木香对脾虚大鼠胃肠道运动及血清乙酰胆碱酯酶、一氧化氮水平的影响※

侯 影 张 旭

(辽宁中医药大学附属医院药学部，辽宁 沈阳 110032)

木香为菊科植物木香的干燥根，圆柱形或平圆柱形，味辛、苦，性温，入三焦、脾、胃、胆、大肠经。木香乃三焦气分之药,是治疗胃肠道疾病的常用药，其生品行气，止痛，健脾，消食，主要用于脾胃气滞，胸胁，脘腹胀痛，食积，消化不良，食欲不振等，而煨制木香则可实肠止泻，临床多用于泄泻腹痛、泻痢里急后重等[1]。随着现代人饮食结构的改变，加之社会生活节奏加快、工作压力加重，胃肠道疾病的发病率逐年增高，已对人们正常的工作、生活造成严重影响[2]。乙酰胆碱(ACh)为胃肠道动力的兴奋性递质，具有促进胃肠道运动、加快胃肠道排空的作用。一氧化氮(NO)广泛分布于胃肠道，是一种抑制性递质，与多种胃肠道疾病的发生、发展密切相关。两者的动态平衡对维持正常的胃肠功能具有重要意义[3]。为进一步探讨木香治疗胃肠道疾病的作用机制，我们拟通过对木香生品、麸煨品对脾虚模型大鼠血清乙酰胆碱酯酶(AChE)、一氧化氮(NO)及离体十二指肠收缩功能的影响进行研究，以期为临床用药提供客观依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物 雄性SD大鼠92只，体质量(210±20)g，周龄(6±3)周，均由大连医科大学实验动物中心提供，动物合格证号:SCXK(辽)2018-0003。

1.2 实验药品及试剂

1.2.1 木香 木香购自云南省西双版纳傣族自治州农业科学研究所，由辽宁中医药大学药学院翟延君教授鉴定为菊科植物木香的干燥根。木香麸煨品的制备；按照100 kg木香饮片加入30 kg麦麸，110～120 ℃煨制10 min即可。然后取木香生品、麸煨品各50 g,粉碎成细粉，分别倒入大烧杯中，加入300 mL蒸馏水浸泡1 h，加热沸腾30 min后过滤。剩余药物再加200 mL蒸馏水煎煮，再加热沸腾20 min后过滤，合并2次滤液，水浴加热浓缩为1.0 g/mL。冷却后再分别将木香生品滤液、麸煨品滤液加水调制成生药含量1.0、0.5、0.25 g/mL浓度的药液。

1.2.2 其他 枸橼酸莫沙必利分散片(成都康弘药业集团股份有限公司，国药准字H20031110，批号100802)；利血平注射液(天津金耀药业有限公司，国药准字H12020905，批号1007013)；AChE检测试剂盒、NO检测试剂盒(南京建成生物工程研究所有限公司)；台氏液(按照文献[4]中方法配制)。

1.3 主要仪器 Sunrise酶标仪(瑞士TECAN公司)；UV-1800紫外可见分光光度计[北京北分瑞利分析仪器(集团)有限责任公司]；LMS-2A型二道生理记录仪(成都仪器厂)；YSD-4型药理生理实验多用仪、恒温电热器、肌肉张力换能器(蚌埠市无线电二厂)；HH-4型数显恒温水浴锅(常州国华电器有限公司)；TGL-16C型离心机(上海安亭科学仪器厂)。

1.4 实验方法

1.4.1 模型制备及分组 将92只大鼠在室温25 ℃，相对湿度50%～70%，常规适应性喂养1周，期间可以自由饮水、摄食。然后将92只大鼠随机分为正常对照组、莫沙必利对照组、木香生品高剂量组、木香生品中剂量组、木香生品低剂量组、木香麸煨品高剂量组、木香麸煨品中剂量组及木香麸煨品低剂量组，每组10只，模型对照组12只。除正常对照组外，其余各组大鼠均予利血平注射液0.50 mg/(kg·d)腹腔注射建立脾虚模型[5]，正常对照组大鼠予0.9%氯化钠注射液0.5 mg/(kg·d)腹腔注射，共注射14 d。

