动物狂犬病诊断与防控

刘亮

摘要：狂犬病是严重危害我国公共卫生的重要人兽共患病，也是我国目前患病率与死亡率高的烈性传染病之一。人类感染狂犬病的主要来源于患狂犬病或携带狂犬病病原的动物，因此有效防控动物狂犬病是消灭人感染狂犬病的重要途径。该文主要分析对动物狂犬病进行检测及防控的措施，以期进一步加强我国兽医公共卫生体系建设。

关键词：狂犬病;人兽共患病;诊断;防控

中图分类号：S854.4

文献标识码：B

doi：1 0.3969/j.issn.2096-3637.2019.06.022

0 引言

随着中国宠物行业的兴起，犬猫的饲养在中国越来越流行，人类与犬猫的亲密程度也在加深，因此一旦犬猫感染狂犬病病毒，其通过咬、舔的伤口就很容易使人感染狂犬病。而狂犬病作为一种烈性的人兽共患病，其感染后一旦出现临床症状[1]，死亡率为100%，并且无任何药物能治愈。因此，对疑似感染的动物进行检测很有必要，可以避免造成人们的恐慌，此外还应做好狂犬病的防治与监控，降低人类感染动物的可能。

1 诊断与检测技术

1.1 动物狂犬病脑组织样品的直接免疫荧光检测（DFA）

DFA是实验室确诊狂犬病的唯一手段，其也是被世界卫生组织和动物卫生组织所认证的狂犬病实验室诊断的“金标准”。对疑似患病动物进行脑干、小脑或者海马角的触片与抹片制备，并进行干燥和同定，抗体感染作用，漂洗及装片，最终进行结果判定。在实验室还未完成试验或者试验标准实验室没有证实前均不能报告检测的结果，如果对结果存有疑问时，应进行对样品的重复检测。

1.2狂犬病荧光抗体病毒中和试验（FAVN）

FAVN主要是定量测定，应用于动物与人免疫接种后狂犬病中和抗体的水平的检测和评价暴露前或者暴露后免疫的效果。先将疑似/易感动物的血清稀释并与稀释好的标准攻击毒株（cvs-ll）中和，待中和后，加入稀释好的BHK-21细胞，此时未被中止的病毒将会在BHK-21细胞上复制，细胞培养3d后，用80%的冷丙酮于- 20℃同定1h以上，用荧光抗体孵育、检测并计算血清对病毒的半数中和稀释度。在试验操作中应设置OIE对照、WHO对照和阴性对照。只有在对照和病毒滴度结果均成立的情况下，此次检测结果才有效。操作人员应进行严格的暴露前免疫，并且血清抗体效价大于1.0IU/mL时才能批准操作该试验[2]。

1.3狂犬病中和抗体的竞争ELISA检测

狂犬病ELISA中和抗体检测试剂盒是对动物体内的血清中和抗体效价进行测定，用于免疫检测，具有安全、准确及快速的优点。1977年，Atanasiu等人利用初步纯化的狂犬病病毒的组织首次建立了间接ELISA方法，用于人血清抗体的定性检测。1988年时，Barton等人建立了适用于野生动物的狂犬病抗体ELISA定性检测。2000年，CLiquet等用纯化好的病毒糖蛋白为抗原，研发出狂犬病间接ELISA中和抗体定量检测试剂盒，并且得到了世界动物卫生组织的认可和推荐。但要注意需要在检测前将浓缩的洗涤液用ddH_{2O稀释并定容至200mL并混勻，可以用于稀释酶标抗体和洗涤酶联板。}

1.4狂犬病病毒反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测法

RT-PCR的优点在于其具有高通量、高灵敏度和高特异性的特点，可以应用于大规模样品的初步筛选，并且其对结果可直接用于核酸序列的分析;检测结果直观，易于判定;该方法也可从不适宜组织学检测或病毒分离的腐败样品中检测病毒核酸。但其结果不能直接作为确诊的依据，仅可作为参考。

