Survivin和PCAF在食管癌组织中的表达以及临床意义

梁宗英　侯继申　张乐　张志民　赵宝山　孙光蕊　辛国华

【摘要】 目的：探討Survivin和PCAF在食管癌中的表达及与临床病理特征之间的关系。方法：采用免疫组织化学染色法检测90例食管癌组织和40例正常组织中Survivin和PCAF的蛋白表达水平，分析其与患者临床病理特征的关系及Survivin和PCAF在食管癌中表达的相关性。结果：Survivin阳性表达在癌组织中为73.33%，明显高于正常组织的5.00%（P<0.05）。PCAF阴性表达在癌组织中为65.56%，高于在正常组织中的7.50%（P<0.05）。Survivin蛋白高表达与患者性别、年龄和肿瘤大小均无关（P>0.05），与TNM分期、肿瘤浸润深度、肿瘤分化程度和淋巴是否转移均有关（P<0.05）。PCAF的阴性表达或低表达与患者性别、年龄、TNM分期、肿瘤浸润深度、肿瘤大小以及淋巴是否转移均无关（P>0.05），与肿瘤的分化程度有关（P<0.05）。Survivin和PCAF在食管癌中的表达呈负相关（r=0.113，P<0.05）。

结论：Survivin表达水平与肿瘤的分期、分化程度、浸润深度及淋巴转移均呈正相关，PCAF表达水平与肿瘤分化程度呈负相关。Survivin和PCAF在食管癌中的表达具有明显相关性，联合两者可能在食管癌的发生、发展、转移和预后等方面发挥协同作用。

【关键词】 Survivin; PCAF; 食管癌; 临床意义

The Expression of Survivin and PCAF in Esophageal Carcinomaand Its Clinical Significance/LIANG Zongying，HOU Jishen，ZHANG Le，et al.//Medical Innovation of China，2019，16（20）：122-126

【Abstract】 Objective：To explore the relationship between Survivin and PCAF expression and clinicopathologic features in esophageal carcinoma.Method：Immunohistochemical staining was used to detect the expression of Survivin and PCAF in 90 cases of esophageal squamous cell carcinoma and 40 cases of normal esophageal carcinoma.The relationship between Survivin and PCAF expression in esophageal carcinoma and its clinicopathological features was analyzed.Result：The positive expression of Survivin was 73.33% in cancer tissues，which was significantly higher than 5.00% in normal tissues（P<0.05）.The negative expression of PCAF was 65.56% in cancer tissues，which was higher than 7.50% in normal tissues（P<0.05）.The expression of Survivin protein was not correlated with clinicopathological features，such as sex，age and tumor size（P>0.05），but it was related with clinicopathological features，such as TNM stage，depth of tumor infiltration，tumor differentiation and lymphatic metastasis（P<0.05）.There were no significant differences in the negative expression or low expression of PCAF between the sex，age，TNM stage，depth of tumor invasion，tumor size and lymphatic metastasis（P>0.05），but there was significant difference between PCAF protein and tumor differentiation（P<0.05）.The expression of survivin and PCAF in esophageal carcinoma was negatively correlated（r=0.113，P<0.05）.Conclusion：Survivin expression level is positively correlated with tumor stage，differentiation degree，invasion depth and lymph node metastasis，PCAF expression level is negatively correlated with tumor differentiation degree，Survivin and PCAF expression level are significantly correlated in esophageal cancer，combined with them，they may play a synergistic role in the occurrence，development，metastasis and prognosis of esophageal cancer.

