瑶药冻你美的生药鉴别

龙莉 黄琳芸 黄瑞松

【摘 要】 目的：对瑶药冻你美真伪鉴别提供技术支撑。方法：采用性状鉴别、显微鉴别和薄层鉴别的方法。结果：茎圆柱形，有纵棱，节间膨大，多分枝;卷须二歧分叉，与叶对生;叶展平后为鸟足状复叶，小叶5;根、茎、叶黏液细胞含草酸钙针晶束，茎薄壁细胞有草酸钙簇晶。叶上、下表皮均有非腺毛。粉末可见非腺毛、草酸钙针晶束、草酸钙簇晶、纤维、具缘纹孔导管和螺纹导管。TLC色谱图中，11批样品与对照药材在相同位置显相同颜色的荧光斑点。结论：本方法稳定可靠，可作为瑶药冻你美药材鉴别真伪的依据。

【关键词】 冻你美;性状鉴别;显微鉴别;薄层鉴别

【中图分类号】R931   【文献标志码】 A    【文章编号】1007-8517（2020）10-0065-04

Abstract：Objective Provide technical support for the authenticity of Cayratia japonica（Thunb.） Gagnep.Methods The methods of character identification，micro-scipic identification，thin layerchromatography identification were used tostudy.Results Stem cylindrical， with longitudinal ribs， enlarged internodes， multibranched; tendril bifurcated， opposite to leaves;After the leaves are flattened， there are bird-foot compound leaves，leaflets 5，stem ，and leaf mucous cells contain calcium oxalate needle crystal bundles， and thin-walled stem cells have clusters of calcium oxalate.There are non-glandular hairs on the leaves and epidermis.Non-glandular hairs， calcium oxalate needle clusters， calcium oxalate clusters， fibers， bevelled ducts， and threaded ducts visible in powder.TLC chromatogram，eleven batches of samples showed the same color fluorescent spots at the same position as the control herbs.Conclusion This method is stable and reliable， It can be used as a basis for authenticity of Cayratia japonica（Thunb.） Gagnep.

Keywords：Cayratia japonica（Thunb.） Gagnep.;Trait Identification;Microsco-pic Identification;Thin Layer Identifcation

瑶语所称“冻你美”或“巴腩美”，民间也称为“母猪藤”，俗名红冻你美、母猪菜、五叶藤、止血藤等。植物来源为葡萄科植物乌蔹莓Cayratia japonica（Thunb.） Gagnep.，广西金秀、恭城瑶族民间多以全草作为药材使用。瑶医认为，冻你美味酸、苦，性寒;属风药，具有清热利湿、解毒消肿、活血止血、利尿的作用，主要用于治疗肺痈、肺痨咯血、尿路感染、血尿、尿浊、黄疸肝炎、痛症、无名肿毒、腮腺炎及风湿骨痛、痢疾、跌打损伤、骨折、痈肿疮疖、无名肿毒、乳痈[1～2]。近年来研究表明，冻你美含黄酮类、内脂类、香豆素类和咖啡酸类等多种成分[3]。但有关其生药鉴别的方法目前未见有报道，给临床用药造成一定的混乱。为科学辨别瑶药冻你美药材的真伪，确保其临床用药的安全有效，本研究对瑶冻你美进行了药材生药学方面的研究，建立了该药材性状、显微和薄层鉴别的方法，为该药材质量标准的制订提供了技术支撑。

1 材料与仪器

1.1 材料 样品采自南宁市武鸣区、靖西市城区等地区，样品信息表见表1。所用样品经我院黄瑞松主任药师、广西中医药大学韦松基教授、广西中医药研究院黄云峰副研究员鉴定，为葡萄科植物乌蔹莓Cayratia japonica（Thunb.） Gagnep.

1.2 仪器 徕卡切片机（德国）、摇摆式粉碎机（浙江）、尼康高级生物显微镜及视频成像装置（日本）、数控超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司）、紫外分析摄影仪（武汉药科新技术开发有限公司）。

1.3 试剂 稀甘油（广东光华科技股份有限公司）、水合氯醛（天津市大茂化学试剂厂）、无水乙醇（国药集团化学试剂有限公司）、二甲苯（国药集团化学试剂有限公司）、石蜡（国药集团化学试剂有限公司）、藏红T（国药集团化学试剂有限公司）、固绿（国药集团化学试剂有限公司）、中性树胶（中国上海标本模型厂），薄层所用化学试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 性状鉴别 通过看、摸、闻、尝及水试、火试的直观方法观察药材的形状、大小、色泽、表面、质地、气、味等特征。通过对11批药材进行观察，药材性状为根圆柱形，扭曲，直径可达2～3 cm，表面棕褐色至黑褐色，有纵皱纹，质疏松，易折断，断面浅白色至黄白色。茎圆柱形，有纵棱纹，绿色至黄绿色，有分支，质轻脆易折断，折断面髓部明显，类白色，海绵状或中空。卷须二岐分叉，与叶对生。叶皱缩易碎，深绿色或黄绿色，完整者展平后呈鸟足状5小叶，中央小叶長椭圆形或椭圆披针形，长2.5～4.5 cm，宽1.5～4.5 cm，侧生小叶椭圆形或长椭圆形，长1～7 cm，宽0.5～3.5 cm，边缘具疏锯齿;叶柄长1.5～10 cm，中央小叶柄长0.5～2.5 cm，侧生小叶无柄或有短柄，侧生小叶总柄长0.5～1.5 cm。气微清香，味淡。见图1。

