蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测

袁柱良 李海英

摘 要 蔬菜中农药残留作为食品安全管理的重要内容，关于检验蔬菜中的农药残留量主要是检测有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量。气相色谱法是检测这两类农药的主要标准方法，尽管所具有的灵敏度较高，但是需要耗费较长时间，不适合在临床检验中进行大力推广。为此，找到快速检测方法刻不容缓。

关键词 蔬菜；有机磷；氨基甲酸酯类农药；残留量；快速检测

通过检测农产品中的农药残留可充分确保农产品的质量安全，为此农产品检测的重点在于科学的检测农药残留量。当下，我国有一百多种有机磷与氨基甲酸酯类农药，质量参差不齐，品种复杂，在检测时很难有效的应用色相谱方法[1]。若使用CL-BIII残留农药测定仪，对于假阳性问题很难得到有效避免。现就两种快速检测方法进行详细介绍，详情如下。

1 酶抑制法

1.1 原理

有机磷与氨基甲酸酯类农药在一定情况下能够对胆碱酯酶的正常功能进行有效抑制，且抑制率的高低直接取决于农药浓度。通过对待测样品的检测可掌握对乙酰胆碱酶活性抑制情况的了解，根据紫外可见分光光度计原理和412nm波长的吸光度随时间的变化值可将抑制率计算出来，同时能够初筛/定性分析待测样品。阴性：抑制率不足50%、阳性：超过50%[2]。

1.2 调试仪器

采用CL-BIII八通道残留农药测定仪。将电源接通后，开机进行半小时预热；设置参数，选择通道，对照试样与样品试样可分别在第1、2-8通道放置；设置当日测试日期；调0使吸光度为0.000.

1.3 试剂配制

显色剂：取二硫代二硝基苯甲酸160mg、碳酸氢钠15.6mg，20ml提取溶解，保存在4℃条件下。提取溶液：取无水磷酸氢二钠11.9g、磷酸二氢钾3.2g，溶解时采用1000ml蒸馏水，所制成的提取液pH为8.0.乙酰胆碱酯酶：使用提取液进行溶解，控制3分钟吸光度变化值超过0.3，摇匀后保存在4℃条件下备用，保存期小于4天。底物：取硫代乙酰胆碱25.0mg，溶解时使用30ml蒸馏水，摇匀并同样在在4℃条件下保存备用。

1.4 空白对照

取2.5ml提取液、1.0ml显色剂、1.0ml酶，进行15分钟静置，加入底物之后开展上机测试，严格根据标准开展空白对照组，且保存，按下“装入对照样例”键，将对照数据库打开，然后选择“标准对照库”，在各个通道中装入当天做好的空白对照[3]。

1.5 样品制备

从每颗蔬菜上取样检测，取1.0g叶菜类，不要太碎，主要是叶子。针对特殊菜，如葱蒜等需要密切留意假阳性，采用标准对照库来进行样品比对工作。花菜类：取3棵样品，取叶1.0g；果菜类：顺皮削取1.0g；食用菌可采用整株浸泡的方式。

1.6 样品检测

在样品瓶中放入事先称取好的样品，加入提取液5.0ml，15分钟静置后在5ml玻璃试管中吸入2.5ml样品瓶溶液，同时加入1.0ml显色剂、1.0ml酶液，15分钟静置后加入底物1.0ml摇匀，倒入比色皿中进行上机测试。在温度不足37℃时，会降低酶反应速度，由此会延长显色剂、酶液的放置反应时间，胆碱酯酶空白对照3分钟后与对照差值超过8才能继续进行操作。

1.7 结果判断

阳性：被测样品酶抑制率大于50%，说明蔬菜上有机磷与氨基甲酸酯类农药残留量较高，该样品需要重复检测2次以上。

2 速测卡法

2.1 材料

固化有靛酚乙酸酯与胆碱酯酶试剂的缓冲溶液、试纸、天平、（37±2）℃恒温装置。

2.2 整体测定法

取具5g极具代表性的蔬菜，在带盖瓶中放置并加入一定剂量的缓冲液。静置2分钟后开展预反应，在实验条件允许的情况下在37℃水浴箱中进行10分钟的处理，每个实验批次都需要将相关缓冲液的空白对照卡设定下来[4]。

在使用表面测定法的过程中，首先将一定数量的缓冲液滴到所选定的蔬菜表面上，均匀的涂抹并进行预反应，每次测定都需要设置同一个缓冲液的对照组。

2.3 结果判定

若蔬菜残留的有机磷和氨基甲酸酯类药物没有抑制酶，则用阴性表示，反之则用阳性表示。通过对比实验结果颜色发现，若白色卡片与对照组卡片颜色保持一致或出现天蓝色则为阴性，若白色卡片为浅蓝色或未变色则判定为阳性。

3 讨论

上述两种检测方法具有各自检出限，在不同检测要求与条件下可有选择的使用。速测卡法检测在使用时应该注意相关事项，若实验温度不足37℃，则相应的会减缓酶反应速度，由此需要适当的延长放置时间；若实验中空白卡片不变色，则与温度过低、叶片表面缓冲液较少有关[5]。

当下，在使用酶抑制率法的过程中还存在一些问题，如需进一步提升酶制剂质量问题，且重视酶纯度问题。由于酶活性是开展实验的必要条件，若酶活性不达标则不能继续开展实验。同时，在具体实验中多使用常规分光光度计，以此可满足检测要求，但是实验操作与计算相对麻烦，使用改进的分光光度仪可简化操作与计算过程。

4 结束语

综上所述，速测卡操作法的操作比较简单，且试药具有较高稳定性；酶抑制率法操作相对比较复杂，试药稳定性较低，且需要保存在4℃条件下，但是通过判断数据形式可知这种方法具有直观性，在具体应用时需对实际检测要求与条件进行充分考虑。

参考文献：

[1]陈军丽.不同前处理对酶抑制法检测蔬菜有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的影响[J].现代农村科技，2019（05）：50-51.

[2]禹子凤.茶叶中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测技术[J].农民致富之友，2018（23）：41.

[3]陈冬梅，张金娥.基质固相分散-气相色谱质谱联用法测定蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药的残留量[J].山东化工，2018，47（03）：62-63+66.

[4]羅辉泰，黄晓兰，吴惠勤，等.基于酶抑制原理的电喷雾质谱法快速筛查蔬菜中氨基甲酸酯类农药残留[J].分析化学，2014，42（11）：1561-1567.

[5]王林，王晶，张莹，杨大进，邓峰.蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测方法研究[J].中国食品卫生杂志，2003（01）：39-41.