加格略(重楼)蒸制前后抗胃溃疡药效研究*

张 敏，黄颖雪，李 玮，郑继广，何兰兰，王 令，王小波

(贵州中医药大学，贵州 贵阳 550025)

随着社会的发展，由于饮食节律、工作压力、情志等原因，具有消化道疾病的人群越来越多，尤其以胃溃疡疾病等最为常见。目前，在临床上大多采用西药联合疗法治疗消化道疾病，如奥美拉唑、阿莫西林联合克拉霉素三联疗法治疗幽门螺杆菌胃溃疡[1]，黛力新联合三联疗法治疗伴有焦虑抑郁症消化性溃疡等[2]，其治疗作用较显著，但其对人体的毒副作用较大。

苗药加格略为百合科植物七叶一枝花ParispolyphyllaSmith的根茎，加格略又名重楼、七叶一枝花、灯台七、独角莲，具有清热解毒、消肿止痛的功效，主要用于乳腺炎、胃溃疡、胃出血、子宫颈糜烂等症[3]。现代研究表明，加格略具有抗胃溃疡、镇痛抗炎、抗肿瘤等药理作用[6-11]。苗医药在治疗胃溃疡、胃出血症时采用蒸制品。因此，本研究以胃粘膜损伤、IL-2、IL-6及TNF-α为检测指标，比较蒸制前后加格略抗胃溃疡的差异，挖掘出民族药药用价值，对加格略抗胃溃疡机制及寻找和开发疗效确切、毒副作用小的胃溃疡药物研究具有一定的意义。

1 材料

1.1 实验动物

KM小鼠，SPF级108只，雌雄各半，体重18～20 g，购自长沙市天勤生物技术有限公司，实验动物合格证号：SCXK(湘)2014—0011。

1.2 实验药物及试剂

实验药材购自安顺市宝林科技中药饮片有限公司，经贵州中医药大学药学院魏升华教授鉴定为七叶一枝花ParispolyphyllaSmith的新鲜根茎。

盐酸雷尼替丁胶囊(批号：07019030443，厂家：石药控股集团河北永丰药业有限公司)，购自花溪永康大药房；IL-2 ELisa试剂盒(货号GR-201907-01，武汉基因美科技有限公司)；IL-6ELisa试剂盒(货号GR-201907-01，武汉基因美科技有限公司)，TNF-αELisa试剂盒(货号GR-201907-01，武汉基因美科技有限公司)，均购自贵州博奥瑞杰生物科技有限公司。组织标本固定液(10%中性甲醛固定液)：多聚甲醛(批号：20180112，国药集团化学试剂有限公司)，苏木素染液(货号：G1005-1，武汉赛维尔生物技术有限公司)，伊红染液(货号G1001，武汉赛维尔生物技术有限公司)，无水乙醇(分析纯，批号：2018年05月30日，天津市富宇精细化工有限公司)。

1.3 实验仪器

TGL-16M高速冷冻离心机(上海卢湘仪集团公司)，Bio-tek-ELx800酶标仪(上海旦鼎国际贸易有限公司)。

2 实验方法

2.1 药液的制备

分别取加格略蒸品和生品极细粉，添加0.5%羧甲基纤维素钠适量溶解，制成浓度分别为0.348 g/mL、0.174 g/mL、0.087 g/mL的药液。取盐酸雷尼替丁，加0.5%羧甲基纤维素钠适量溶解，制成浓度为0.003 g/mL的药液。

2.2 动物分组、给药及模型的建立

SPF小鼠108只，于实验室适应性饲养3天。将其随机分为9组，每组12只，雌雄各半，分别为正常组、模型组、实验药物组、阳性药物组。实验药物组分别以0.2 mL/10g灌胃加格略生品和蒸品药粉高、中、低剂量组，正常组灌胃等量0.5%羧甲基纤维素钠，阳性组灌胃等量盐酸雷尼替丁胶囊药液，连续给药7天，每天1次。第7天给药1 h后，除正常组外，均以1 mL/100g灌胃无水乙醇建立胃溃疡模型。

2.3 检测指标及方法

造模1 h后，对小鼠进行摘眼球取血，血清以4000 r/min 离心(离心半径为7 cm)10 min，取上清液即为血清，按照ELisa试剂盒说明书测定IL-2、IL-6及TNF-α的浓度。小鼠脱颈处死，解剖小鼠，取各主要脏器进行称重。切下全胃，挤出胃内容物离心。将胃先注入冰生理盐水将胃清洗干净，沿胃大弯剪开胃组织，用肉眼和放大镜观察胃粘膜出血、溃疡大小等状况，采用游标卡尺测量溃疡长、宽，计算胃溃疡抑制率[胃溃疡抑制百分率(%)=(模型组胃溃疡指数-给药组胃溃疡指数)/模型组胃溃疡指数×100%，胃溃疡指数(溃疡面积)=溃疡长×溃疡宽。再将胃浸入4%的多聚甲醛组织固定液中固定48 h，固定完成后，根据HE染色方法对胃组织进行切片染色显微镜观察。

