探究暴马丁香叶中总黄酮的超声提取工艺

王 硕，申雨沐，俞天奇，李 望，王 薇，秦佳梅*

（通化师范学院·吉林通化·134002）

暴马丁香树皮入药，有清肺化痰、止咳平喘、消炎、利尿等功能[1]。其嫩叶、枝条、花还可加工成保健茶，对呼吸系统具有很好的保健作用[2]。暴马丁香含有多种天然活性成分[3]，其中黄酮类化合物有良好的抗氧化、抗过敏、抗炎症、抑制细菌、抑制寄生虫、保护心血管、防治心与脑血管疾病等作用[4]。本项目探究暴马丁香叶中总黄酮的提取工艺，旨为充分利用暴马丁香资源提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 材料

2018年春季采集的暴马丁香叶，自然阴干，粉碎，过筛，装袋备用。

1.2 方法

1.2.1 绘制芦丁标准曲线

图1 芦丁标准曲线

用FA2004C电子天平精密称取10mg芦丁标准品 （沈阳鼎国生物技术有限公司，批号151008）于25mL容量瓶中，用70%乙醇定容至25mL，震荡混匀，制得浓度为0.4mg/mL标准品母液。精密吸取0、0.5、1、1.5、2mL于10mL容量瓶中，分别加入70%乙醇2、1.5、1、0.5、0mL。 再均加入 0.3mL5%NaNO2溶液，静置6min后加入0.3mL10%Al(NO3)3溶液，静置6min，最后加入4mL4%NaOH溶液，用70%乙醇定容至刻度，静置15min，形成红色络合物。用722s可见分光光度计在500nm[5]波长处测吸光度值。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，详见图1，并得回归方程为y=9.58x+0.1028，R2=0.9994。在0.00～0.08mg/mL 范围内线性关系良好。

1.2.2 供试溶液配制与测定

参考王宇希[6]、姜玉梅[7]等人的实验方法，将粉碎后的暴马丁香叶2g置于250mL锥形瓶中，分别探究径粒大小（20、40、60、80、100 目）、液料比（1∶15、1∶20、1∶25、1∶30、1∶35）、乙醇浓度（50%、60%、70%、80%）、超声时间 （10、20、30、40、50min） 四个因素， 用 KQ-300DE型数控超声波清洗器在超声功率为150W、恒定温度50°C下，超声提取50min，用SHZ-D(III)循环水式真空泵减压过滤，收集滤液于50mL容量瓶中，用相应浓度的乙醇进行定容，三次重复。精确吸取1mL，加纯净水稀释到一定倍数后，取稀释后的溶液1mL置于10mL容量瓶中，照2.1方法测定吸光度值，代入标准方程计算。

1.3 数据分析

所获数据用Excel和Minitab19软件进行统计分析。

2 结果分析

2.1 单因素实验结果

图2 径粒大小对暴马丁香总黄酮提取含量的影响

图3 液料比对暴马丁香总黄酮提取含量的影响

图4 乙醇浓度对暴马丁香总黄酮提取含量的影响

图5超声时间对暴马丁香总黄酮提取含量的影响

图2 表明材料颗粒越小提取效率越高，暴马丁香总黄酮含量在材料过80目筛时提取率最高，达11.078mg/g。颗粒过大可能导致提取液不能充分的浸入。图3示液料比在1∶15～1∶35范围内暴马丁香总黄酮提取含量整体呈下降趋势，当液料比在1∶15时暴马丁香总黄酮提取含量最大为23.653mg/g，认为提取剂量大后可能导致其他杂质浸出。图4在乙醇浓度50%～80%范围内，暴马丁香总黄酮提取含量先升后降，乙醇浓度在低于60%时，含量较可能因为浸润性及溶解性较差[8]，当乙醇浓度过高时，可能会同时溶解出其他杂质[9]，当乙醇浓度在70%时，暴马丁香总黄酮提取含量最大为26.116mg/g。图5随着超声时间的延长呈现上升后下降认为超声时间过长可能会导致暴马丁香叶中的总黄酮分解[10]，超声时间在20min时暴马丁香总黄酮提取含量最高为26.158mg/g。

2.2 正交实验结果及分析

根据单因素实验，以A径粒大小、B液料比、C乙醇浓度、D超声时间为考察，因素水平表见表1，按照四因素三水平设计L9（34）正交实验设计，

表1 正交因素水平

表2 L9（34）正交实验结果与分析

由表2可以得知影响暴马丁香总黄酮提取因素是液料比＞料径＞超声时间＞液料比，优化得到的最佳工艺条件为A2B1C3D3，即径粒大小为60目，液料比为1∶15，乙醇浓度为 80%，超声时间为 40min。

3 结论与讨论

通过对暴马丁香叶的径粒大小、液料比、乙醇浓度、超声时间四个单因素实验，得出径粒大小为80目时暴马丁香总黄酮提取含量最高为11.078mg/g，液料比为 1∶15时暴马丁香总黄酮提取含量最高为23.653mg/g，乙醇浓度为70%时暴马丁香总黄酮提取含量最高为26.116mg/g，超声取时间为20min时暴马丁香总黄酮提取含量高为26.158mg/g。为探讨其交互作用，采用正交实验优化得到的最佳工艺条件为径粒大小为60目、料液比为1∶15、乙醇浓度为80%、超声时间为40min。

关于暴马丁香叶中的总黄酮的研究较少，不同生长期暴马丁香叶中的总黄酮含量不同，五月份采收的暴马丁香叶中总黄酮含量较高[13]。本项检测结果与文献[11、12]相近。本实验没有排除色素的干扰，还需进一步进行分离纯化总黄酮[14]，以得到更精确的结果。暴马丁香以树皮入药，从叶中提取总黄酮，可以更好的利用暴马丁香资源。