天麻提取物配伍刺五加提取物组方对小鼠睡眠的影响

张梦麒　田孟华　张振宇　杨新周

摘 要：目的：研究天麻和刺五加提取物对于改进睡眠质量的作用，为天麻和刺五加改善睡眠保健食品或药品的开发奠定一定的基础。方法：分别以0.05、0.1、0.3g/kg·bw剂量给小鼠连续灌胃30d，采用直接睡眠实验、延长戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠时间实验、戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验、巴比妥钠睡眠潜伏期实验，对小鼠睡眠时间和潜伏睡眠时间等进行观察。结果：经口给予小鼠不同剂量的天麻刺五加提取物30d，末次给药后，与溶媒对照组比较，（1）各剂量组小鼠均未发生睡眠现象;（2）0.3g/kg·bw剂量组小鼠睡眠时间显著增加，具有显著性差异，（3）0.1、0.3g/kg·bw剂量组入睡动物数显著增加，具有显著性差异。（4）0.05g/kg·bw、0.1g/kg·bw剂量组小鼠睡眠潜伏期明显缩短，具有显著性差异。结论：天麻刺五加提取物具有辅助睡眠的功效和缩短睡眠潜伏期的时间，具有改善睡眠质量的作用。

关键词：天麻;刺五加;提取物;改善睡眠

随着社会的不断进步与发展，生活节奏越来越快，人们的生活压力随之增大，加之人们睡前使用电子产品的频率增加，睡眠障碍疾病也随之产生，失眠也逐渐成为临床最常见的睡眠障碍类型。根据第三届世界睡眠大会统计表明，预计到2020年大约有超过7亿失眠者。目前针对失眠多采用一些药物治疗，包括苯二氮□类类受体激动药、褪黑素或褪黑素受体激动剂、具有镇静作用的抗抑郁症药物、某些抗精神病药、有中枢抑制作用的抗组胺药物、中药等进行治疗，长期服用西药类药物容易产生依赖并带来一定的副作用，如出现共济失调、顺行记忆障碍等。因此研究一些药食同源的具有养心安神的药品或保健食品，用于改善失眠症状极为重要。

天麻（GastrodiaeRhizoma）为兰科真菌营养型多年生草本植物天麻（Gastrodiaelata Bl.）的干燥块茎，是我国传统名贵中药材之一，始载于《神农本草经》，位列上品，在中国和东亚国家已有上千年的应用历史。现代药理学研究表明，天麻对预防和治疗中枢神经系统、心血管和免疫系统疾病具有一定功效，临床医学常用于治疗头晕目眩、肢体麻木、癫痫抽搐、小儿惊风、风湿痹痛等症。此外，天麻富含多种营养成分和矿质元素，已广泛用于食品辅料，如“天麻蒸蛋”、“天麻乌骨鸡”和“天麻粥”等。刺五加（Radix AcanthopanacisSemticosi）为我国的传统中药，重点开发的北药之一，益气健脾、补肾安神的功效。现代临床和实验研究表明，刺五加在治疗睡眠障碍提高睡眠质量方面具有独特的优势。

天麻和刺五加均具有安眠镇静的作用，因此，本文根据天麻和五味子的作用，将二者的提取物进行配伍，研究天麻和刺五加提取物对于改进睡眠质量的作用，为天麻和刺五加改善睡眠保健食品或药品的开发奠定一定的基础。

1 实验材料

1.1 实验动物

SPF级KM小鼠，全雌，周龄4～6周，体重18～22g，由广东省医学实验动物中心提供，实验动物生产许可证号：SCXK（粤）2013-0002。实验动物使用许可证：SYXK（滇）K2017-0004，发证单位：昆明市科技局。小鼠于PC飼养盒群养，每日饲喂大小鼠生长繁殖饲料，自由取食，自由饮水。饲养温度为25±2℃，相对湿度40～70%。

1.2 药品与试剂

天麻提取物配伍刺五加提取物（以下简称“天麻刺五加提取物”），两种提取物单独提取，按照1∶2比例进行配伍，人体推荐量为0.5g/60kg·bw（成人）/日。天麻提取物选用干燥的优质天麻块茎，粉碎，加入10倍量的70%乙醇加热回流提取3次，合并提取液，浓缩、干燥所得，每克天麻提取物相当于8.0g生药量;刺五加提取物采用优质刺五加根茎粉碎至约40目，加入10倍量的60%乙醇加热回流提取3次，合并提取液，浓缩、干燥所得，每克刺五加提取物相当于12.0g生药量。

根据天麻刺五加提取物人体推荐剂量，设0.042、0.083、0.25g/kg·bw三个剂量组（根据《保健食品检验与评价技术规范》分别相当于受试样品人体推荐摄入量的5倍、10倍、30倍），采用纯水配制，经口每日1次给予小鼠相应剂量的受试物，小鼠灌胃量为0.1mL/10g·bw。

戊巴比妥钠，Sigma公司分装，批号：20131225、巴比妥钠，上海试剂三厂生产，批号：65001。

1.3 实验仪器

JJ2000型电子天平，常熟市双杰测试仪器厂生产、SQP型电子天平，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司生产、ELGA LA 613超纯水机，英国ELGA LabWater/VWS（UK）Ltd生产。

2 实验方法

2.1 直接睡眠实验

取SPF级KM小鼠48只，随机分为溶媒对照组、天麻刺五加提取物低、中、高剂量组，每组12只，全雄。受试组以0.1mL/10g·bw给药体积灌胃给予相应受试物，溶媒对照组给予等体积纯水，1次/d，连续30d。末次给药后，以小鼠翻正反射消失1min为进入睡眠，翻正反射恢复即为小鼠觉醒判定标准，记录各组入睡动物数及睡眠时间，并对实验结果进行统计学分析。