2.4 统计分析

采用spss statistics 23.0统计计算软件，以单因素方差分析比较各检测指标是否具有显著性差异。P<0.05表示差异具有统计学意义。

3 结果

3.1 对溃疡面积的影响

肉眼及显微镜观察胃的组织情况，发现模型组具有明显的点状、线性及溃疡面，空白组无明显溃疡，说明胃溃疡模型建立成功。药物组与模型组相比较，药物组的溃疡点数及面积明显减少。

3.2 对胃黏膜病理学形态的影响

空白组胃黏膜结构完整，胃腺排列整齐，腺体底部多见主细胞，呈锥状或柱状，黏膜下层疏松结缔组织内可见血管和神经，未见明显增生。模型组黏膜结构完整，胃腺萎缩，局部胃腺坏死；固有层间质内出血，见红细胞溢出血管散在分布，黏膜下层疏松结缔组织内可见炎细胞浸润。阳性组黏膜结构完整，胃腺排列整齐，黏膜下层疏松结缔组织内可见少量炎细胞浸润。生品低剂量组黏膜结构完整，局部固有层内少量胃腺坏死，黏膜下层疏松结缔组织内可见少量炎细胞浸润。生品中剂量组黏膜结构完整，黏膜下层、肌层及外膜未见明显炎细胞浸润。生品高剂量组黏膜结构完整，胃腺排列较为整齐，胃腺细胞未见明显变性坏死；黏膜下层、肌层及外膜未见明显炎细胞浸润。蒸品低剂量组黏膜结构完整；黏膜层细胞排列较紊乱，部分胃腺细胞坏死，固有层及黏膜下层少量炎细胞散在浸润。蒸品中剂量组，黏膜结构完整，黏膜层细胞排列较紊乱，固有层及黏膜下层少量炎细胞散在浸润。蒸品高剂量组黏膜结构完整；黏膜层细胞较紊乱，固有层及黏膜下层伴有少量炎细胞浸润，黏膜下层、肌层及外膜未见明显炎细胞浸润。见图1。

图1 小鼠胃组织病理切片(HE×100)Fig.1 Pathological sections of the stomachs of mice(HE×100)

3.3 对胃溃疡抑制率的影响

生品高中低剂量组对小鼠溃疡平均抑制率分别为52.86%、25.89%、15.18%，蒸品高中低剂量的平均抑制率分别为48.21%、16.96%、12.33%，阳性的平均抑制率为27.6%。通过各药物组生品与蒸制品相比较，结果表明，生品药物组对溃疡的抑制率较蒸品组高，见表1。

3.4 对小鼠IL-2、IL-6及TNF-α的影响

(1)对IL-2的影响：与模型组比较，空白组浓度降低，差异具有显著性意义(P<0.05)，生品高、中剂量和蒸制品高剂量组IL-2显著降低，具有极显著差异(P<0.01)；与阳性组比较，生品高剂量组IL-2浓度降低，具有显著性差异(P<0.05)。试验结果说明生品高剂量组对IL-2具有较好的抑制率。

(2)对IL-6的影响：与模型组相比较，药物生品和蒸制品高剂量组具有显著性差异(P<0.05)，且生品高剂量组IL-6的浓度小于蒸制品高剂量组，说明生品高剂量组较蒸品高剂量组对IL-6具有更好的抑制作用。

(3)对TNF-α的影响：与模型组比较，生品高、中剂量组，蒸品高剂量组均具有显著性差异(P<0.05)，说明生品高、中剂量，蒸品高剂量对TNF-α均具有较好的抑制作用，且生品高剂量的效果更好；与阳性组相比较，生品高剂量组差异显著(P<0.05)，说明生品高剂量对TNF-α的抑制作用较阳性药物好。见表1。

表1 加格略药材对乙醇致胃溃疡各检测因子的影响(n=12，x±s)Tab.1 Effects of Paris polyphylla on ethanol-induced gastric ulcer(n=12, x±s)

4 讨论

胃溃疡为临床常见的消化性疾病，其主要表现在胃粘膜组织的损伤、胃酸分泌增加、胃出血、炎性因子增加等。诱发胃溃疡的原因主要有外部刺激、情志以及幽门螺旋杆菌感染等。

研究发现，阳性组，生品高、中、低剂量组，蒸品高、中、低剂量组等各药物组动物胃组织病变程度均有不同程度减轻；各用药组中，蒸品高剂量组和低剂量组动物胃组织病变相对较重，生品中、低剂量组和蒸品中剂量组病变程度相对较轻，生品高剂量组和阳性组基本正常。通过药物组与空白组、模型组及阳性组之间IL-2、IL-6、TNF-α的比较，得出加格略生品与蒸制品对乙醇诱导的胃溃疡炎性因子具有一定的抑制作用。

通过加格略生品与蒸制品抗胃溃疡对比研究表明，加格略对无水乙醇胃溃疡的抑制作用主要通过抑制溃疡面积，改善胃黏膜组织损伤，降低IL-2和TNF-a的浓度，减轻胃腺坏死、胃出血及炎细胞浸润等达到抗胃溃疡的效果，其中生品对无水乙醇胃溃疡作用较蒸品强。本研究可为加格略抗胃溃疡机制研究奠定一定的基础。