1.4.2 灌胃给药 各组大鼠(模型对照组取其中10只)在腹腔注射造模的同时予灌胃给药。木香生品高、中、低剂量组和木香麸煨品高、中、低剂量组分别按照7.00、3.50、1.75 g/(kg·d)的浓度予相应药液灌胃，莫沙必利对照组按照0.35 mg/(kg·d)予枸橼酸莫沙必利分散片药液灌胃，正常对照组及模型对照组分别予0.9%氯化钠注射液7.00 mg/(kg·d)灌胃，共连续灌胃14 d。

1.5 观察指标及方法

1.5.1 血样采集及处理 各组大鼠灌胃14 d后禁食不禁水12 h，然后通过眼眶静脉丛采血2 mL，于室温静置1 h，再以3 500 r/min离心15 min，收集上清液，将血清标本放于-20 ℃保存。

1.5.2 血清NO测定 采用化学比色法检测各组大鼠血清NO含量。具体操作如下：双蒸馏水0.1 mL加入空白管，标准应用液(100 μmol/L)0.1 mL加入标准管，血清样本0.1 mL加入测定管，各管分别加入混合试剂0.4 mL，混匀，37 ℃水浴60 min，分别加入试剂三0.2 mL、试剂四0.1 mL(详见说明书)，充分混匀30 s，室温下静置40 min，以3 500 r/min离心10 min，取0.5 mL上清液，再各加入0.6 mL显色剂，混匀，静置10 min，使用蒸馏水调整零度。波长550 nm、0.5 cm光径，测定各组光密度(OD)值，并计算NO含量。计算公式：NO含量=[(测定管OD值-空白管OD值)/(标准管OD值-空白管OD值)]×标准品浓度×样品测试前稀释倍数。

1.5.3 血清AChE测定 采用化学比色法检测各组大鼠血清AChE含量。具体操作如下：测定管加入血清样本0.05 mL、8 μmol/L ACh应用液0.25 mL，对照管加入蒸馏水0.05 mL、8 μmol/L ACh应用液0.25 mL，空白管加入蒸馏水0.30 mL，3个管再分别加入试剂一0.5 mL，混合均匀，37 ℃水浴静置20 min，然后依次加入试剂三应用液1.0 mL、试剂四0.5 mL、试剂五0.25 mL、试剂六0.5 mL(详见说明书)，混匀，以3 000 r/min离心10 min，取上清，空白调整零度。波长520 nm，1 cm光径测定各试管OD值，并计算血清AChE含量。计算公式：AChE含量=[(对照管OD值-测定管OD值)/对照管OD值]×[标准品浓度/8 μmol/L]×[1/取样量]。

1.5.4 离体十二指肠收缩情况 将模型对照组剩余2只大鼠采用脱颈法处死，解剖后将十二指肠取出，剥离肠系膜，置于盛有台氏液的培养皿中，并用台氏液将肠内容物冲洗干净，然后用手术剪将肠管剪成数小段，每段约2 cm，放入离体肠管活动生理记录装置中，一端系于肌肉张力换能器上，另一端系于吊钩上,悬挂于恒温水浴锅内。通入混合气体(5%二氧化碳与95%氧气)，控制水浴恒温(37±0.5)℃，首先加入20 mL台氏液，待肠管的收缩运动状况稳定后，记录其收缩曲线，并计算平均振幅。然后依次加入木香生品和木香麸煨品高、中、低密度(1.0、0.5、0.25 g/mL)药液，每个浓度加药50 μL,给药后观察5 min，分别记录每组胸管的收缩曲线。每次观察完毕后用生化液冲洗肠管3次，待肠管恢复收缩后再进行下一种药物实验。以给药前肠管的平均振幅为标准，给药后各组收缩振幅与其相比得到相对收缩振幅，进行比较。

