水朝阳草薄层色谱鉴别方法的建立

徐晓芳　舒娟　石玉梅

【摘 要】 目的：建立水朝阳草的薄层色谱鉴别方法。方法：取本品粉末2g，加石油醚（30～60℃）40 mL，超声处理20 min，弃去石油醚，药渣挥干，加稀盐酸1 mL与乙酸乙酯50 mL，超声处理40 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。另取绿原酸、3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸对照品，加甲醇制成每1 mL各含1 mg的溶液，作为对照品溶液。将供试品溶液10 μl、对照品溶液5 μL点于聚酰胺薄膜上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（1∶15∶1∶1∶2）的上层溶液为展开剂，展开后，置紫外光灯（365 nm）下检视。结果：薄层色谱图谱检出绿原酸、3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸，且斑点清晰，专属性强。结论：该方法可作为水朝阳草的薄层鉴别方法。

【关键词】 水朝阳草; 绿原酸; 3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸; 薄层色谱

【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2020）4-0039-03

Establishment of TLC Identification Method of Shui Chaoyang Grass

XU Xiaofang SHU Juan SHI Yumei

Tongren Food and Drug Inspection Institute，Tongren 554300，China

Abstract：Objective To establish a thin-layer chromatographic identification.method for water radiance.Methods  Take 2g of this product powder，add 40 ml of petroleum ether （30～60 ℃），sonicate for 20 minutes，discard petroleum ether，dry the dregs，add 1ml of dilute hydrochloric acid and 50 ml of ethyl acetate，sonicate for 40 minutes，filter After that，the filtrate was evaporated to dryness，and the residue was dissolved in 2 ml of methanol to be dissolved.Another chlorogenic acid，3，5-O-dicaffeoylquinic acid reference substance was added，and methanol was added to make a solution containing 1 mg per 1 ml，which was used as a reference solution.Point 10 UL of test solution and 5 u L of reference solution on polyamide film，and the upper layer solution of toluene-ethyl acetate-formic acid-glacial acetic acid-water （1∶15∶1∶1∶2） was used as a developing solvent.After deployment，the UV lamp （365 nm） is viewed.Results  The obtained thin layer chromatogram showed chlorogenic acid and 3，5-O-dicaffeoylquinic acid，and the spots were clear and the specificity was strong.Conclusion  This method can be used as a thin layer identification method for water sungrass.

Key words：Shui Chaoyang Grass; Chlorogenic Acid; 3，5-o-dicaffeoylquinic acid; TLC

水朝陽草为菊科旋覆花属植物水朝阳花Inula helianthus-aquatica C.Y.Wu ex Ling.的新鲜或干燥地上部分。夏、秋二季采割，鲜用或干燥[1]。水朝阳草始载于《滇南本草》，《滇南本草》调其“生水内，花朝阳”，故名水朝阳草。菊科旋覆花属植物中绿原酸有较广泛的抑菌作用，3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸具有抗炎、抗病毒、抗菌、抗氧化等诸多药理作用。近年来发现许多有机酸具有多方面的生理活性，如绿原酸、异绿原酸具有很强的抗菌作用[2]。为有效控制水朝阳草药材质量，本文以绿原酸、3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸为对照，采用薄层色谱法鉴别，操作简便、结果直观。

1 仪器与材料

1.1 仪器 KQ-500E型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司） ，梅特勒XPE56电子天平。

1.2 材料 绿原酸（批号：110753-200413）、3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸（批号：111782-201204）中国食品药品检定研究院。水为纯化水，其他试剂为分析纯。水朝阳草样品分别采集自贵州龙里、开阳、清镇 （见表1），且所有样品均经贵阳中医学院何顺志教授鉴定。

2 方法与结果

2.1 提取方法的考察 称取S1样品2 g 3份，分别按下述方法处理后作为供试品溶液：①加甲醇50 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。②加石油醚（30～60 ℃）20 mL，弃去石油醚，药渣挥干，加乙酸乙酯50 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。③加石油醚（30～60 ℃）40 mL，超声处理20 min，弃去石油醚，药渣挥干，加稀盐酸1 mL与乙酸乙酯50 mL，超声处理40 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。

