深圳地区血红蛋白E的血液学特征调查*

阚丽娟，蔡钦泉，覃俊龙，陈亚琼，张丽军，莫云均，李 悦，张秀明，李育敏

(广东省深圳市罗湖区人民医院医学检验科，广东深圳 518001)

血红蛋白疾病分为异常血红蛋白病和珠蛋白生成障碍性贫血(以下简称地贫)两大类，前者是由于珠蛋白基因缺陷导致血红蛋白结构改变所致，后者则是由血红蛋白含量(Hb)改变引起[1]。血红蛋白E(HbE)是我国南方地区最常见的异常血红蛋白之一[2-4]，其分子基础为β珠蛋白基因第26位密码子发生点突变(GAG→AAG)，导致β珠蛋白链该位点赖氨酸取代谷氨酸，从而产生结构变异的HbE。由于该密码子靠近外显子与内含子的拼接部位，发生碱基替换后激活了邻近的隐蔽切接点，造成mRNA前体加工障碍，导致β珠蛋白基因表达减少，因此在功能上属于β+地贫。不同性别及年龄段血液学指标参数存在差异，本研究按年龄段分别分析成人、儿童及新生儿HbE的血液学特征，并按性别分类统计成人HbE的血液学参数，为HbE病和β地贫的筛查提供系统、详细的临床血液学表型参考资料。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择2016年6月至2019年5月本院门诊和住院进行血红蛋白检测的受试者为调查对象。本研究受试者共72 397例。采集EDTA-K2抗凝外周静脉全血2 mL，2～8 ℃保存，用于红细胞参数和血红蛋白电泳分析，以及地贫基因检测。

1.2仪器与试剂 红细胞参数分析采用XN-1000血细胞分析仪(日本Sysmex公司)，血红蛋白分析采用Capillarys2全自动毛细管电泳仪(法国Sebia公司)，试剂均为厂家原装配套试剂。地贫基因检测采用T960扩增仪(中国黑马公司)、ChemiDocTMMP全自动凝胶成像分析仪(美国Bio-Rad公司)、DYY-6C型电泳仪(中国北京六一仪器厂)、YN-H16恒温杂交仪(深圳亚能公司)，试剂购自深圳亚能生物技术有限公司。

1.3方法

1.3.1血液学分析 采用全自动血细胞分析仪进行各项红细胞参数分析，分析指标为Hb、平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)。采用毛细管电泳法进行血红蛋白分析，鉴别Hb条带类型及分析各条带所占相对比例。以上检测均按照试剂盒说明书进行。

1.3.2地贫基因检测 采用跨越断裂点聚合酶链反应(Gap-PCR)法检测3种中国人群常见的缺失型α地贫基因(--SEA、-α3.7和-α4.2)和3种罕见缺失型β地贫基因：中国台湾型、中国型[Gγ+(Aγδβ)0]和东南亚型(SEA-HPFH)。采用PCR结合反向点杂交(PCR-RDB)法检测常见的3种非缺失α地贫基因(αQS、αCS、αWS)和17种β地贫基因点突变类型(-28、-29、CD17、CD41-42、CD43、βE、CD71-72、IVS-Ⅱ-654、-32、-30、CAP、Initiation condon、CD14-15、CD27-28、IVS-Ⅰ-1、IVS-Ⅰ-5、CD31)。按照试剂盒说明书进行以上操作及结果判读。

2 结 果

2.1基因型分析 检出HbE共计76例，发生率为0.105%(76/72 397)，包括73例HbE杂合子，其中成年男性24例，成年女性34例，儿童7例，新生儿8例。3例HbE复合α、β地贫，均为成人，其中HbE复合α地贫2例，为HbE复合αWS杂合子和HbE复合-α3.7纯合子，HbE复合β地贫1例，为HbE复合Gγ+(Aγδβ)0。

2.2血液学表型分析 成人单纯HbE杂合子、HbE复合αWS杂合子对血液学表型影响较轻，表现为Hb正常，MCV和MCH轻度降低，各年龄段及性别具体血液学指标分析见表1。HbE复合-α3.7纯合子表现为轻型地贫，MCV和MCH降低；HbE复合Gγ+(Aγδβ)0表现为中间型β地贫，MCV和MCH明显降低，HbE和HbF明显升高，见表2。新生儿HbE杂合子毛细管电泳分析结果为血红蛋白A(HbA)(7.5±1.5)%、血红蛋白F(HbF)(90.2±2.0)%和HbE (2.6±0.7)%，见表3。