2 结 果

2.1 各组大鼠灌胃后血清NO含量比较 见表1。

由表1可见，与正常对照组比较，模型对照组灌胃后血清NO含量明显升高，比较差异有统计学意义(P<0.05)。与模型对照组比较，仅莫沙必利对照组灌胃后血清NO含量明显下降，比较差异有统计学意义(P<0.05)，木香生品和木香麸煨品高、中、低剂量组与模型对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。

组 别nNO正常对照组1030.06±3.20模型对照组1035.26±5.24∗莫沙必利对照组1022.84±2.57△木香生品高剂量组1034.86±9.82木香生品中剂量组1033.49±4.89木香生品低剂量组1032.42±6.51木香麸煨品高剂量组1026.51±4.38木香麸煨品中剂量组1029.94±6.13木香麸煨品低剂量组1033.86±12.91

与正常对照组比较，*P<0.05；与模型对照组比较，△P<0.05

2.2 各组大鼠灌胃后血清AChE含量比较 见表2。

组 别nAChE正常对照组10128.09±40.92模型对照组1088.89±10.20∗莫沙必利对照组10126.84±11.83△木香生品高剂量组10118.13±24.54△木香生品中剂量组10109.56±21.31△木香生品低剂量组10105.96±21.16木香麸煨品高剂量组1085.42±39.26木香麸煨品中剂量组10113.60±36.14木香麸煨品低剂量组10110.04±32.73

与正常对照组比较，*P<0.05；与模型对照组比较，△P<0.05

由表2可见，与正常对照组比较，模型对照组灌胃后血清AChE含量明显下降，比较差异有统计学意义(P<0.05)。与模型对照组比较，莫沙必利对照组、木香生品高剂量组和木香生品中剂量组灌胃后血清AChE含量明显升高，比较差异均有统计学意义(P<0.05)，但木香生品低剂量组和木香麸煨品高剂量组、木香麸煨品中剂量组、木香麸煨品低剂量组与模型对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。

2.3 各组大鼠离体十二指肠相对收缩振幅比较 见表3。

组 别n相对收缩振幅模型对照组2100.0±11.6木香生品高剂量组2130.0±10.5∗木香生品中剂量组2125.0±17.0木香生品低剂量组2119.0±15.1木香麸煨品高剂量组2123.0±18.1木香麸煨品中剂量组2120.0±9.7木香麸煨品低剂量组2115.0±10.1

与模型对照组比较，*P<0.05

由表3可见，与模型对照组比较，木香生品高剂量组大鼠离体十二指肠相对收缩振幅明显增强，比较差异有统计学意义(P<0.05)。木香生品中剂量组、木香生品低剂量组和木香麸煨品高剂量组、木香麸煨品中剂量组、木香麸煨品低剂量组大鼠离体十二指肠相对收缩振幅与模型对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。

3 讨 论

胃肠道运动是消化系统最基础的生理功能，其调节机制主要包括肠神经系统、中枢神经系统的神经调节和胃肠激素的体液调节[6]。胃肠动力障碍性疾病是临床常见的胃肠道疾病，主要包括功能性消化不良、胃食管反流、肠易激综合征、慢性便秘等，主要表现腹胀、腹痛、恶心、呕吐、腹泻、便秘等[7]。现代医学研究表明，胃肠动力障碍的发生与神经系统功能紊乱、免疫因素、胃肠激素、胃肠道炎症、内脏高敏感状态等多种因素相关，临床多以对症治疗为主[8]。NO属于细胞外信息分子，广泛分布于胃肠道，是胃肠道中一种新型的生物信息抑制性递质，与胃肠道生理、病理活动具有密切关系，此外对神经系统、心血管系统及免疫系统也具有调节作用[9-10]。在一氧化氮合酶(NOS)的作用下，体内多种细胞均可以生成NO，效应细胞在NO及其他相关信号分子的作用下，可促进环磷鸟嘌呤核苷(cGMP)及环磷酸腺苷(cAMP)浓度升高，产生超极化作用的平滑肌细胞，进而减少钙离子的内流，增加钙离子在肌质网的摄取,起到舒张消化道平滑肌的作用，另外NO还可直接作用于肌细胞抑制胃动素及ACh的释放，松弛平滑肌，减弱胃肠蠕动，且对胃肠移行性复合运动也有抑制作用[11-13]。ACh是一种神经递质，主要存在于胆碱能神经末梢突触间隙，运动神经终板突触后膜的皱褶中聚集较多，能特异性地作用于各类胆碱受体，可与胃肠道平滑肌表面的M受体结合，引起胃肠道平滑肌收缩，从而促进胃及十二指肠运动，加快胃排空[14-15]。AChE是ACh的水解酶，可在胆碱能突触间对ACh进行降解，进而终止神经递质对突触后膜的兴奋作用，避免受体细胞膜持续去极化而造成的传导阻滞，保证神经信号传递，临床上常通过检测AChE水平变化来反映ACh水平变化情况，其含量与ACh呈正相关[16-17]。