取上述供试品溶液10 μL、对照品溶液5 μL，点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（1∶15∶1∶1∶2）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。结果：方法①主斑点不清晰; 方法②主斑点不清晰; 方法③主斑点清晰，薄层色谱图展距适中，故选择方法③为供试品溶液的制备方法。

2.2 展开剂的考察 取S1样品按提取方法③制成供试品溶液，取供试品溶液10 uL、对照品溶液各5 μL点于聚酰胺薄膜上，分别在下述展开系统中展开：①甲苯-乙酸乙酯-甲酸（8∶2∶0.5）。②冰醋酸。③甲苯-乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（1∶15∶1∶1∶2）的上层溶液。展开后，取出晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。结果：系统①分离效果差，对照品斑点未显出; 系统②对照品3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸斑点清晰，但与绿原酸对照品对应斑点未分开，未达到理想的分离效果; 系统③两个主斑点清晰，分离效果好。因此选择③为水朝阳草薄层色谱鉴别的展开剂。

2.3 耐用性考察

2.3.1 温度的考察 进行低温 （7℃） 、室温（20℃） 、高温（40℃） 的考察。结果表明在上述条件下都能较好分离，斑点清晰，未有明显差异。

2.3.2 湿度的考察进行低湿度（28%） 、中等湿度（58%） 和高湿度（88%）的考察。结果表明在上述条件下都能较好分离，斑点清晰，未有明显差异。

2.3.3 不同生产厂家聚酰胺薄膜的考察 取S1样品按提取方法③制成供试品溶液，取供试品溶液10 μL、对照品溶液5 μL点于聚酰胺薄膜上，①为国药集团化学试剂有限公司生产的聚酰胺薄膜②为浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂生产的聚酰胺薄膜。结果：两个厂家聚酰胺薄膜都能较好分离，未有明显差异。

2. 4 水朝陽草的薄层色谱鉴别 取本品粉末2 g，加石油醚（30～60 ℃）40 mL，超声处理20 min，弃去石油醚，药渣挥干，加稀盐酸1 mL与乙酸乙酯50 mL，超声处理40 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。另取绿

原酸、3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸对照品，加甲醇制成每1 mL各含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验（通则0502），吸取供试品溶液10 μL、对照品溶液5 μL，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（1∶15∶1∶1∶2）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。如图1所示。

3 讨论

水朝阳草具有降气化痰、祛风除湿功效。主咳嗽痰多，胞闷气喘，风湿痹痛[3]，用于治疗咳嗽痰多，胸闷气喘，风湿性关节炎和外伤骨折疼痛等，是我国民间常用的中草药之一。体外癌细胞株筛选实验证明水朝阳草有抗癌作用，对多种实体癌具有不同程度的抑制作用，对人体肺癌、口腔表皮细胞癌等6种癌细胞具有杀灭作用[4、5]。2003年版《贵州省中药材、民族药材质量标准》收载的水朝阳草只有性状描述，缺乏必要的质量控制项目。本实验从提取方法、展开系统考察等方面对水朝阳草进行了系统研究，最终选出上述薄层鉴别方法，在该实验过程中，同时进行了水朝阳花的薄层研究，该方法同样适合水朝阳花的薄层鉴别，如图1所示。该方法分离效果好、专属性强、斑点清晰，为更好地控制水朝阳草质量提供了科学依据。

参考文献

[1]贵州省药品监督管理局编.贵州省中药材、民族药材质量标准[M].贵阳：贵州科技出版社，2003：112.

[2]林瑞超.中药药品检验检测技术指南[M].北京：人民卫生出版社，2017：82.

[3]《中华本草》编委会.中华本草（第七册）[M].上海：上海科学技术出版社，1999：870.

[4]胡美英，梁红，梁红，等.水朝阳草抗癌化学成分的筛选研究[J].中国民族民间医药，1998（6）：43-45.

[5]张人伟，林咏月，戚育芳，等.水朝阳草抗癌化学成分的研究[J].天然产物研究与开发，1998（1）：31-33.

（收稿日期：2019-12-05 编辑：刘 斌）

作者简介：徐晓芳（1988-），女，汉族，本科，主管药师，研究方向为中药及中成药检测。E-mail：576367706@qq.com