表1 单纯HbE杂合子的血液学表型

表2 HbE复合α、β地贫的基因型与血液学表型

表3 8例新生儿HbE杂合子的毛细管电泳结果(%)

3 讨 论

HbE主要分布于我国长江以南及沿海地区。秦良谊[2]早期调查显示HbE以云南最多见，在广东和广西的β链异常血红蛋白分布中也主要为HbE，但携带率较云南低，而近年报道广西地区人群HbE的携带率高达0.5%[3]。广东梅州地区HbE的携带率为0.118%[5]，韶关地区为0.072%[6]，笔者前期也报道深圳地区为0.130%[7]，本次纳入更多的样本研究表明为0.105%，高于韶关地区。秦良谊[2]认为HbE的地域分布可能与疟疾有关，在曾流行过疟疾的地区其发生频率明显高于其他地区，说明HbE携带者可能对疟疾有较强的抵抗力，带有HbE的红细胞不利于疟原虫生长。

HbE携带者的血液学表型取决于其基因型，单纯HbE杂合子可无贫血及临床症状[3,8-9]。根据我国《地中海贫血预防控制操作指南》[1]，地贫筛查包括红细胞参数和血红蛋白分析，前者观察指标为MCV和MCH。鉴于成年男性、女性及儿童红细胞参数的参考区间不同，且进行地贫筛查的很大部分成年女性处于妊娠期，孕期由于营养需求增加以及血液稀释，存在生理性贫血的可能，因此本研究对HbE杂合子的血液学表型按性别及年龄段进行了分析。结果表明，各年龄段HbE杂合子对红细胞参数指标的影响较轻，仅表现为MCV和MCH轻度降低，而Hb正常，这提示临床在观察到MCV和MCH降低时，应进一步行血红蛋白电泳分析。李友琼等[3]报道HbE携带者中有部分血液学表型正常，本研究也发现2例HbE杂合子的血细胞分析结果正常，这提示对于地贫筛查应严格按照指南检测血常规和血红蛋白电泳，两者结合分析以避免漏诊。

HbE复合其他地贫类型，其临床表现存在异质性[3-4,8-10]。HbE复合α地贫时，由于α和β珠蛋白基因均表达减少，α链和β链相对平衡，临床症状较轻。HbE复合静止型α地贫，如αWS杂合子的表型同HbE杂合子，而复合标准型α地贫表现为轻型地贫[3,10]。本研究中HbE复合αWS杂合子的血液型表型也同HbE杂合子，而HbE复合-α3.7纯合子的红细胞参数较HbE杂合子低，但HbE水平也较HbE杂合子低，与李友琼等[3]报道的HbE复合--SEA杂合子相符合，但与张桂青等[10]报道存在差异。这一方面可能与血红蛋白分析检测方法不同有关，另一方面表明HbE复合α地贫的临床表型存在异质性，这也提示临床在血红蛋白疾病筛查时必须结合血红蛋白电泳进行分析。HbE纯合子或HbE复合β地贫时，由于两种突变均发生于β珠蛋白基因上，造成β链合成减少或不合成，α链除了形成HbF和血红蛋白A2(HbA2)外，其余形成包涵体附着于红细胞膜，导致红细胞在骨髓或脾内被破坏。HbE复合β地贫的病理生理机制较为复杂，具有高度异质性，对于不同或同一突变基因型，其临床表现都可能存在差异，大部分表现为中间型或重型地贫，也有表现为轻型地贫的报道[3-4,8-10]。本研究发现1例HbE复合中国型β缺失[Gγ+(Aγδβ)0]，其血液学表型符合中间型β地贫的特征[1]。

脐带血血红蛋白电泳分析在新生儿地贫筛查中具有重要作用，较传统的红细胞脆性试验及血细胞分析筛查效果更佳[11-12]。本研究分析8例新生儿HbE杂合子的电泳结果，其HbE水平均较低，为(2.6±0.7)%，最低为1.4%。由于HbE电泳条带位置与HbA2非常接近，且毛细管电泳检测灵敏度高，新生儿HbA2通常在0.1%～1.0%，因此临床应注意区别HbE与HbA2条带，必要时询问父母基因型，并进一步行地贫基因检测。

综上所述，深圳地区人群HbE的携带率较高，以杂合子为主，检测HbE对产前筛查和产前诊断具有重要指导意义。临床医师和检验医师应重视HbE的临床血液学特征，熟悉基因型与血液学表型的相关规律。