新兴产区和道地产区当归质量评价

黄得栋　王黎　晋玲　马秀娟　孙讨军　张勇

摘要 [目的]通过不同产地当归质量的研究，探讨当归道地产区（岷县）和新兴产区（天祝县、民乐县）的质量差异性。[方法]以甘肃不同产地的15份当归样品为材料，采用HPLC法测定当归样品阿魏酸的含量;采用紫外分光光度法测定当归多糖含量，根据2015版《中国药典》第四部通则中浸出物的含量测定水溶性浸出物和醇溶性浸出物，通过SPSS 21.0软件对其数据进行分析。[结果]新兴产区和道地产区样品水溶性浸出物、醇溶性浸出物无明显差异（P>0.05）;道地产区当归中阿魏酸含量高于新兴产区，而当归多糖含量低于新兴产区。[结论]新兴产区和道地产区当归质量差异不大;该试验为道地产区和新兴产区当归质量评价提供可靠、科学的依据。

关键词 当归;阿魏酸;当归多糖;浸出物;新兴产区;道地产区

中图分类号 R282.5文献标识码 A文章编号 0517-6611（2020）13-0195-03

Abstract [Objective] To study the quality differences of Angelica sinensis from genuine producing area （Minxian） and new producing area （Tianzhu and Minle counties）.[Method]The materials were 15 samples of Angelica sinensis from different areas of Gansu Province，the content of ferulic acid in Angelica sinensis samples was determined by HPLC; the polysaccharide content in Angelica sinensis was determined by ultraviolet spectrophotometry.According to the content of extracts in the fourth general rule of the Chinese Pharmacopoeia of the 2015 edition， watersoluble extracts and alcoholsoluble extracts were determined.The data were analyzed by SPSS 21.0.[Result]There was no significant difference in watersoluble extracts and alcoholsoluble extracts between new producing areas and genuine producing areas （P > 0.05）; the content of ferulic acid in genuine producing areas was higher than that in new producing areas， while the content of polysaccharides in Angelica sinensis was lower than that in new producing areas.[Conclusion]The quality of Angelica sinensis in new producing areas and genuine producing areas has little difference. This experiment provides reliable and scientific basis for the quality evaluation of Angelica sinensis in new producing areas and genuine producing areas.

Key words Angelica sinensis;Ferulic acid;Angelica sinensis polysaccharide;Extract;New producing areas;Genuine producing areas

當归为常用中药材，已有2 000多年的药用历史，素有“十方九归”的美称[1]，始载于《神农本草经》，为伞形科植物当归Angelica sinensis（Oliv.）Diels的干燥根，具有补血活血、调经止痛、润肠通便之功效[2]，主要成分有阿魏酸、藁本内酯及其异构体、多糖等[3]，分布于甘肃、云南、四川等地，其甘肃为道地产区，而岷县的当归已经形成了独特的“岷归”品牌，享誉海内外[4]。

研究表明，当归质量的形成与其产地的环境因子和人文环境等因素密切相关，不同产地的生态环境的差异性是造成当归药材质量差异的重要原因[5]，不同产地的生态因子对当归中有效物质如多糖、核苷、有机酸和挥发油的合成与积累具有重要影响[6]。高文远等[7]采用随机扩增多态性DNA标记（RAPD）技术研究了甘肃岷县、漳县、武都、四川南坪4个产地当归基因组DNA的差异，结果表明，地理位置分布越近，当归的遗传差异越小，反之则大。严辉等[8]通过测定甘肃岷县、云南、四川、湖北等地当归中的挥发油、藁本内酯、阿魏酸、总多糖的含量，运用主成分分析法对当归多指标进行综合评价，结果显示，甘肃产岷归的质量最佳。王亚丽等[9]对甘肃36个产地（岷县、漳县不同产地、武都、康乐县、宕昌县、武山县等）的当归药材进行比较分类，采用高效液相色谱法进行检测，通过对不同产地当归药材的分类比较发现，当归药材质量与其种植环境密切相关。

