-02

当前生物信息测序领域中，Illumina公司属于二代测序的垄断公司。其开发的Illumina Hiseq、Illumina Miseq、Illumina GAII等平台已经是流行于全世界。绝大多数分子生物学、基因组学和细胞生物学实验室都在使用Illumina平台测序。

在二代测序的分析流程中，拿到的数据是FASTQ数据，需要先对数据进行质量控制。质量控制通常是使用FastQC软件对FASTQ数据进行分析，判断测序数据是否具有高质量。如果质量低，则不支持后续生物信息学分析，需要过滤。通常情况下，由于测序仪机器的误差，从测序仪下机的数据都或多或少有低质量的序列，这些低质量需要有的是碱基质量低，有的是测序接头未去掉（尽管Illumina大多数测序平台的测序仪在2013年以后能保证数据下机自动去接头，但是部分测序平台依然不能自动去接头）。需要过滤，而过滤使用的软件一般为Trimmomatic软件。但是Trimmomatic软件过滤使用的文件是自身adapter文件夹中自带的Truseq文件过滤测序的接头，而这些接头文件只包含了Hiseq、Miseq和GAII测序平台的接头文件，没有包括全部的接头文件。未去接头的序列在质控结果中可以将接头序列以Overrepresent形式表示出来。所以，如果我们测序时选择的测序平台不能自动下机去接头，我们需要手动自己去接头。爬虫是利用计算机技术对网络数据的挖掘，因为互联网数据基本都是储存在网络服务器中，网络服务器末端端口是用户。用户可以通过网页访问网络服务器，网页是由HTML语言搭建的可视化端口。HTML是HyperText Markup Language（超文本标记语言）的缩写，这个语言使用<标签>内容基本格式进行网页编辑[1]。例如

This is how to use HTML

The way to use HTML

You can learn it

将上面这个代码复制到一个新建TXT文本中，并将后缀命名为.html，双击该文件打开会出现以下内容（见图1）。

1  分析方法

FASTQC软件输出的质控结果就有HTML本地文件，如果出现了接头序列就会在Overrepresent中出现，Overrepresent有其对应的HTML标签。R语言[2-3]可以通过追溯内容所在的标签追溯到内容，这个追溯内容的路径称之为xpath，最后通过正则表达式筛选我们要的内容即可。首先在Linux系统上存放测序数据的路径（该路径中只能含有测序数据文件）下使用命令fastqc `ls $pwd`，然后下载输出的HTML文件。先用网页查看是否有接头序列，再用Notepad++打开文件找接头序列所在的xpath（见图2）。

编写如下R语言代码

library（rvest）

library（stringi）

setwd（"D：/test/fastQC"）

myQCfile<-dir（"D：/test/fastQC"）

truseqindex<-NULL

for （i in 1：length（myQCfile）） {

qc<-read_html（myQCfile[i]）

a<-qc%>%

html_nodes（xpath = "//tr/td"）%>%

html_text（）

b<-NULL

for （j in 1：length（a）） {

if（grepl（a[j]，pattern = "（TruSeq|Primer）"））{b<-c（b，a[j-3]，a[j]）} }

truseqindex<-c（truseqindex，b）}

2  结语

我们开发的挖掘当前过滤软件无法过滤的接头脚本更具有实用性，可以适用于所有NGS数据分析过滤脚本。使分析结果更具有可靠性。

参考文献

[1] 邓子云.爬虫系统中标签删除功能的设计及优化[J].计算机系统应用，2019，28（1）：176-181.

[2] 许庆炜.B语言—生物信息学可视化流程语言[J].计算机与数字工程，2009，37（5）：90-93.

[3] 吴栋杨. 构建基于R语言的生物信息学研究平台[A].第十次中国生物物理学术大会论文摘要集[C].中国生物物理学会，2006：1.