不同药物对塔胞藻生长的影响

马婷　柴英辉　韩朝婕　贾旭颖　周文礼

摘要：本文以天津农学院水生生物生态实验室保存的塔胞藻为试验对象，比较不同的刺激因子：生物素、维生素B1、维生素B12、葡萄糖，对塔胞藻（Pyramidomonassp.）生长和色素含量的影响。试验结果表明：在7d的试验期内，添加生物素，在试验第1天塔胞藻的增长率达到最大值91%;添加葡萄糖可明显促进塔胞藻的生长;添加维生素B12可以促进塔胞藻内的色素含量的增加22%。

关键词：塔胞藻;不同刺激因子;生长;增长率;色素含量

中图分类号：S9文献标识码：ADOI：10.19754/j.nyyjs.20200115050

收稿日期：2019-12-03

基金项目：天津市自然科学基金青年项目（项目编号：18JCQNJC14800）;131人才工程第二层次（项目编号：J01009030726）

作者简介：马婷（1995-），女，硕士在读。研究方向：渔业资源与环境修复;通信作者周文礼（1969-），男，博士，研究员。研究方向：水域生态学和微藻资源化利用。

微藻是海洋中的主要初级生产力，为海洋中的动物提供氧气和丰富的开口饵料，但微藻的生长和光合作用受限于诸多影响因子[1]。单细胞藻类对营养的需求和其他绿色植物一样，需要吸收营养来制造有机物[2]。塔胞藻是水产动物的优质饵料，自1983年张福绥[3]采集分离出塔胞藻后，塔胞藻就被广泛应用于双壳类的养殖中以及养虾前期培水中，同时也是轮虫、卤虫培养中应用较佳的饵料[2]。塔胞藻在F/2培养基中生长情况稳定，经过短期的适应期后，开始较快的增长，后期增长速度放缓[4]。本文在塔胞藻的培养过程中使用不同的刺激因子，以便优化已有的塔胞藻培养方法。

1材料与方法

1.1材料

藻种：塔胞藻，由天津农学院微藻实验室提供。

试验用水：自来水曝气24h并用含氯消毒剂进行消毒，硫代硫酸钠解毒。

培养基：F/2培养基。

1.2培养条件

每天光照9h，光照强度为6000～8000lx，温度为26±1℃，摇床转速为60r/min。

1.3试验方法

1.3.1试验前准备

将处理好的自来水与海水晶混合，使盐度达到30，将水倒入5L的三角瓶，然后在配置好的水中加入F/2培养基，最后加入600mL的藻液。

1.3.2分组

本试验分成6组，每组2个平行。第1组为对照组;第2组为双倍营养盐组;第3组为生物素组，加入生物素1mL（浓度为0.5g/50mL）;第4组为葡萄糖组，加入葡萄糖0.4g;第5组为维生素B1组，加入维生素B10.2g;第6组为维生素B12组，加入维生素B121mL（浓度为0.5g/50mL）。

1.3.3藻细胞数量的测定

从培养第1天开始，利用血球计数板计算藻细胞生长量[5]。即每天从各培养瓶中取出1mL培养液在细胞培养板中稀释10倍，摇匀后用移液枪从中吸取20μL，滴在已盖上盖玻片的血细胞计數板的盖玻片边缘，藻细胞液渗入到计数室，可在显微镜下统计藻细胞数，连续统计7d。

1.3.4色素含量的测定

取100mL藻液，用Whatman GF/F滤膜（直径为25mm）过滤，加入3mL纯甲醇溶液置于4℃的黑暗条件下提取24h，3000r/min，离心15min，取上层液用紫外可见光谱分析仪（A590，翰艺仪器有限公司，上海）测定280～700nm内的吸光值。

2结果

2.1不同药物对藻细胞生长密度的影响

由图1可知，在7d内，所有处理组的藻细胞密度均呈上升趋势，葡萄糖组藻细胞密度达到最大值5950000个/mL，其他处理组的最大藻细胞密度均低于对照组。在前3d藻的培养的过程中，藻的密度生长均比较缓慢，第4天的增长幅度均提高，第7天时生物素组和维生素B12组均出现密度下降的状态。

2.2不同药物对藻细胞增长率的影响

由图2可知，所有处理组对藻细胞的增长率都有影响。第1天时，所有处理组的藻密度增长率均是最大的，且添加生物素组第1天的增长率最大。每组藻的增长率都呈波动型，在第6天维生素B1组的增长率没有与其它组同步降低反而继续上升，在第7天与双倍营养盐组和葡萄糖组的增长率都接近于0。在7d的试验中，添加生物素组增长率波动最大。从第4天开始对照组和双倍营养盐组都出现了同步大幅度的下降。

2.3 不同药物对藻细胞色素含量的影响

由图3可知，添加维生素B12组中藻细胞含有的色素量最大，其次为添加生物素组中藻细胞的色素含量;添加双倍营养盐组中的藻细胞色素含量低于对照组且与添加葡萄糖组的藻细胞色素含量基本持平。

3结论

叶绿素含量是光合作用的良好指标和探针，通过对叶绿素含量的分析和研究，可以得到有关光能利用途径的信息，是快速、灵敏和无损伤地研究和测定逆境对植物光合作用影响的理想方法[6]。本实验结果表明：葡萄糖可以促进塔胞藻密度的提高，但是叶绿素的含量却低于对照组中藻细胞中的叶绿素含量;维生素B12可以提高藻细胞中的叶绿素含量，但抑制藻的生长，藻细胞的密度低于对照组。张建民[7]研究结果则表明，Cd2+离子浓度达到一定程度时，塔胞藻细胞几乎全部死亡。这与本研究得出的高浓度葡萄糖对叶绿素有明显破坏作用的结果有较多的类似之处。

参考文献

[1] 梁英，冯力霞，田传远，等. 高温胁迫对盐藻和塔胞藻叶绿素荧光动力学的影响[J].中国水产科学，2007（11）：6.

[2] 宋雨晴. 海洋单胞藻培养条件优化及对卤虫生长发育的影响[D].扬州大学，2018.

[3] 张福绥，李淑英.塔胞藻在中国海的发现与应用[J].海洋科学，1983（06）： 49-50.

[4] 何振平，王秀云，樊晓旭，王冬冬.温度和光照对塔胞藻生长的影响[J].水产科学，2007（04）： 218-221.

[5] 夏凯，韩晓弟，翟文，等.亚甲基蓝与次氯酸钠对塔胞藻胁迫作用的比较研究[J].齐鲁渔业，2009（09）：7-11.

[6] 唐丽杰，马波，刘玉芬.微生物学实验[M].哈尔滨：哈尔滨工业大学出版社， 2005.

[7] Marwood， C. A.， R. E. H. Smith， J. A.Furgal，et al.， Photoinhibition of natural phytoplankton assemblages in Lake Erie ex-posed to solar ultraviolet radiation [J]. Can.J. Fish Aquat. Sci.， 2000 （57）： 371-379.

[8] 张建民，王刚，苗艳丽，等.用含氯化镉培养液培养塔胞藻的生物学效应[J].台湾海峡，2004，23（1）：51-55.

（责任编辑周康）