抗核抗体和抗核抗体谱检测结果分析

夏晓旭 徐思琪*

自身免疫性疾病（AID）是指机体对自身器官、组织、细胞的抗原发生免疫反应，导致自身机体损害而引起的疾病。AID患者血液中存在不同针对自身抗原成分的抗体，即自身抗体，其中最常见的也最重要的自身抗体为抗核抗体（ANA）。ANA是一组将自身真核细胞的各成分作为靶抗原的抗体，主要存在于血清中。ANA谱和ANA同时检测，或用于ANA阳性标本的检测，具有重要的补充诊断价值。本文回顾性分析690例怀疑自身抗体阳性患者，同时进行ANA和ANA谱检测，分析两者的相关性及其在临床疾病中的特征。

1 资料与方法

1.1 临床资料 回顾性分析2018年1月至5月本院检查ANA和ANA谱的门诊及住院标本690例，其中男180例，年龄35～92岁，平均年龄65.89岁；女510例，年龄5～88岁，平均年龄57.08岁。临床诊断为系统性红斑狼疮（SLE）11例，干燥综合征37例，结缔组织病20例，雷诺综合症10例，间质性肺病15例，硬皮病7例，类风湿性关节炎62例，狼疮性肾炎3例，关节病121例，肺部感染155例，痛风29例，血小板减少40例，慢性肾炎45例，风湿病45例，其他疾病（如肌炎、白细胞异常等）90例。所有标本采用患者空腹静脉血，离心后分离血清进行后续实验。

1.2 方法 （1）抗核抗体检测：①操作流程：试剂来源于德国欧蒙（EUROIMMUN）公司抗核抗体IgG检测试剂盒（间接免疫荧光法），货号FC 1510-1010-1，采用间接免疫荧光法检测。每个反应区含有两种抗原基质片：猴肝组织和Hep-2细胞。用PBS缓冲液以1∶100稀释血清，取25µl稀释好的样本加入生物载片，温育30min，PBS缓冲液冲洗、浸泡5min，取20µl FITC标记二抗加入生物载片，温育30min，PBS缓冲液冲洗、浸泡5min，最后用封片介质封片。采用Olympus显微镜观察荧光结果。对1∶100稀释标本荧光强度显示为中等或强阳性的标本进一步行1∶1000稀释，重复上述操作步骤后观察荧光结果。②抗体滴度判断：由经过专业培训的检验技师观察基质片荧光强度，依照试剂说明书对抗体滴度进行判断，所有荧光基质片结果得到另一位经专业培训的主管技师复核。根据欧蒙公司抗核抗体IgG检测试剂盒（间接免疫荧光法）产品说明书有关抗体滴度的判断，可根据不同稀释度血清所产生的荧光强度进行判断，具体如下：若1∶100稀释后荧光阴性，报告ANA“阴性”；1∶100稀释后荧光强度弱阳性，1∶1000稀释后荧光阴性，报告ANA“1∶100阳性”；1∶100稀释后荧光中等，1∶1000稀释后荧光阴性，可推断报告为ANA“1∶320阳性”；1∶100稀释后荧光强，1∶1000稀释后荧光弱阳性，报告ANA“1∶1000阳性”。（2）抗核抗体谱检测：①操作流程：试剂来源于深圳亚辉龙生物科技股份有限公司的抗核抗体谱检测试剂盒，采用免疫印迹法检测。按照试剂盒说明书进行操作，孵育液封闭5min，加入稀释的血清，孵育30min，血清中若含有特异性抗体则会与膜上的抗原结合，经洗涤，加入HRP-IgG孵育30min，洗涤后加入底物液孵育10min，显色后加入终止液。②结果判断：根据条带显色位置判断血清中存在的相应抗体。

1.3 观察指标 根据ANA和ANA谱检测结果，分析ANA滴度在不同疾病中的分布特征、ANA谱检测的特异性抗体与疾病的相关性、不同特异性抗体与ANA滴度是否存在一定的关联及不同疾病ANA阳性率和特异性抗体的检出情况。

1.4 统计学方法 正态性检验采用单样本Kolmogorov-Smirnov检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 ANA滴度在不同疾病中的分布 690例怀疑自身抗体阳性的临床标本中，ANA阳性标本为494例，阳性率71.6%。其中ANA滴度为1∶100阳性标本186例，阳性率27.0%；ANA滴度为1∶320阳性标本90例，阳性率13%；ANA滴度为1∶1000阳性标本218例，阳性率31.6%。见表1。

表1 ANA滴度在部分疾病中的分布［n（%）］

2.2 ANA谱检测特异性自身抗体情况 ANA谱检测特异性自身抗体阳性标本共245例，占总标本数35.5%，其中ANA阳性且ANA谱阳性的标本为235例，占ANA阳性标本数的47.6%；ANA阳性而ANA谱阴性的标本259例，占ANA阳性标本数的52.4%；ANA阴性而ANA谱阳性的标本10例，占总标本数1.4%，主要为抗Ro-52抗体；在ANA谱阳性的标本中多数能检测到抗SSA、Ro-52抗体，其存在无疾病特异性；抗SSB抗体的出现常伴随抗SSA抗体；抗Nucleosome、抗dsDNA抗体仅存在于系统性红斑狼疮患者的血清中；硬皮病、雷诺综合症患者血清中仅检测到抗Cenp B抗体；未能检测到抗PCNA、抗PM-Scl抗体。见表2。