近年来，随着中药产业的不断发展，中药材的种植已经成为中药发展的必走之路，在传统道地产区不能满足市场需求的情况下寻找药材种植的新兴产区也已变得刻不容缓，在大力发展中药材种植的同时如何保证优质优价，如何保证临床疗效这也是必须思考的问题。甘肃岷县一带作为我国当归的道地产区已有近千年的种植历史，但是随着市场需求的不断增大，岷县一带又因地势地形的天然制约，再加之当归病虫害的不断加重使得当归的产量遭遇空前挑战，在此环境下近年来逐渐出现了一些新兴的当归产区，以此来满足当归产量的市场需求。目前尽管对不同产地的当归质量评价方面研究较多，但是对近年来新兴产区（甘肃省民乐县、天祝县）的研究还鲜见报道。因此，该试验通过测定道地产区及新兴产区当归中阿魏酸、当归多糖、浸出物（水溶性、醇溶性）的含量，对当归的质量进行初步研究，探讨当归道地产区和新兴产区的质量差异性。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样品收集。

样品于2018年10—12月采自甘肃岷县、民乐县、天祝县，置通风阴凉处晾晒至干燥。样品收集具体情况见表1。

1.1.2 仪器。

DGU-20A高效液相色谱仪、SPD-20A检测器、SIL-20A自动进样器、LC-20A泵、CTO-20A注温箱（日本岛津公司）;KQ-500E型超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）;电子天平FA2004（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）;HK-10B型500 g摇摆式粉碎机（广州市旭朗机械设备有限公司）;KQ-500DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）;KL05A型离心机（湖南凯达科学仪器有限公司）;202-0型电热恒温干燥箱（上海浦东荣丰科学仪器有限公司）;UV-2600 220 V紫外分光光度计（日本岛津）;HHS-2S电子恒温不锈钢水浴锅（上海宜昌仪器制造有限公司）;Mb可调式电热板（北京科伟永兴有限公司）;SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵（郑州南北仪器有限公司）。

1.1.3 试剂。

95%乙醇（分析级，莱阳市双双化工有限公司）;乙腈（山东禹王实业有限公司化工分公司）;甲醇（分析级，国药集团化学试剂有限公司）;苯酚（分析级，上海化学试剂有限公司）;浓硫酸（分析级，上海化学试剂有限公司）;甲醇（色谱级，天津市科密欧化学试剂有限公司）;阿魏酸对照品（批号：1135-24-6，上海源叶生物科技有限公司）;葡萄糖对照品（批号：100082-201803，上海药品生物制品鉴定所）。

1.2 方法

1.2.1 阿魏酸的含量测定。

1.2.1.1 色谱条件。色谱柱为ship-pack PV-ODS（150 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙睛-0.085%磷酸溶液（17∶83），流速为1.0 mL/min，柱温为35 ℃，检测波长为316 nm，进样量10 μL。

1.2.1.2 对照品溶液的制备。精密称定阿魏酸对照品3.43 mg，置100 mL棕色容量瓶中，加70%甲醇定容至100 mL，再次稀释，精密量取制备溶液50 mL于100 mL容量瓶中，加70%甲醇定容至100 mL，制成每1 mL含17 μg的溶液，即得。

1.2.1.3 供试品溶液的制备。取本品粉末（过三号筛）约02 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇20 mL，密塞，称定重量，加热回流30 min，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液滤过，取续滤液，即得。

1.2.1.4 方法学考察。对其线性关系、精密度、重复性、稳定性、加样回收率进行试验，结果发现阿魏酸质量分数的 RSD 值均小于 0.5%，符合试验要求。

1.2.1.5 含量测定。对15份当归样品中阿魏酸的含量进行测定，对照品与样品色谱图见图1。

1.2.2 当归多糖的测定。

1.2.2.1 测定条件及方法。参照陈丽萍等[10]正交设计优化当归多糖的定量分析方法进行测定。

1.2.2.2 对照品溶液的配制。精密称取105 ℃干燥至恒重的无水葡萄糖0.101 6 g，置100 mL容量瓶，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，配成质量浓度为1.016 3 mg/mL的葡萄糖对照品溶液，吸取该葡萄糖对照品10 mL，于100 mL容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，即得质量浓度为0.101 6 mg/mL的葡萄糖对照品溶液，保存备用。

