中毒家兔体内盐酸哌替啶的分布研究*

2020-04-20 06:05吴玉红杨润鑫
检验医学与临床 2020年7期
关键词:哌替啶检材氢氯

王 勇,吴玉红,卜 娟,封 宇,吴 伟,杨润鑫

1.重庆警察学院刑事科学技术系,重庆 401331;2.重庆市“毒物毒品分析”重点实验室,重庆 401331;3.重庆警察学院2015级刑事科学专业,重庆 401331

盐酸哌替啶为人工合成的阿片受体激动剂,属于苯基哌啶衍生物,是一种应用于临床的合成镇痛药,为白色结晶性粉末,味微苦,无臭。盐酸哌替啶系吗啡的人工代用品,其作用机制与吗啡相似,药理作用及临床应用均与吗啡相同,但镇静、麻醉作用较小,仅为吗啡的1/10~1/8。盐酸哌替啶反复作用也可成瘾,不良反应与吗啡相似,被列为严格管制的麻醉药品。因此,无论从其药理作用、成瘾性,以及对人体的危害,还是从法律文件规定上讲,盐酸哌替啶都是一种毒品[1]。

部分研究显示,盐酸哌替啶检材的前处理方法主要有液液萃取、固相萃取等[2-4]。目前有关盐酸哌替啶的研究主要为检测方法以及盐酸哌替啶作为麻醉剂在临床的应用等,而有关盐酸哌替啶的法医毒物动力学相关研究较少[5-7]。本文采用LDHW-FFZ1-WuYH层析柱优化生物样品中盐酸哌替啶的分离和提取,分析盐酸哌替啶在家兔体内的分布,旨在为盐酸哌替啶滥用引起中毒事件的检测提供一定的参考依据。

1 材料与方法

1.1材料 选择家兔6只,中位体质量2 kg。随机分为实验组(盐酸哌替啶)和干扰组(盐酸哌替啶+氢氯噻嗪)。实验组中3只家兔分别标号1、2、3号,同时,分别抽取0.8 mL盐酸哌替啶生理盐水溶液(4 mg/mL),经耳缘静脉注射,观察家兔的呼吸与心跳等生命体征。干扰组中3只家兔分别标号4、5、6号,同时,分别抽取0.8 mL盐酸哌替啶生理盐水溶液(4 mg/mL),经耳缘静脉注射,观察家兔的呼吸与心跳等生命体征;30 min后,将50 mg氢氯噻嗪生理盐水溶液经口灌胃。死后解剖,取心脏、肝脏、脾、肺、肾脏、脑组织标本冷冻保存待检。

1.2仪器与试剂 仪器为超声波细胞粉碎机JY88-IIN。岛津GC-2010plus型气相色谱仪条件:Rtx-5ms(30 m×0.25 μm×0.25 mm)毛细管柱,柱温为100 ℃(保持1 min),以10 ℃/min升至250 ℃(保持8 min);检测器(NPD),温度260 ℃;Inject温度280 ℃;载气:氮气(99.99%),流速1 mL/min;氢气流速1.5 mL/min;空气流速145 mL/min;尾吹27.5 mL/min;分流比为20.0。LDHW-FFZ1-WuYH层析柱。

岛津GC/MS条件: 毛细管柱DB-5MS(30 m×0.25 mm×0.25 μm),EI 源(70 eV)。柱温:80 ℃(1 min)→10 ℃/min→250 ℃(8 min);离子源温度200 ℃,进样口温度250 ℃;分流比为50∶1;载气:高纯氦气(99.999 9%)流速为1.0 mL/min,恒流模式。

试剂为乙酸乙酯、甲醇,均为分析纯。盐酸哌替啶标准品(1.0 μg/μL,购于公安部第二研究所);内标SKF525A标准液(1.0 μg/μL,购于公安部第二研究所);氢氯噻嗪药片(每片25 mg)购于天津力生制药股份有限公司(生产批号:1708011)。

1.3方法

1.3.1检材前处理和检测 精确称取1 g检材,超声波细胞粉碎机粉碎,移入试管,加入1 mL纯净水,振荡30 s,加SKF525A内标液20 μL(1 mg/mL),振荡1 min,采用LDHW-FFZ1-WuYH层析柱进行前处理,乙酸乙酯洗脱提取,氮吹干,甲醇20 μL定容,抽取1 μL,采用气相色谱(GC/NPD)定量检测其中盐酸哌替啶水平。依据Rt法进行定性分析,采用内标法和工作曲线法进行定量分析。

1.3.2回收率计算 取空白家兔肝脏1.0克/份,超声波细胞粉碎机匀浆后加入1.0 mL纯净水,分别加入1.0、2.0、3.0 μg/μL的盐酸哌替啶标准溶液,按1.3.1步骤进行检测,计算回收率。

