酒炒葫芦巴中葫芦巴碱的含量测定

聂姗姗，付凌燕，孙立丽，聂垚

（1.吉林市食品药品检验所，吉林 吉林 132000；2.黑龙江大学研究生院，黑龙江 哈尔滨 150000）

0 引言

胡芦巴为豆科植物胡芦巴Trigonella foenumgraecum L.的干燥成熟种子。夏季果实成熟时采割植株，晒干，打下种子，除去杂质。性温，味苦，归肾经，具有温肾，祛寒，止痛等功效[1].临床主要用于肾脏虚冷，小腹冷痛，小肠疝气，寒湿脚气，是我国传统的温肾补阳药物[4]。由于胡芦巴生品质坚硬，不易破碎。酒炒后易于粉碎，利于有效成分溶出[5]，并且能增强温肾作用。清·张仲岩《修事指南》云：“凡酒制升提。”故酒炒后其苦燥之性稍缓，增强有效成分的溶解度，温肾作用增强[8]。

1 酒炒工艺的确定

1.1 净制

将胡芦巴置操作台上，手工挑选、风选，去除杂质。

1.2 酒炒工艺研究

采用L9(34)正交试验设计[2]，用小型炒药锅开展酒炒胡芦巴炮制工艺优化研究，针对黄酒加入量、闷润时间（h）、炒制时间（min）因素[10]，以浸出物含量和胡芦巴碱的含量为评价指标，优选最佳炮制工艺。

按照L9(34)正交试验进行实验，根据响应面实验设计软件分析[7]，确定酒炒胡芦巴最佳炮制工艺为A2B3C1,即：黄酒加入20%，闷润6 小时，炒制40分钟。

1.3 不同厂家黄酒选择的研究

考察三个不同厂家的黄酒，一号黄酒（酒精度：10%）、二号黄酒（酒精度：15%）、三号黄酒（酒精度：10%）。

考察黄酒对炮制的影响，以最佳的炮制工艺方法进行试验[3]，测定结果，见表1。

表1 不同厂家、不同浓度的黄酒测定结果表

实验结果，一号黄酒胡芦巴碱含量和浸出物均为三批中的最高值，所以选择一号黄酒作为本次炮制用酒。

2 葫芦巴有效成分含量测定研究

2.1 仪器与材料

高效液相色谱仪（Waters e2695），色谱柱：Apollo C18 柱，超声波清洗器。

2.企业政工队伍建设不到位。政工人员队伍的建设是做好员工思想政治工作的关键，但由于企业的不重视，许多企业政工队伍建设不完善，政工人员结构不合理，素质跟不上时代的发展是主要问题，许多政工人员在思维方式、教育思想等方面还比较落后，这就制约了思想政治工作效果的实现。例如当前许多企业的政工人员知识老化，教育思想和教育方式过于死板，缺乏心理、社会等多方面的综合教育。

葫芦巴碱对照品（纯度78.4%，中国食品药品检定研究院，批号：110883-201604）。甲醇（色谱纯），纯净水，冰醋酸（色谱纯）。

2.2 含量测定结果

2.2.1 色谱条件与系统适用性试验

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.05%十二烷基磺酸钠溶液-冰醋酸(20:80:0.1)为流动相；检测波长为265 nm。理论板数按胡芦巴碱峰计算应不低于4000。

2.2.2 对照品溶液的制备

取胡芦巴碱对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1 mL 含60 μg 的溶液，即得。

供试品溶液的制备取本品粉末(过三号筛)约0.5g，精密称定，精密加入50%甲醇50 mL，密塞，称定重量，放置1 小时，超声处理(功率300 W，频率50 kHz)45 分钟，放冷，密塞，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 测定法

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

2.3 HPLC 测定方法

2.3.1 葫芦巴碱溶液的配制

精密称取葫芦巴碱对照品适量，制成浓度为47.18μg·mL-1的溶液。

2.3.2 线性关系考察

精密吸取“1.2.1”项下溶液，进样量分别为0.0944、0.2359、0.4718、0.6605、0.8493、0.9436、1.4154 μg，得回归方程Y=3E+6X-97213（R2=1），表明葫芦巴碱在0.0944～1.4154μg 内呈线性关系。

2.3.3 精密度考察

取“2.2.1”项下的葫芦巴碱对照品溶液，按照“2.2.1”项下的色谱条件重复进样6 次，计算峰面积RSD 为0.7%。

2.3.4 重复性考察

制备6 份酒炒葫芦巴炮制品，按“2.2.1”项下的供试品溶液进行制备，计算峰面积（A）的相对标准偏差（RSD）为1.2%。

2.3.5 稳定性考察

将同一份酒炒葫芦巴供试品溶液在0、2、5、7、12 h 进行测定，按“1.1”项下制备供试品溶液，计算峰面积RSD 为1.773%，在12h 内此样品稳定。

2.3.6 加样回收率考察

称取已知含量的酒炒葫芦巴粉末9份，按照低、中、高（0.5:1，1:1，1.5:1）三个比例，按“2.2.1”项下制备供试品溶液，平均回收率为112.13%，RSD 为2.9%。

2.3.7 测定结果

生品葫芦巴和酒炒葫芦巴含量测定结果，见表2。

表2 生品葫芦巴和酒炒葫芦巴含量测定结果表

3 酒炒葫芦巴中葫芦巴碱含量测定结果与讨论

3.1 结果

本文采用正交法确定酒炒葫芦巴的炮制工艺，结果证明此炮制工艺简单易行，工艺稳定，精密度及准确度高，重现性及稳定性好。并且HPLC 法能够准确的测定葫芦巴和酒炒葫芦巴中葫芦巴碱的含量，可以为以后的药学研究及中药炮制提供技术支持。

3.2 讨论

本法采用药典方法发现其有不足之处，十二烷基磺酸钠虽然增大了葫芦巴碱目标产物的保留，有利于目标峰较好的分离，但其易堵塞液相管路。并且对温度（冷）比较敏感。研究发现炮制前后葫芦巴碱含量略有降低，可能原因：炮制温度超过葫芦巴碱熔点后引起部分葫芦巴碱分解。炮制温度为影响化学成分的主要因素[9]，因此在炮制过程中控制炮制温度，主要以性状作为炮制指标[6]。