气相色谱法测定卤米松原料药中有机溶剂残留

周 芳，李召广，刘云峰

(1.江苏农牧科技职业学院，江苏 泰州 225300； 2.江苏吉贝尔药业股份有限公司，江苏 镇江 212009)

卤米松是一种新型强效的外用糖皮质激素类药物，具有明显的抗炎、抗增生、抗过敏、抗渗出、收缩毛细血管和止痒的作用，主要应用剂型为乳膏剂，在临床上用于湿疹、皮炎、白癜风、银屑病、扁平苔藓等多种非感染性炎症性皮肤病的治疗，其使用方便、起效迅速、安全性高，临床应用效果得到较高认可[1-6]。卤米松原料药在合成过程中使用了有机溶剂甲醇、乙醇、乙腈等，其中残留的溶剂无治疗益处，对人的健康有潜在的危害，应尽可能去除，以符合相关质量标准或要求。《中国药典》2015版及人用药品注册技术国际协调会(ICH)指导原则中对这些有机溶剂残留限度进行了规定[7-8]，为了有效控制产品的质量和安全性，文中结合相关文献[9-12]，采用气相色谱法对上述3种残留的有机溶剂进行检测。

1 仪器和试药

1.1 仪器

GC-7890A气相色谱仪包括氢焰离子化检测器(Agilent科技有限公司)；SQP十万分之一电子天平(赛多利斯科学仪器(北京)有限公司)；KQ-400DB数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 试药

无水乙醇(批号20180718，分析纯，国药集团化学试剂有限公司)；乙腈(批号18065023，色谱纯，TEDIA)；甲醇(批号18045039，色谱纯，TEDIA)；DMF(批号18080173，色谱纯，TEDIA)；卤米松原料药(批号181101、181102、181103，自制)。

2 方法

2.1 色谱条件

以DB-624型毛细管柱(50.0 m×0.32 mm×0.5 μm)为色谱柱，起始柱温为50℃，保持7 min，以40℃·min-1的速度升温至200℃，保持6 min；进样口温度为200℃，检测器温度为220℃；载气：N2，1 mL·min-1；燃气：H2，40 mL·min-1；助燃气：空气，450 mL·min-1；进样量1 μL。

2.2 溶液的配制

对照品储备液配制：分别取甲醇150 mg、无水乙醇250 mg、乙腈20 mg，精密称定，分别置50 mL容量瓶中，加DMF稀释至刻度，制成每1 mL约含甲醇3 mg、乙醇5 mg、乙腈0.4 mg的溶液。

混合对照溶液的配制：精密吸取各对照品储备液1 mL，至10 mL容量瓶中，加DMF稀释至刻度，摇匀，即得。

供试品溶液的配制：取卤米松原料药1 g，精密称定，置10 mL容量瓶中，加DMF溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

3 方法验证及结果

3.1 系统适用性试验

分别取空白溶剂、混合对照溶液、样品溶液按2.1色谱条件进行测定，色谱图如图1、2、3所示，甲醇、乙醇、乙腈的保留时间分别为4.567、5.143、6.180 min，各组分间分离度大于1.5，各组分理论塔板数大于5000，空白溶剂无干扰，分离效果好，符合系统要求。

图1 空白溶剂GC图

图2 对照品溶液GC图(依次为甲醇、乙醇、乙腈和DMF)

图3 供试品溶液GC图(依次为乙醇、DMF)

3.2 线性试验

取2.2中对照品储备液，精密量取2、1、0.5、0.2、0.1 mL，置10 mL量瓶中，加DMF稀释至刻度，摇匀，作为各浓度梯度的供试液。按2.1的色谱条件进行测定，记录峰面积。每份溶液进样3针，求平均峰面积。以平均峰面积为纵坐标Y，以供试溶液浓度(μg·mL-1)为横坐标X，进行线性回归，结果见表1。结果表明在该色谱条件下，甲醇、乙醇、乙腈在各自的浓度范围内线性关系良好。

表1 线性试验结果

3.3 定量限和检测限

取2.2中混合对照品溶液用DMF逐级稀释，按2.1色谱条测定，以S/N≈10作为定量限，甲醇、乙醇、乙腈的浓度分别为2.53、1.30、0.748 μg·mL-1；以S/N≈2～3作为检测限，甲醇、乙醇、乙腈的浓度分别为1.26、0.65、0.374μg·mL-1。

3.4 精密度试验

取2.2中混合对照品溶液，按2.1色谱条件进行测定，连续进样6次，记录峰面积。计算甲醇、乙醇、乙腈峰面积的RSD分别为5.07%，3.32%，4.65%，试验表明精密度良好。

3.5 回收率试验

按2.2供试品溶液配制方法，配制9份样品溶液，精密移取对照品储备液0.8、1.0、1.2 mL分别加入到供试品溶液中，制备低、中、高浓度的溶液各3份，按2.1色谱条件测定，记录峰面积，每份溶液进样3针，求平均峰面积，根据峰面积计算回收率。测得甲醇的平均回收率为103.42%，RSD为0.94%；乙醇的平均回收率为100.90%，RSD为1.95%；乙腈的平均回收率为103.98%，RSD为0.51%。

3.6 溶液稳定性

取2.2中混合对照品溶液，按2.1色谱条件进行测定，间隔0、1、2、4、6、8 h，进样一次，考察各时间点甲醇、乙醇、乙腈的稳定性，在8 h内该溶液中甲醇、乙醇、乙腈浓度的RSD分别为2.28%、2.56%、2.60%，试验表明溶液稳定。

3.7 样品测定

按2.2中的方法配制三批样品溶液，按2.1色谱条件进行测定，每份样品溶液测定3次，记录色谱图，计算样品中各有机溶剂的含量。3批样品中乙醇的含量分别为0.25%、0.26%、0.26%，甲醇和乙腈未检出，结果符合规定。

4 讨论

气相色谱中常用的溶剂有水、乙醇、二甲基亚砜、DMF等，选用DMF做溶剂，可较好地溶解样品。为了获得较高的检测灵敏度，所以配制了较高浓度的供试品溶液，1 g样品在10 mL的DMF中能快速完全溶解。采用程序升温，使3种有机溶剂达到完全分离的效果，而且缩短了分离的时间。

根据《中国药典》2015版和ICH指导原则的规定，甲醇的残留限度为0.37%、乙醇的残留限度为0.5%、乙腈的残留限度为0.041%，经试验测定后自制的原料药卤米松中这3种有机溶剂残留符合限度的规定，本方法经过方法学考察各项均符合规定，该方法可用于卤米松原料药中甲醇、乙醇、乙腈有机溶剂残留的检测。