表2 ANA谱检测特异性自身抗体情况及其主要存在的疾病

2.3 ANA滴度与ANA谱的相关性 690例怀疑自身抗体阳性的临床标本中，ANA阴性标本196例，其中10例标本ANA谱阳性，主要抗体为抗Ro-52；ANA阳性标本为494例，其中ANA谱阳性标本235例，主要抗体为抗SSA、抗Ro-52。抗核小体、抗dsDNA、抗组蛋白、抗Sm、抗U1-nRNP抗体阳性标本ANA滴度均较高，多为1∶320或1∶1000；抗Cenp B、抗SSB、抗AMA-M2抗体阳性标本ANA滴度主要也集中在较高水平；抗SSA、抗Ro-52、抗Scl-70、抗Jo-1抗体阳性标本可存在于各种滴度的ANA阳性标本中，无明显ANA滴度分布特征。见表3。

表3 ANA滴度与特异性自身抗体的相关性［n（%）］

2.4 不同疾病中ANA和ANA谱检测分析 系统性红斑狼疮、干燥综合征、结缔组织病、硬皮病等自身免疫性疾病ANA阳性率高；抗核小体抗体、抗dsDNA抗体、抗Sm抗体具有较强的疾病特异性；抗SSA抗体、抗Ro-52抗体可存在于多种疾病，无特异性。见表4。

表4 不同疾病中ANA阳性率和特异性抗体分布特征（%）

3 讨论

当机体免疫自稳功能发生紊乱或外来抗原与自身成分间存在交叉反应等原因时，易刺激机体产生针对自身抗原的抗体（即自身抗体），这些自身抗体会攻击机体自身的器官、组织、细胞而导致机体损害甚至疾病发生。自身抗体可存在于自身免疫性疾病患者体内，如系统性红斑狼疮；亦可存在于其他继发性免疫反应患者体内，如肺部感染；同时，微量自身抗体也能存在于一些正常人血液中，如抗甲状腺球蛋白抗体。

自身抗体尤其是抗核抗体的检测对自身免疫性疾病的诊断、预后评估有重要作用［1］，对某些继发性免疫反应的病情判断亦有着不可忽视的作用。血清学检测ANA已成为临床免疫学检验的一项重要内容。间接免疫荧光法检测ANA是较公认的“金标准”［2-3］，但由于其针对细胞内总抗体进行检测，具有敏感性高而疾病特异性相对较差的特点，间接免疫荧光法检测ANA阳性患者还需进行免疫印迹法检测ANA谱特异性抗体，以协助临床诊断。

本资料显示，690例怀疑自身抗体阳性的标本中，ANA阳性标本494例，SLE、结缔组织病、干燥综合征等自身免疫性疾病ANA滴度多＞1∶100，这与试剂说明书中提及的“ANA滴度1∶320提示患有某种风湿病”相符；肺部感染、慢性肾炎、关节病、痛风等疾病ANA阳性率在45%～60%左右，滴度分布无明显规律；其他如白细胞异常、糖尿病、桥本甲状腺炎等疾病ANA阳性率较低。本资料中ANA阳性率总体较高，可能原因是该阳性率指在ANA阳性疑似患者中的概率，而非在普通人群中的概率。

ANA谱特异性抗体阳性标本为245例，其中ANA阴性而ANA谱阳性标本10例，ANA阳性且ANA谱阳性标本235例，两种方法并不完全一致，不可代替，这与多位学者的报道一致［4-5］。由于间接免疫荧光法检测ANA存在基质片部分抗原分布不均、含量较低的情况，可能导致ANA阴性而ANA谱特异性抗体检测阳性情况出现。因此，中国医师协会风湿免疫科医师分会自身抗体检测专业委员会于2018年出台《抗核抗体检测的临床应用专家共识》［6］，指出“临床检测中存在IIF-ANA阳性而针对靶抗原的特异性自身抗体检测结果阴性，甚至IIF-ANA阴性而针对靶抗原的特异性自身抗体检测结果阳性的情况。因此，当临床高度疑诊AID时，不论ANA总抗体检测结果如何，均需对靶抗原的特异性自身抗体进行检测。”

抗核小体、抗dsDNA、抗Sm、抗U1-nRNP抗体阳性多见于SLE，且标本ANA滴度均较高；雷诺综合症和硬皮病患者抗Cenp B抗体阳性，干燥综合征患者可见抗SSA和抗SSB抗体同时阳性，ANA滴度也多偏高，这与作者对特异性自身抗体的认识相符［7］。有些疾病如结肠炎、胰腺炎、糖尿病、肝功能异常等ANA阳性，但ANA谱阴性，可能原因在其会产生除ANA外的其他自身抗体，但由于目前诊断试剂的特异性不够强，可能会发生交叉反应，而导致ANA阳性，另一个原因在于，患者本身即ANA阳性，需要进一步检查明确病因。

ANA和ANA谱阳性可出现在各种的疾病中，两种方法不能替代，ANA谱特异性抗体检测对ANA检测阳性的标本具有补充诊断作用，同时检测ANA和ANA谱能更好的为临床诊断和评估预后提供帮助。一种疾病可出现多种特异性自身抗体阳性，一种抗体也能出现在多种疾病中，因此当ANA或ANA谱报告阳性时，临床医师还需结合患者其他检查和临床表现进行综合评估。