【Key words】 Survivin; PCAF; Esophageal cancer; Clinical significance

First-authors address：The Affiliated Hospital of Chengde Medical College，Chengde 067000，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.20.032

食管癌是我国常见的消化系统肿瘤之一，发病率和死亡率均居世界第一位[1-3]。食管癌的早期发现、早期诊断和早期治疗是改善预后最有效的方法，因此寻找早期诊断、病情监测和判断预后敏感有效的监测指标成为近年来研究重点。食管癌的发生、发展是多因素、多途径、多种癌基因激活和抑癌基因失活的渐进过程，异常的基因以及蛋白的表达在其中起着关键作用。近年随着分子生物学发展，对食管癌的癌基因和抑癌基因研究的不断深入，使医生能够从蛋白水平、分子水平重新认识食管癌的发生、发展和预后。越来越多的研究表明，在多种肿瘤组织中高表达的凋亡抑制蛋白存活素（Survivin）、低表达甚至不表达的PCAF参与了肿瘤细胞的发生发展、凋亡、侵袭转移和血管生成[4-8]。但迄今为止，Survivin和PCAF在食管癌发生发展过程中是否存在协同作用尚无文献阐明。本研究应用免疫组织化学技术检测了Survivin和PCAF蛋白在90例食管鳞状细胞癌组织中的表达，分析其与食管癌人口学特征、分化程度、TNM分期、肿瘤侵袭性、淋巴转移和预后的关系以及两者在其中的协同作用，为食管癌的早期诊断和临床上制定治疗方案提供依据。现将研究结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2016年2月-2018年2月承德医学院附属医院胸外科食管癌手术切除90例作为食管癌组，其病理类型全部为鳞状细胞癌。入选标准：所有患者的临床资料完整;均为首发病例;所有患者术前均无化疗、放疗以及免疫治疗史。其中男54例，女36例;年龄38～72岁，平均（59.23±3.69）岁;≥60岁59例，<60岁31例;TNM分期：Ⅰ期21例，Ⅱ期41例，Ⅲ期28例;细胞分化程度高、中、低分别为34、31、25例;有淋巴转移54例，无淋巴转移36例;肿瘤浸润程度：浅层29例，深层61例;肿瘤大小：<5 cm 48例，≥5 cm 42例。另选取90例患者中的40例作为对照组，对照组组织两残端距癌组织6 cm以上病理证实为正常鳞状上皮组织。

1.2 方法 石蜡块5 μm切片经二甲苯脱蜡水化、枸橼酸盐抗与修复、H2O2浸润、PBS冲洗、山羊血清封闭后，Ⅰ抗温育，Ⅱ抗温育，中间PBS洗涤，DAB显色、苏木素染色，酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封固。兔抗人BIRC5/Survivin单克隆抗体购自上海威奥生物科技有限公司，鼠抗人PCAF单克隆抗体购自上海煊翎生物科技有限公司，SP试剂盒购自北京诺博来德科技有限公司。

1.3 结果判定 400倍光镜随机选10个高倍视野，每视野数100个细胞，Survivin阳性结果：胞质出现黄色或棕黄色染色为阳性细胞，阳性细胞占肿瘤细胞的百分比>10%;PCAF阳性结果：胞质和胞核出现棕黄色或棕褐色为颗粒阳性细胞，阳性细胞占肿瘤细胞的百分比≥10%。

1.4 统计学处理 采用SPSS 18.0统计软件进行分析，Survivin和PCAF阳性表达、年龄、性别、肿瘤大小、TNM分期、淋巴转移等计数资料，以率（%）表示，比较采用字2检验;相关性分析采用Kappa一致性检验和Pearson，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Survivin和PCAF蛋白在食管癌和正常组织中的表达 Survivin在食管癌组织中表达的阳性率为73.33%，高于在正常组织中的5.00%（P<0.05）。PCAF在食管癌组织中的阴性表达率为65.56%，明显高于在正常食管组织中的7.50%，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

2.2 Survivin和PACF的表达与临床病理特征的相关性 Survivin蛋白高表达与患者性别、年龄和肿瘤大小均无关（P>0.05），与TNM分期、肿瘤浸润深度、肿瘤分化程度和淋巴是否转移均有关（P<0.05）;PCAF的阴性表达或低表达与患者性别、年龄、TNM分期、肿瘤浸润深度、肿瘤大小以及淋巴是否转移均无关（P>0.05），与肿瘤的分化程度有关（P<0.05）。见表2。

