NK细胞和Treg细胞亚群在宫颈癌患者外周血中表达及临床意义

刘洪博 王文智 石庆芳

(衡水市人民医院 1病理科，河北 衡水 053000；2检验科；3肿瘤内科)

宫颈癌临床发病率及死亡率高居不下，仅次于乳腺癌，也是导致我国女性死亡的主要恶性肿瘤〔1〕。流行病学研究结果显示，我国宫颈癌的每天新发病例不低于15万，而近年来其临床发病呈明显的年轻化趋势，对女性健康造成严重威胁〔2〕。有学者指出，患者的免疫功能与宫颈癌的发生、发展密切相关，其中细胞免疫在机体抗肿瘤免疫中占据十分重要的主导地位〔3〕。调节性T细胞(Treg)是人体内重要的负调节免疫细胞，在免疫疾病及恶性肿瘤中起到十分重要的免疫耐受调节细胞，并可有效调节机体免疫功能的抗肿瘤免疫反应〔4〕。自然杀伤(NK)细胞是较为常用的评估机体细胞免疫功能的常用指标，有学者指出NK细胞与肿瘤发生、发展等具有密切相关关系〔5〕。但NK细胞和Treg细胞亚群与宫颈癌的关系仍鲜有报道。本研究主要分析NK细胞和Treg细胞亚群在宫颈癌患者血中的表达及其与宫颈癌的关系。

1 资料与方法

1.1纳入及排除标准 纳入标准：(1)经病理学检查确诊为宫颈癌；(2)患者均依照TNM分期标准分期；(3)精神正常，可正常配合本研究；(4)对本研究知情并签署知情同意书。排除标准：(1)入组前行化疗或放疗治疗者；(2)存其他免疫系统疾病者；(3)入组前半年内采用免疫抑制剂治疗者；(4)主动申请退出本研究者。

1.2一般资料 经医院伦理委员会批准，将衡水市人民医院2016年6月至2018年7月收治的120例宫颈癌患者作为观察组研究对象，并选取同期行健康体检的女性作为对照组。观察组患者年龄60～68岁，平均(64.28±2.18)岁，其中鳞癌97例、腺癌23例，TNM分期Ⅰ期27例、Ⅱ期35例、Ⅲ期32例、Ⅳ期26例，对照组120例，年龄61～69岁，平均(65.28±2.36)岁，两组患者临床资料差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.3方法 所有受试者在入组后采集空腹静脉血，使用贝克曼流式细胞检测仪利用流式细胞术法检测患者血中NK细胞和Treg细胞，使用CD16+CD56+抗体标记NK细胞，使用CD4+CD25+Foxp3+抗体标记Treg细胞，所用抗体均购买自南京福麦斯生物科技有限公司，并遵照抗体使用说明书推荐倍数稀释抗体，依照流式细胞仪操作规程进行检测。

1.4统计学方法 使用SPSS20.0软件行t检验、方差分析、Logistic回归分析。

2 结 果

2.1两组NK细胞及Treg细胞检测结果比较 观察组NK细胞水平明显低于对照组(P<0.05)，Treg细胞水平明显高于对照组(P<0.05)，见表1。

表1 两组NK细胞及Treg细胞检测结果比较

2.2不同TNM分期患者血中NK细胞及Treg细胞水平 Ⅰ期患者NK细胞水平最高，Ⅳ期患者NK细胞水平最低，不同临床分期患者组间NK细胞水平差异有统计学意义(P<0.05)，Ⅰ期患者外周血中Treg水平最低，Ⅳ期患者外周血中Treg水平最高，不同临床分期患者Treg细胞水平差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 不同TNM分期患者外周血中NK细胞及Treg细胞水平比较

2.3NK细胞及Treg细胞水平与宫颈癌分期关系 NK细胞及Treg细胞是影响宫颈癌分期的独立性影响因素(P<0.05)，见表3。

表3 NK细胞及Treg细胞水平与宫颈癌分期关系

3 讨 论

有研究指出，我国近年来宫颈癌临床发病率呈明显的逐年增高趋势，且也伴随出现明显年轻化的特点〔6〕。机体的免疫功能状态与体内多种恶性肿瘤发生、发展密切相关，当机体免疫功能正常时，其具有完善的免疫识别、免疫监视功能，但在患者出现肿瘤后，细胞免疫功能降低，而细胞免疫为抗肿瘤免疫的重要组成部分〔7〕。因而对宫颈癌患者体内细胞免疫功能变化情况进行及时监测，有助于对患者进行及时诊断、评估和治疗，具有十分重要意义。