中医学认为，胃肠动力障碍性疾病属脾胃病范畴，基本病机为脾胃失调，气机失常，采用相应的中医药治疗疗效确切，具有副作用小、选择面广等优点[18]。木香是临床常用的传统中药材，具有行气止痛、调中导滞、健脾消食的功效，《本草纲目》言其“主心腹一切滞气。和胃气,泄肺气,行肝气。凡气郁而不舒者,宜用之”。现代药理研究表明，木香对胃肠道运动具有兴奋和抑制的双向调节作用，不同的给药剂量、不同的提取部位都可产生不同的药理作用，在某一剂量范围内能增强实验动物的胃肠运动，另一剂量范围又会产生抑制胃肠运动的作用[19]。脾虚证是指脾气虚损引起的一系列脾胃功能失常的表现。相关研究表明，脾虚模型动物的胃肠道运动明显减弱[20]，因此我们通过建立脾虚模型进一步研究木香生品和麸煨品对胃肠运动的影响。本实验结果显示，模型对照组造模后血清NO含量较正常对照组明显升高(P<0.05)，AChE含量明显降低(P<0.05)，表明脾虚大鼠的胃肠活动功能受到抑制，胃肠活动明显减弱。与模型对照组比较，阳性药物莫沙必利对照组大鼠血清NO含量明显下降(P<0.05)，AChE含量明显升高(P<0.05)，而木香生品和麸煨品高、中、低剂量各组中仅木香生品高、中剂量组血清AChE含量明显升高(P<0.05)，提示木香生品高、中剂量组对胃肠运动有兴奋作用。

研究表明，胃肠道的平滑肌具有自动节律性收缩的功能，但作用不规则且收缩缓慢。正常的胃肠道运动还需要受到外来神经和内在神经系统的共同支配，这些神经系统对控制胃肠道运动具有关键性作用[21]。外来神经主要为交感神经和副交感神经，内在神经主要为黏膜下神经丛和肋间神经丛，各个系统相互关联、相互联系，进而共同调节胃肠道平滑肌的腺体分泌和运动[22]。在适宜的条件下，即使已经脱离外来神经的支配，离体肠管仍然具有壁内神经丛及平滑肌收缩的作用，温度、化学物质、牵张刺激等均可对其运动产生影响，可以很好地反映出不同药物对离体肠管的直接作用[23]。本实验结果显示，与模型对照组比较，木香生品高剂量组离体肠管的相对收缩振幅明显更高(P<0.05)，说明高剂量木香生品可促进离体肠管收缩，其余各组也有升高趋势，但比较差异均无统计学意义(P>0.05)。

综上所述，木香对胃肠运动具有兴奋作用，可明显促进胃肠道运动，其中以木香生品高剂量组的效果最明显，这也是木香理气作用的体现，其作用机制可能与升高ACh水平有关，但对NO作用不明显，为木香临床的合理应用提供了参考。