2.3 Survivin和PCAF在食管癌中表达的相关性 Survivin和PCAF在食管癌中的表达呈负相关（r=0.113，P<0.05），见表3。

3 讨论

食管癌是危害人类健康的重要慢性非传染性疾病之一，随着社会经济的发展，居民生活习惯及饮食结构的改变和诊疗水平的提高，我国食管癌的发病率和死亡率在城市地区呈现下降趋势，但发病率和死亡率仍处于相当高的水平[9]，严重威胁居民的生命和健康，给家庭和社会经济造成沉重的经济负担。研究表明食管癌的发生发展是一个多基因参与、多阶段的复杂过程，失活的抑癌基因通过参与细胞的凋亡为异常细胞提供生存之机，导致肿瘤的发生和发展，因此食管癌的基因和细胞凋亡成为研究

热点[10]。

Survivin基因是功能最强的细胞凋亡抑制因子，它的表达与多种恶性肿瘤的发生发展、临床病理特征及转归密切相关[11-13]。Survivin在肿瘤细胞中的作用表现为抑制细胞周期、干扰细胞凋亡、促进细胞有丝分裂和血管形成，从而提高肿瘤细胞的存活和生长能力，对肿瘤的诊治及预后具有深远的意义[14-16]。本研究发现在食管癌组织中Survivin阳性表达率为73.33%，正常组织中为5.00%，差异有统计学意义（P<0.05），表明Survivin蛋白在正常组织中基本不表达，在食管癌组织过度表达，提示其可能通过直接或间接作用抑制食管癌细胞的凋亡，通过有丝分裂促进肿瘤细胞的异常增殖和恶性化而参与食管癌的发生、发展与形成[17]。文献[18]通过RNA干扰技术开展食管癌与Survivin关系的研究，发现干扰后Survivin蛋白的表达水平较对照组下调，细胞活力明显下降，生长缓慢，其克隆形成较小，数量较少，证实沉默Survivin基因能抑制Eca-109細胞的增殖，增强Caspases的活性，阻滞细胞周期的进展，诱导细胞凋亡。Survivin在食管癌的发生、进展、转移复发过程中产生了重要的作用，是一个潜在预测食管癌患者预后的分子标志物。同时本研究显示，Survivin高表达与患者的年龄、性别、肿瘤的大小均无关（P>0.05），而与肿瘤分化程度、侵袭性、TNM分期、淋巴转移均密切相关（P<0.05），Survivin阳性表达率随着食管癌的恶性程度和TNM分期的增加而逐渐增加（P<0.05），与柴小军等[19]的研究结果相一致。肿瘤浸润至深层或有淋巴结转移者Survivin蛋白表达升高，说明Survivin可以抑制食管癌细胞自身的凋亡过程，使得食管癌恶性程度增强，导致食管癌容易发生转移。牛朝霞等[20]通过Transwell体外侵袭实验和细胞划痕实验证实，靶向抑制Survivin基因的表达能显著降低干扰组Eca-109细胞的体外侵袭与迁移能力。因而Survivin表达与食管癌侵袭、转移以及预后的关系意义重大。Survivin蛋白表达联合食管癌TNM分期、淋巴转移及分化程度等临床病理特征评估后发现，Survivin蛋白阴性，TNMⅠ期、肿瘤分化程度高、无淋巴转移者，患者预后较好，可能与Survivin蛋白表达缺失，抑制肿瘤细胞凋亡的功能丧失，细胞增殖与凋亡保持平衡，提高了早期患者的生存期。当Survivin蛋白阳性时，细胞恶性程度高、肿瘤浸润至深层者、TNMⅡ和Ⅲ期、有淋巴结转移者，预后较差。可能与Survivin表达后正常的凋亡减缓，促进肿瘤细胞无限制生长、促进细胞的有丝分裂和血管的生成以及肿瘤的恶性转化，导致了肿瘤的局部浸润和远处迁移，最终患者的生存期下降。通过对Survivin的表达与临床病理特征之间关系的研究来延缓食管鳞癌的发展、侵袭及转移。