1.5狂犬病病毒荧光定量反转录聚合酶链反应（FQ-PCR）快速检测法

FQ-PCR快速检测法是在RT-PCR的基础上发展起来的，其优点是快速检测、准确定量、高特异性、高灵敏度、交叉污染率低，可以采用一步荧光定量RT-P CRTaqman法和两步荧光定量RT-PCR法检测狂犬病病毒基因[3]。在操作中要注意RT-PCR检测法中的注意事项，还应注意将各种试剂在冰上融化后分装，避免试剂被反复冻融;在配制FQ-PCR体系时应避免强光直射，现配现用;移液器和荧光定量PCR仪应定期校验。在进行结果判定时，阳性结果的ct值应小于32，并且一定要出现典型的扩增曲线，表明其中存在狂犬病病毒;阴性对照应ct值且无经典曲线，表明其中存在狂犬病病毒，还有一个有效原则就是当ct值大于32并且出现经典的扩增线曲，建议将试验重新做一次，如果结果出现ct值和典型的扩增曲线则为阳性，否则为阴性。

1.6金标试纸条在狂犬病抗原抗体中的检测应用

世界卫生组织报告中指出，血清抗体浓度要达到0.5IU/mL以上疫曲接种才能达到有效保护。该方法由于不直接接触狂犬病病毒，因此在一般的实验室均可以用其对血清抗体进行检测，其特点是快速、便捷。但要注意该试纸条只适合用于犬猫等动物的狂犬病病毒血清抗体检测。

1.7乳鼠南内接种试验（MIT）

MIT检测是一种简单易于操作的诊断方法，该方法由Koprowski等建立，后期由世界卫生组织专家委员会认可，并列为狂犬病的诊断方法之一。其主要应用于狂犬病病毒的分离、毒力强弱的测定、抗体水平的检测、疫苗效果的评价。但其缺点是试验周期较长，且仅依靠动物发病的症状并不能确定其为狂犬病病毒感染，要辅助电镜和免疫荧光法作特异性鉴定。

2 人类狂犬病的防控

（1）必须从根本上杜绝狂犬病从动物传至人，应积极响应国家制定的对犬猫进行强制性免疫接种的法规，从根本上消灭传染源，这样人就没有必要再进行疫苗接种与检测。

（2）犬猫主人要明确一点，动物的狂犬病疫苗比人类要便宜，因此给犬猫进行免疫是防止人发生传染病的最简单、有效方法。犬猫主人应主动对犬进行定期的疫苗注射，每年1-2次，并且邻里之间应互相监督提醒，让每只犬都能进行接种。

（3）犬猫主人应对家养动物进行栓养，尤其是去公共场所，既防止家养犬猫伤人，也避免其他流浪犬猫带来感染。对家养犬猫进行及时绝育，减少流浪猫狗的出生数量，也能为犬猫避免子宫蓄脓、卵巢囊肿等疾病。

（4）对于检测出患狂犬病或者带毒的犬猫，应按照动物重大疫病防控方法，进行及时捕杀处理，对于抗体不达标或者尚未进行疫苗注射的动物，应及时补充注射疫苗，以降低犬猫对狂犬病病毒的易感一性，从根本上预防和控制狂犬病的发生和流行。

（5）暴露后应及时进行预防性治疗。因抗体在机体内产生需要一定的时间，因此，当机体暴露后应及时接种狂犬病疫苗和狂犬病免疫抗血清，这也是抑制组织病毒感染最有利的时机。

3 结束语

从根本上消除狂犬病，还得从改变人们的思想观念开始，提高人们自身的道德修养;强化法律法规的监督作用;加快狂犬病诊断的应用。

参考文献

[1]张菲，张守峰，唐青，等我同狂犬病现状与防控意见[J]中同人兽共患病学报，2010，26（ 4）：381-388.

[2]蹇慧，刘力.狂犬病诊断与防制研究进展[J].畜牧兽医杂志，2006，25（ 2）：19-21

[3]李静.狂犬病的实验室诊断在临床狂犬病诊断中应用的研究[D].泸州：泸州医学院，2009