1.2.2.3 供试品溶液的制备。取当归的药材粉末（过40目筛）约0.5 g，精密称定，置于250 mL的锥形瓶中，加80%乙醇100 mL，加热回流1 h，趁热抽滤，将滤渣连同滤纸置于250 mL蒸馏瓶中加蒸馏水60 mL，继续加热回流2 h，抽滤，将滤液定容至100 mL容量瓶中，备用。

1.2.2.4 标准曲线的绘制。分别精密吸取葡萄糖对照品水溶液（0.101 6 mg/mL）0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL于10 mL具塞试管中，加入浓硫酸7 mL、苯酚1 mL，以蒸馏水补足试液至刻度，摇匀，沸水浴加热10 min后，立即至冰水中冷却5 min。另以蒸馏水同上平行操作为空白对照组，于483 nm处测定吸光度（A）。以葡萄糖浓度为横坐标、吸光度为纵坐标绘制标准曲线，得出回归方程为Y=5.71x-0.005 9（R2=0.999 2），表明葡萄糖在0.010 16～0.101 60 mg/mL線性关系良好，见图2。

1.2.2.5 样品测定。精密量取1 mL供试品备用液，于483 nm处测定吸光度。

1.2.3 浸出物的含量测定。

按照2015版《中华人民共和国药典》（四部）通则中水溶性浸出物、醇溶性浸出物的含量测定方法测定。

1.3 数据处理

数据经Excel整理后导入SPSS 21.0软件，经one-way ANOVA所得。

2 结果与分析

对新兴产区和道地产区当归样品的阿魏酸、当归多糖、水溶性浸出物和醇溶性浸出物含量测定发现，新兴产区和道地产区样品水溶性浸出物、醇溶性浸出物無明显差异（P>005）;道地产区当归中阿魏酸含量高于新兴产区，而当归多糖含量低于新兴产区（表2）。

3 结论与讨论

道地产区所种药材称道地药材，又称地道药材，是优质纯真药材的专用名词，它是指历史悠久、产地适宜、品种优良、产量宏丰、炮制考究、疗效突出、带有地域特点的药材。岷县是当归的道地产区，试验发现新兴产区和道地产区样品水溶性浸出物、醇溶性浸出物无明显差异（P>0.05）;道地产区当归中阿魏酸含量高于新兴产区，而当归多糖含量低于新兴产区，均符合2015版《中华人民共和国药典》相关项目的规定，该试验从有效成分的角度初步研究了新兴产区和道地产区的差异性，为新兴产区当归的生产提供了一定的试验依据，具体疗效差异还有待临床试验的进一步研究。

参考文献

[1] 刘俊栋，刘海霞，李建基，等.当归多糖对免疫系统作用的研究[J].四川畜牧兽医，2005（3）：34-35.

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S]：北京：中国医药科技出版社，2015：124.

[3] 刘雪东，李伟东，蔡宝昌.当归化学成分及对心脑血管系统作用研究进展[J].南京中医药大学学报，2010，26（2）：155-157.

[4] 葛月兰.当归资源化学评价与质量标准研究[D].南京：南京中医药大学，2009.

[5] 段金廒，肖小河，宿树兰，等.中药材商品规格形成模式的探讨：以当归为例[J].中国现代中药，2009，11（6）：14-17.

[6] 顾志荣，师富贵，王永琦，等.不同产地当归药材质量研究进展[J].甘肃中医学院学报，2014，31（5）：80-83.

[7] 高文远，秦恩强，肖小河，等.当归药材道地性的RAPD分析[J].中草药，2001，32（10）：926-929.

[8] 严辉，段金廒，钱大玮，等.我国不同产地当归药材质量的分析与评价[J].中草药，2009，40（12）：1988-1992.

[9] 王亚丽，唐红霞，朱书强.甘肃不同产地当归的比较分类研究[J].中国中药杂志，2009，34（11）：1390-1394.

[10] 陈丽萍，刘雄，夏鹏飞，等.正交设计优化当归多糖的定量分析方法[J].解放军医药杂志，2015，27（10）：100-102.