NK细胞是人体内中重要的一类独立淋巴细胞群，且体内NK细胞在发挥作用是无须先致敏，且无须补体与抗体激活而起到直接杀伤作用〔8〕。有研究指出，在肿瘤患者体内NK细胞与细胞毒T细胞作用机制类似，可与肿瘤细胞表面受体结合并有效释放并分泌细胞毒性因子而起到杀伤肿瘤细胞的作用〔7〕。此外，NK细胞与肿瘤细胞结合后可通过释放穿孔素与颗粒酶介导溶解肿瘤细胞，且NK细胞仅可有效杀伤肿瘤细胞但对人体内正常细胞无细胞毒作用〔9〕。有学者指出，NK细胞是机体免疫防御系统中的重要组成部分，也是人体内重要的免疫防线，并在抗肿瘤免疫系统中起重要作用〔10〕。CD16+CD56+是NK细胞表面重要的标志物，可通过标记细胞表面CD16+CD56+对NK细胞进行检测〔11〕。本组研究结果显示，健康对照组患者血中NK细胞明显高于宫颈癌组，后对不同临床分期患者进行分析发现随着临床分期加重患者血中NK细胞水平显著降低，且NK细胞可作为影响宫颈癌患者病情发展的独立影响因素。结果表明，宫颈癌患者血中NK细胞水平明显偏低，且患者细胞免疫功能相对较低，其可能与抗肿瘤过程中需要消耗人体中大量NK细胞，且随着患者病情加重其所需消耗NK细胞更多，且肿瘤患者血中NK细胞可作为影响患者病情的独立性影响因素。在人体免疫系统中T淋巴细胞亚群是十分重要组成部分，在细胞免疫发挥功能过程中起到主导作用〔12〕。CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞又称为Treg细胞，一般情况下Treg细胞有两种不同的分化方式，即外周分化和胸腺分化，外周型分化指抗原刺激幼稚型Treg细胞后在TGF-β刺激下诱导产生Foxp3+以形成CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞。在胸腺型分化过程中未成熟T淋巴细胞发育成熟，后通过CD4+细胞进一步刺激利用Foxp3途径分化导致CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞产生〔13〕。有研究结果表明，在CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞调节过程中Foxp3是重要的调控因子〔14〕。Foxp3不仅可起到调节Treg细胞抑制和发育的作用，并可有效调控CD4+CD25+Treg细胞活化。一般情况下，Treg细胞可通过多种途径激活并抑制机体免疫，如依赖抑制性、破坏细胞代谢、细胞因子途径、调节抗原呈递细胞功能、溶解细胞途径等。有研究指出，Treg细胞还可有效抑制体内免疫应答，使肿瘤患者体内出现肿瘤细胞免疫耐受〔15〕。有学者指出，肿瘤细胞的免疫逃逸是调节宫颈癌的发病调节机制〔16〕。本研究结果显示，宫颈癌患者血中Treg细胞水平明显高于健康对照组，且随着宫颈癌患者病情加重Treg水平也随之逐渐增加，且多元回归分析结果显示，Treg细胞是影响宫颈癌发生及发展的独立性影响因素。有研究结果显示，随着宫颈癌患者肿瘤体积越大、宫颈癌分期越高，Treg细胞数量越高，与本研究结果相似〔17〕。分析认为，随着患者病情加重，其体内Treg细胞水平增加导致肿瘤逃避免疫监视能力增强，其可能与Treg细胞下调辅助性T细胞(Th)1、Th2细胞，上调免疫抑制因子白细胞介素(IL)-10、IL-35及转化生长因子(TGF)-β进而起到抑制机体免疫功能，加重患者病情。

综上所述，在宫颈癌患者血中NK细胞呈显著低表达状态，Treg细胞呈高表达状态，且NK细胞及Treg细胞是影响宫颈癌发生及发展的独立影响因素。但本研究并未对患者进行长期随访研究仍有待后续深入研究。