PCAF是組蛋白乙酞化转移酶，在基因表达调控过程中起着十分关键的作用，通过调节组蛋白和非组蛋白水平而参与肿瘤的发生、发展和转归。在多种人类肿瘤细胞和组织中表达下调，其表达降低或不表达与肿瘤患者不良预后密切相关，国内外针对PCAF与肿瘤的发生进行了许多研究，但PCAF与食管癌发生报道鲜见。邱卫芳等[21]研究发现，在人宫颈癌组织中PCAF的阳性率为42.0%，低于正常组织的88.9%（P<0.05），与肿瘤的分期和病理分级显著相关（P<0.05），与年龄、组织学类型、淋巴结转移、浸润深度不具有相关性（P>0.05）。文献[22]研究发现PCAF可能对肠型胃癌的发生和进展有重要的影响，PCAF预示着患者的预后，PCAF的阳性率越低，患者的整体生存情况越差。拓航等[7]对35例肝癌患者随访发现，与PCAF阴性表达组3年生存率22.2%相比，PCAF阳性表达组术后生存期明显延长，3年生存率为52.9%（P<0.05）。本研究选择90例食管鳞癌的患者为研究对象，结果发现PCAF在食管癌组织中表达的阳性率为34.44%，在正常组织中的阳性表达率为92.50%，两者比较差异有统计学意义（P<0.05）。PCAF的表达与肿瘤的分化程度相关（P<0.05），与年龄、性别、淋巴是否转移、浸润程度、大小以及TNM分期不具有相关性（P>0.05）。

本研究结果显示，Survivin和PCAF在食管癌中表达呈负相关（r=0.113，P<0.05），提示Survivin和PCAF可能共同参与了食管鳞癌的发生发展过程，并在局部的浸润和局部或远处的转移中发挥了重要作用。尽管在胃癌和子宫颈癌中均可见Survivin和PCAF的表达报道[23-25]，但两者联合在食管癌发生发展中发挥作用未见文献报道。PCAF是肿瘤抑制基因P53的共激活子，调节P53的活性及其蛋白的稳定性来使细胞周期停滞和细胞凋亡达到一个平衡状态。文献[26]研究显示，在食管癌中P53与Survivin的表达呈显著正相关，两者均在癌组织高表达，与肿瘤分化程度、TNM分期等临床病理特征无关，只与淋巴结转移有关。Survivin和PCAF是通过P53还是其他的基因在食管癌中发挥协同机制仍有待进一步探讨。虽然Survivin和PCAF在食管癌组织中的表达与临床病理特征之间关系以及两者在食管癌肿瘤生长、浸润、转移中的作用机制尚不明确，但应用免疫组织化学技术测定两者基因蛋白在食管癌组织中的表达，分析其与临床特征之间的相互关系及两者在肿瘤发生中的相互性。随着分子生物学研究的深入，探讨Survivin和PCAF蛋白的表达与食管癌发生发展、侵袭、转移及预后的关系，对食管癌的早期诊断及预后判断提供分子生物学指标，给基于基因治疗的临床治疗方案提供一个分子生物学治疗的新靶点具有非常重要的意义。

参考文献

[1]卡吾力·居买，居来提·艾尼瓦尔，张海平，等.食管癌精准治疗靶点筛查研究现状与展望[J].新乡医学院学报，2018，35（9）：827-834，839.

[2]左婷婷，郑荣寿，曾红梅，等.中国食管癌发病状况与趋势分析[J].中华肿瘤杂志，2016，38（9）：703-708.

[3]乔友林.食管癌流行病学研究的重要里程碑[J].中国肿瘤临床，2016，43（12）：500-501.

[4]王云，李运红.胃癌中survivin的研究进展[J].中国临床研究，2017，30（4）：546-548.

[5] Liang Z，Xin R，Yu Y，et al.Diagnostic value of urinary survivin as a biomarker for bladder cancer：a systematic review and meta-analysis of published studies[J].World Journal of Urology，2018，36（9）：1373-1381.

[6]殷海森，赵新颖，苏长青.以Survivin为靶标的肿瘤治疗策略[J].第二军医大学学报，2016，37（3）：342-348.

