植物甾醇酯的色谱联用分析

张秋丰

摘  要：该文针对植物甾醇酯、植物甾醇和脂肪酸酯，合成体系中各组分的同时定性、定量分析方法，建立了气相色谱和高效液相色谱同时监测合成反应过程的新型色谱分析模式。对植物甾醇酯的合成实验和工业化生产都能起到实时监控和指导作用，对医药、工业、食品等行业都有重要的现实意义。

关键词：植物甾醇酯  气相色谱  高效液相色谱

中图分类号：O657   文献标识码：A            文章编号：1672-3791（2019）05（c）-0233-02

植物甾醇酯是一种新型的功能性食品添加剂，具有很好的降低胆固醇效果[1]。目前国外对植物甾醇酯的合成发展迅速，国内仍较滞后[2，3]。但合成过程中一般采用气相色谱或液相色谱实时监控，分析方法比较单一，各有缺点。该文同时采用气相色谱和液相色谱联用分析，能更全面、准确地对合成反应监控，弥补单一分析的不足。

仪器与材料：安捷伦6820气相色谱仪，氢火焰离子检测器;安捷伦1100高效液相色谱仪，安捷伦1100紫外检测器;植物甾醇酯对照品采购于德国康尼士生物公司，经检测纯度大于95%，样品由大连医诺生物制品有限公司提供，实验中采用试剂为色谱纯。

1  气相色谱条件

色谱柱：DB-5高温毛细管柱（15m×0.319mm×0.10?m）。

检测器：氢火焰离子检测器，其温度为350℃。

柱溫条件：采用程序升温方式，初温定为170℃，持续3min，然后以每分钟升高5℃的速度到320℃，持续25min。

进样量：0.5?L。

2  气相色谱对照品配制

称量桦木醇纯品100mg置于100mL容量瓶，用异丙醇定容到刻度线，可得内标溶液待用。称量植物甾醇酯对照品200mg，用正庚烷定容至100mL，得到植物甾醇酯对照品储备液待用。取2.0mL、4.0mL、6.0mL、8.0mL储备液分别置于10mL容量瓶中，再向四杯储备液瓶中各加桦木醇内标液1.0mL，并定容到刻度线。

3  气相色谱标准曲线

在上述条件下进样分析，将植物甾醇酯对照品溶液中甾醇酯与桦木醇峰面积之比作为横坐标，甾醇酯与桦木醇浓度之比作为纵坐标，得相关曲线线性回归方程：Y=1.2176X+0.0137，R=0.9973。

4  气相色谱样品分析

称量100mg植物甾醇酯样品放置于50mL容量瓶中，再加入1.0mL桦木醇内标液，用正庚烷定容，取0.5?L进样检测（见图1）。

5  液相色谱条件

色谱柱：硅胶正相柱（250mm×4.6mm，5μm）。

流动相∶正己烷∶异丙醇∶甲醇=98∶2∶1.5%。

流速：1mL/min。

检测波长：210nm。

进样量：20μL。

6  液相色谱对照品配制

称量植物甾醇酯对照品100mg溶于100mL流动相，0.45?m滤膜滤过，可得对照品储备液。

7  液相色谱标准曲线

取对照品储备液2.0mL、4.0mL、6.0mL、8.0mL，分别置于4个10mL容量瓶，用流动相稀释至刻度，各取20?L进样分析。浓度作为横坐标，峰面积作为纵坐标，可得标准曲线回归方程：Y=178351X+28959，R=0.9894。

8  液相色谱样品分析

取样品溶液20?L，在上述色谱条件下进样分析（见图2）。

9  讨论

气相色谱法操作简便，3种植物甾醇酯能分别出峰，对合成实验进展情况，及各组分变化情况能够及时了解。而高效液相色谱法或其他方法往往很难将他们较好分离。但HPLC法对植物甾醇酯能快速分析检测，方法简便、易行，而且稳定、重现性好。如果不要求对各组分单体准确分析，此方法是同时分析植物甾醇、植物甾醇酯和脂肪酸酯最为理想的方法。

上述两种分析方法不仅可以对植物甾醇酯准确定性、定量分析，而且可以同时对样品中的甾醇和脂肪酸酯及杂质准确分析。这两种方法对甾醇酯的合成实验和工业化生产都能起到实时监控和指导作用，具有重要意义。

参考文献

[1] 唐传核，彭志英.一种新型功能性食品一植物甾醇酯[J].中国油脂，200l，28（3）：60-63.

[2] Millqvist Anna.Lipase catalyzed alcoholysis of triglycerides for the preparation of 2 monoglycerides[J].Enzyme Microbial Technology，1994，16（12）：1042-1047.

[3] Berlin.E.Effect of omega-3 fatty acid and vitamin E supplementation on erythrocyte membrance fluidity tocopherols，insulin binding，and lipid composition in adult me[J].Journal of Nutritional Biochemistry，1992，3（8）：392-400.