2.2 延长戊巴比妥钠睡眠时间实验

分组及给药方法同“2.1”。末次给药15min后，各组小鼠均以45mg/kg·bw剂量腹腔注射戊巴比妥钠，注射量为10mL/kg·bw。记录动物翻正反射消失至觉醒的时间为持续睡眠时间（当小鼠置于背卧位时，能立即翻正身位，超过60s不能翻正者，即认为翻正反射消失，进入睡眠。翻正反射恢复即为动物觉醒，翻正反射消失至恢复这段时间为动物睡眠时间），观察受试样品能否延长戊巴比妥钠睡眠时间。比较溶媒对照组与受试物组之间睡眠时间延长的差异，睡眠时间延长有显著性，则实验结果阳性。

2.3 戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验

分组及给药方法同“2.1”。末次给药15min后，各组动物按30mg/kg·bw剂量腹腔注射戊巴比妥钠，注射量为10mL/kg·bw，记录30min内入睡动物数（以小鼠翻正消失1min为睡眠指标）。比较溶媒对照组与受试物组之间入睡动物数的差异，入睡动物数增加有显著性，则实验结果阳性。

2.4 巴比妥钠睡眠潜伏期实验

分组及给药方法同“2.1”。末次给药15min后，各组小鼠均以10mL/kg·bw给药体积腹腔注射巴比妥钠（300mg/kg·bw），记录注射巴比妥钠后至小鼠翻正反射消失时间作为入睡潜伏期（以小鼠翻正消失1min为睡眠指标），观察受试物对巴比妥钠睡眠潜伏期的影响。比较溶媒对照组与受试物组之间睡眠潜伏期的差异，睡眠潜伏期缩短有显著性，则实验结果阳性。

2.5 试验数据统计分析

入睡潜伏期、睡眠时间为计量资料，用SPSS17.0软件对各试验原始数据进行方差齐性检验，满足方差齐要求的数据资料，用单因素方差分析方法中多个试验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理;对非正态分布或方差不齐的数据资料进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换所得的数据进行统计处理。入睡动物数为计数资料，用X2检验进行数据统计。

3 实验结果

3.1 对直接睡眠的影响

实验结果如表1所示：经口给予小鼠不同剂量的天麻刺五加提取物30d，末次给药后，各组小鼠均未发生睡眠现象。天麻刺五加提取物0.05、0.1、0.3g/kg·bw剂量对小鼠均无直接睡眠作用。

3.2 天麻刺五加对延长戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠时间的影响

实验结果如表2所示：经口给予小鼠不同剂量的天麻刺五加提取物30d，腹腔注射戊巴比妥钠，观察小鼠的睡眠时间。睡眠时间经方差齐性检验，满足方差齐性要求，用单因素方差分析中多个实验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理，与溶媒对照组比较，0.3g/kg·bw剂量组小鼠睡眠时间显著增加，具有显著性差异（P<0.05）。

3.3 天麻刺五加提取物对戊巴比妥钠阈下剂量催眠的影响

实验结果如表3所示：经口给予小鼠不同剂量的天麻刺五加提取物30d，腹腔注射戊巴比妥钠，观察30min内各组小鼠睡眠发生率。入睡动物数用X2检验进行统计处理。与溶媒对照组比较，0.1、0.3g/kg·bw剂量组入睡动物数显著增加，具有显著性差异（P<0.05）。

3.4 天麻刺五加提取物对巴比妥钠睡眠潜伏期的影响

实验结果如表4所示：经口给予小鼠不同剂量的天麻刺五加提取物30d，腹腔注射巴比妥钠，观察小鼠的睡眠潜伏期。睡眠潜伏期经方差齐性检验，满足方差齐性要求，用单因素方差分析方法中多个实验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。与溶媒对照组比较，0.05g/kg·bw、0.1g/kg·bw剂量组小鼠睡眠潜伏期明显缩短，具有显著性差异（P<0.05）。

4 讨论

本文參照《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）的要求，采用4个实验对天麻刺五加提取物的改善睡眠作用进行研究。其中，直接睡眠实验对受试物的直接催眠作用进行研究;延长戊巴比妥钠睡眠时间实验主要是研究受试物与戊巴比妥钠的协同作用;戊巴比妥钠通过肝酶代谢，若受试物对肝酶具有抑制作用，亦可延长戊巴比妥钠睡眠时间，因此，为了排除干扰，进行戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验，如果入睡动物数显著增加，可说明受试样品与戊巴比妥钠（阈下剂量）具有协同作用;巴比妥钠睡眠潜伏期实验是在巴比妥钠催眠的基础上，观察受试样品能否缩短入睡潜伏期，若睡眠潜伏期缩短，则说明受试样品与巴比妥钠有协同作用。

目前，对天麻、刺五加在改善睡眠方面的研究较多，但对两者进行配伍后的研究较少。在本实验条件及所设计的剂量范围内，天麻刺五加提取物0.3g/kg·bw可明显增加戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠时间，0.1和0.3g/kg·bw剂量可明显增加戊巴比妥钠诱导的小鼠入睡数量，且呈现出明显的剂量-效应关系;天麻刺五加提取物0.1和0.3g/kg·bw剂量组小鼠睡眠潜伏期明显缩短。上述结果表明，天麻刺五加提取物具有改善睡眠的保健功能。同时，实验中发现天麻刺五加提取物各剂量组对小鼠均无明显直接睡眠作用。

综上所述，根据《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）中的判定标准，本实验条件及剂量范围内，天麻刺五加提取物具有改善睡眠功能作用，且不具有直接睡眠作用，其催眠作用弱于镇静催眠药物，其改善睡眠作用的机制，还需进一步深入研究。

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