2.2 显微鉴别 选取具代表性根、茎、叶，用FAA固定液固定24 h。取出进行软化处理，脱水，浸蜡，切片，染色和封固备用。将全株药材打成粉末，取适量药材粉碎过五号筛后按粉末制片法制作粉片，所有制片置于Ni-U尼康高级生物显微镜及视频成像装置观察并拍摄成像。

2.2.1 根横切面 呈不规则棱形，木栓层细胞数列，扁方形，有的已经脱落。栓内层窄，细胞类圆形，在棱角处有的有2～3个异型维管束分布。外韧型维管束环状，韧皮部较宽，韧皮射线呈喇叭状延伸至皮层，韧皮薄壁细胞与韧皮纤维相间排列。束间形成层明显。木质部较宽，导管单个或几个相连放射状分布，直径30～200 μm，木射线细胞4～20余列。含草酸钙针晶束的黏液细胞广泛分布于皮层、韧皮部及射线组织中。见图2。

2.2.2 茎横切面 呈六棱状或不规则多棱形，表皮细胞1列，方圆形。皮层窄，棱角处有厚角组织分布，有的薄壁细胞内有棕黄色分泌物。外韧型维管束数个排列成环，维管束上方有大小不一的纤维束环状排列;韧皮部较宽，韧皮薄壁细胞内有的有棕黄色分泌物;木质部由木薄壁细胞、导管和木纤维组成，导管单个或几个相连放射状分布，直径20～180 μm，射线细胞3～10余列。髓部较宽，细胞类圆形。本品有的薄壁细胞内存在草酸钙簇晶，直径12～21 μm，黏液细胞含草酸钙针晶束，广泛分布于皮层、髓部及射线组织中。见图3。

2.2.3 叶横切面 上下表皮细胞1列，长方形或方圆形，上、下表皮均有非腺毛;栅栏组织细胞1列，不通过主脉。主脉维管束1～7个，上方单个的维管束较小，外韧型，木质部导管几个相连放射状排列，韧皮部较窄。中脉上下有2～3列厚角组织细胞。上表皮中脉尖凸，下表皮中脉凸出。中脉周围及叶肉组织内有含草酸钙针晶束的黏液细胞散在。见图4。

2.2.4 粉末鉴别 粉末灰绿色。纤维成束或分离，先端圆钝或折断，纤维壁较薄，直径15～25 μm。非腺毛由2～10余个细胞组成，稍弯曲，壁薄，长12～395 μm，直径18～33 μm。草酸钙针晶束较多，成束散在或存在于黏液细胞内，针晶长 80～160 μm;草酸钙簇晶散在或存在于薄壁细胞内，直径6～65 μm。导管为具缘纹孔导管和螺纹导管，直径30～120 μm。见图5。

2.3 薄层鉴别 取11批本品样品粉末各0.5 g，加50%乙醇10 ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加95%乙醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取冻你美对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2015年版四部0502）试验，吸取供试品溶液0.5～2 μL，对照药材溶液2 μL分别点于同一聚酰胺薄层板上，以冰醋酸-水（5∶ 5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铝乙醇溶液，热风吹干，置紫外光灯（365 nm）下检视。在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主荧光斑点。见图6。

3 讨论

冻你美在是广西瑶族民间常用药材。为了确保该药材临床用药的安全有效，有必要建立药材质量标准。本实验对冻你美进行生药学鉴别研究。所建立的性状、显微、薄层鉴别方法操作简便易行，实验结果稳定可靠，专属性和重现性好，可作瑶药冻你美鉴别真伪的依据。

通过以上实验结果表明，药材性状鉴别点为卷须二歧分叉，与叶对生;叶皱缩，展平后为鸟足状复叶，小叶5。显微鉴别点为根、茎、叶的黏液细胞含草酸钙针晶，茎薄壁细胞存在草酸钙簇晶。粉末呈灰绿色。有非腺毛，草酸钙针晶束较多，成束散在，或于黏液细胞内;草酸钙簇晶散在或存在于薄壁细胞内。陆大忠[4]、李晓晨[5]、郭琰[6]、王太霞[7]分别对乌蔹莓茎、叶进行显微鉴别，肖文[8]对乌蔹莓根、茎进行显微鉴定研究，实验结果均表明乌蔹莓根、茎、叶黏液细胞含有草酸钙针晶。本研究发现冻你美根、茎、叶黏液细胞含有草酸钙针晶，与文献报道一致。陈慧浓[9]曾报道乌蔹莓含黄酮类成分。本研究首次对乌蔹莓黄酮类成分进行薄层鉴别。薄层鉴别中，11批药材与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主荧光斑点。实验结果稳定可靠，专属性好，可作为其薄层鉴别的依据。参考文献

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[5]李晓辰，杨袆，陈可儿.绞股蓝与其混淆品乌蔹莓的鉴别[J].浙江中西医结合杂志，2010，20（11）：712-713.

[6]郭琰，胡颖军.绞股蓝与乌蔹莓的鉴别比较[J].吉林中医药，2004（4）：48-49.

[7]王太霞，李金亭，李景原，等.绞股蓝与乌蔹莓药用部分的显微鉴别[J].中草药，2003（5）：84-86.

[8]肖文.乌蔹莓根茎的显微鉴定研究[J].时珍国医国药，2001（7）：609.

[9]陈慧浓.绞股蓝与乌蔹莓的鉴别研究[J].浙江中医杂志，2009，44（4）：302-303.

（收稿日期：2020-04-01 编辑：刘斌）