[7]拓航，郑鑫，涂康生，等.PCAF在肝细胞癌中的表达及临床意义[J].细胞与分子免疫学杂志，2013，29（3）：297-300.

[8]王嵘，易敏，董烽，等.结肠癌组织P300/CBP相关因子表达及其临床意义[J].中华肿瘤防治杂志，2015，22（2）：120-124.

[9]陈万青，郑荣寿，张思维，等.2013年中国恶性肿瘤发病和死亡分析[J].中国肿瘤，2017，26（1）：1-7.

[10]乔炜，张永欢，许俊卿，等.RASSF6在食管癌中的表达及临床意义[J].国际消化病杂志，2019，39（1）：58-60.

[11] Poomsawat S，Punyasingh J，Vejchapipat P，et al.Overexpression of survivin and caspase 3 in oral carcinogenesis[J].Appl Immunohistochem Molphol，2014，22（1）：65-71.

[12]陆毅，姚晖，王曙.Survivin基因及蛋白表达与人786-0肾透明细胞癌细胞增殖、凋亡的相关性研究[J].标记免疫分析与临床，2018，25（8）：1223-1226，1248.

[13]毛苇，赵心恺，孔灿灿，等.Survivin基因沉默促进胃癌细胞凋亡及其机制研究[J].实用医学杂志，2018，34（19）：3176-3180.

[14] Garg H，Gupta J C，Talwar G P，et al.Immunotherapy approach with recombinant Survivin adjuvanted with alum and MIP suppresses tumor growth in murine model of breast cancer[J].Preparative Biochemistry & Biotechnology，2018，48（3）：264-269.

[15] Chawla D，Kar R，Gupta B，et al.Role of Survivin and p53 Expression in Response of Primary Culture of Ovarian Cancer Cells to Treatment with Chemotherapeutic Agents[J].International Journal of Gynecological Cancer，2018，28（6）：1239-1246.

[16] He X J，Zhang Q，Ma L P，et al.Aberrant Alternative Polyadenylation is Responsible for Survivin Up-regulation in Ovarian Cancer[J].中华医学杂志（英文版），2016，129（10）：1140-1146.

[17]马建梅，陈承，潘谨，等.Survivin蛋白在食管鳞癌和肺鳞癌的表达异同探讨[J].蚌埠医学院学报，2015，40（1）：26-29.

[18]牛朝霞，李宁宁，陈洁，等.RNA干扰沉默survivin基因对Eca-109细胞增殖与凋亡的影响[J].郑州大学学报（医学版），2015，50（6）：737-740.

[19]柴小军，王剑云，郑健，等.食管癌组织中HIF-1α、Survivin、CyclinD 1蛋白的表达及其意义[J].现代生物医学进展，2013，13（2）：221-224.

[20]牛朝霞，张秀芝，陈洁，等.Survivin基因沉默抑制食管癌Eca-109细胞的侵袭与迁移[J].安徽医科大学学报，2016，5（21）：185-187.

[21]邱卫芳，邱卫华.PCAF蛋白在人宫颈癌组织中的表达及其临床意义[J].宁夏医科大学学报，2014，36（10）：1128-1129.

[22] Ying M Z，Wang J J，Li D W，et al.The p300/CBP associated factor：is frequently downregulated in intestinal-type gastric carcinoma and constitutes a biomarker for clinical outcome[J].Cancer Biol Ther，2010，9（4）：312-320.

[23]阮佼.胃癌组织中Mina53和Survivin基因的表达及临床意义[J].中国老年学杂志，2017，37（13）：3179-3181.

[24]王志红，鲍德明，石振旺，等.溃疡型胃癌和癌前病变中PTEN、Survivin的表达及临床意义[J].临床与实验病理学杂志，2015，31（10）：1153-1156.

[25]柴姣.P15和Survivin在早期宫颈癌组织中的表达[J].肿瘤基础与临床，2018，31（2）：104-105.

[26]趙文鹏，路平，苗战会.P53、survivin在食管癌中的作[J].现代生物医学进展，2010，10（6）：1140-1142.