尘肺患者高毒力肺炎克雷伯菌分析

洪晓平 胡顺生

（国家电网公司职业病防治院检验科 浙江 建德 311600）

1.材料与方法

1.1 菌株来源

收集2017 年1 月—2019 年8 月期间来自全国各地到本单位休养的矽肺患者痰培养中肺炎克雷伯菌菌株，随机选送21 株肺炎克雷伯菌样本。

1.2 试剂与仪器

梅里埃ATB、ATB 鉴定板条和药敏板条；梅里埃哥伦比亚血琼脂平板；聚合酶链反应（PCR)试剂盒(日本Takara)，小量质粒抽提试剂盒（美国Axygen公司），PCR扩增仪及紫外线成像系统，DYY-11 型电泳仪。

1.3 PCR 检测毒力基因

利用煮沸法提取DNA 模板。50ulPCR 体系为4 种dNTP 终浓度各位200umol/L、引物终浓度各为0.4umol/L、纯化扩增K1K2K5K20K54K57，rmpA、magA、magA。

2.结果

21 株肺炎克雷伯菌毒力实验中，高毒力基因rmpA 阳性率为85.7%（18/21），aeroA 阳性率为95.2（20/21），magA 阳性率为28.6%（6/21）。荚膜分型以K1/K2/K57 为主占66.7%（14/21），K5、k20、K54 均为1 株，还有4 株不属于所检测的6 个型别中，见表。

表 21 株肺炎克雷伯菌毒力基因检测和荚膜分型

3.讨论

矽肺病人是以尘肺组织弥漫性纤维化为主的全身性疾病，粉尘对肺组织的一系列毒性损害，导致巨噬细胞死亡，最终引起肺广泛性纤维化改变，这些病理改变使呼吸系统的清障、自净功能下降，机体免疫功能减退，极易引起肺部细菌感染。

随机选送的21 株肺炎克雷伯菌经PCR 检测均为高毒力肺炎克雷伯菌，由此可以推断矽肺患者的肺炎克雷伯菌也应该以产高毒力为主，究其原因可能是矽肺患者由于本身受粉尘损害导致肺部纤维化的改变，从而更易得高毒力肺炎克雷伯菌的定植，对周薇、黄文芳等人提出的高毒力型肺炎克雷伯菌感染是否具有地域易感性还是体质易感性[1]这一观点的进一步补充。

我们对随机选送的21 株肺炎克雷伯菌进行常见的K1、k2、k5、K20、K54、k57 基因扩增检测，发现以K1/K2/K57 为主占66.7%（14/21），K5、k20、K54 均为1 株，还有4 株不属于所检测的6 个型别中，故可推断矽肺患者人群所定植的肺炎克雷伯菌其黏液性极强；已有的研究认为，K1、K2 型肺炎克雷伯菌具有强大的荚膜合成能力，能抵抗吞噬细胞的吞噬作用，具有毒力强的特点，被认为是肝脏侵袭性感染的重要病原菌，故认为此类矽肺患者人群一旦抵抗力低下，其高定植的高毒力性肺炎克雷伯菌立刻会转变为条件致病菌，如果炎症不及时控制，会导致矽肺患者感染严重，并可能会导致死亡。

高毒力肺炎克雷伯菌粘稠性状是荚膜大量合成的结果，与此相关的是黏液表型调控基因rmpa 的表达，rmpa 基因编码Rmpa功能蛋白，辅助荚膜合成，参与对黏液性状的调控。敲除rmpa基因的菌株，荚膜合成能力降低甚至缺失，失去高黏液表型的特征，使致病力降低[2]，而aeroA 基因在高毒力肺炎克雷伯菌的毒力方面也起着重要的作用，本文随机选送的21 株高粘度肺炎克雷伯菌中含rmpa 菌株高达85.7%（18/21），含aeroA 菌株高达95.2%（20/21），由此可见矽肺患者高毒力肺炎克雷伯菌高粘度、高毒力概率均很高。除rmpa 基因外，黏液相关基因magA也与荚膜合成有关，同时magA 基因仅位于K1 型高毒力肺炎克雷伯菌中，也可作为PCR 法检测荚膜血清型K1 的目的基因[3]，而本文中6 株magA 均存在于K1 型中，验证了magA 可以作为检测K1 型的目的基因。

总而言之，矽肺患者是由于吸入生产粉尘导致的广泛性纤维化的肺部疾病，更容易患高毒力肺炎克雷伯菌的高定植，是个不容忽视的群体，临床有此类矽肺患者因感染入院，在抗感染方面应充分考虑其特殊性，加强对患者的治疗，控制严重侵袭性感染的发生。