1.3.3工作曲线的建立 取空白家兔肝脏1.0 g,加蒸馏水1.0 mL振荡,固性检材超声细胞粉碎(JYD-650L智能型)匀浆3 min,振荡摇匀,加入盐酸哌替啶标准溶液(1.0 μg/μL),配制成1.0、2.0、4.0、8.0、16.0、24.0、48.0、64.0 μg/g的盐酸哌替啶溶液,按1.3.1步骤进行提取及检测。以盐酸哌替啶水平(μg/g)为横坐标(Y),盐酸哌替啶与内标SKF525A的峰面积之比为纵坐标(X)进行线性回归分析。

2 结 果

2.1盐酸哌替啶中毒致死家兔解剖所见 解剖盐酸哌替啶中毒致死家兔,可见腰大肌出血。

2.2回收率 结果显示,不同标准水平的盐酸哌替啶在肝脏中的检出水平分别为(0.94±0.20)、(1.92±0.40)、(2.85±0.30)μg/g,回收率分别为94.0%±0.3%、96.0%±0.2%、95.0%±0.3%。平均回收率96.0%,检出限为2 μg/g。

2.3工作曲线 所得线性回归方程为Y=1.415X-0.24,R2=0.998 1,结果表明,肝脏中盐酸哌替啶在2~64 μg/g时线性关系良好。

2.4实验组和干扰组家兔体内盐酸哌替啶水平比较 结果显示,干扰组心脏、肝脏、脾、肺、肾脏、脑组织标本盐酸哌替啶水平均低于实验组,差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 实验组和干扰组家兔体内盐酸哌替啶水平比较

3 讨 论

本研究结果显示,盐酸哌替啶回收率均大于90.0%,充分说明LDHW-FFZ1-WuYH层析柱能够应用于生物检材中盐酸哌替啶前处理提取,结合文献[5-6]报道,此层析柱具有成本低、操作简便、耗时短的优点。同时,此层析柱不需调节检材的酸碱性,不需对固相萃取柱进行活化,可直接将匀浆后的检材过柱,然后用乙酸乙酯有机溶剂洗脱,加入内标挥干,定容后直接检测;其次,此层析柱既具有很强的吸水性,同时对检材中的色素具有很强的吸附性,因此,经其提取的洗脱液杂质含量较少。

解剖盐酸哌替啶中毒家兔尸体,可见腰大肌出血,分析原因可能为给家兔注射盐酸哌替啶后,致全身肌肉抽搐、发生强直性收缩[1],导致血管撕裂,从而表现为腰大肌出血。

同时,本研究结果显示,两组家兔各脏器组织盐酸哌替啶水平从高到低分别为脑组织、肾脏、肝脏、脾、肺、心脏。盐酸哌替啶在不同标本中分布不均匀与文献[8]报道一致。两组脏器中盐酸哌替啶水平最高的脏器组织均为脑组织和肾脏,可能原因为脑组织为盐酸哌替啶的靶向器官,肾脏为盐酸哌替啶的排泄器官[1]。

同时,干扰组各脏器中盐酸哌替啶水平均低于实验组,差异均有统计学意义(P<0.05)。原因为干扰组家兔在耳缘静脉注射盐酸哌替啶30 min后,经口灌胃氢氯噻嗪,此药作用于肾脏,加速肾脏排泄,产生大量尿液,从而加速了家兔体内盐酸哌替啶的排泄。因此,干扰组家兔体内盐酸哌替啶水平较实验组有显著下降。

综上所述,法医在处理盐酸哌替啶滥用中毒案件时,在无法采集到血液检材时,脑组织是最好的检材,肾脏次之。对于利用氢氯噻嗪逃避处罚的盐酸哌替啶滥用者,由于氢氯噻嗪能够加速体内盐酸哌替啶的排泄,应尽快采集检材,方可避免漏检。

猜你喜欢
哌替啶检材氢氯
美托洛尔联合厄贝沙坦氢氯噻嗪治疗重症心力衰竭的临床分析
比较芬太尼与哌替啶预处理防治子宫下段剖宫产术中寒战的效果
氢氯噻嗪联合替米沙坦用于高血压治疗的有效性分析
厄贝沙坦氢氯噻嗪片在高血压临床治疗中的应用及不良反应状况
厄贝沙坦氢氯噻嗪、叶酸对H型高血压伴舒张性心衰疗效观察研究
指印形成方式鉴定1例
预防性静脉注射长托宁对急性阑尾炎患者术中寒战的影响
白芍总苷与哌替啶联合使用的镇痛耐药性研究
盗窃案件现场生物检材的发现与提取
接触性生物检材DNA提取方法的比较