胸水中EGFR基因突变检测在酪氨酸激酶抑制剂治疗肺腺癌中的应用

赵俊军 李平

【摘要】 目的 探究胸水中表皮生長因子受体（EGFR）基因突变检测在酪氨酸激酶抑制剂治疗肺腺癌中的应用效果。方法 176例突变肺腺癌患者， 采用表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKI）治疗12个月后均复发胸水， 对胸水样本进行收集， 制作胸水细胞块， 提取各样本脱氧核糖核酸（DNA）， 使用人类ADx-EGFR 基因突变检测试剂盒检测胸水中EGFR T790M耐药突变情况， 并对其影响因素进行分析。结果 176例EGFR-TKI治疗耐药患者的胸水样本中， T790M基因突变128例， 占比为72.7%， 无T790M基因突变48例， 占比为27.3%。男性发生T790M基因突变60例（74.07%）， 女性发生T790M基因突变68例（72.29%）;<65岁患者发生T790M基因突变36例（69.23%）， ≥65岁患者发生T790M基因突变92例（74.19%）;吸烟患者发生T790M基因突变47例（73.44%）， 非吸烟患者发生T790M基因突变81例（72.32%）;腺癌患者发生T790M基因突变121例（73.33%）， 非腺癌患者发生T790M基因突变7例（63.64%）;不同性别、年龄、吸烟情况、腺癌患者发生T790M基因突变的占比与非T790M突变患者比较， 差异无统计学意义（P>0.05）。结论 检测胸水样本中EGFR基因状态对于预测EGFR-TKI耐药性具有很好的应用价值， 可为肺腺癌患者的耐药临床监测提供参考。

【关键词】 肺腺癌;酪氨酸激酶抑制剂;表皮生长因子受体;T790M;临床监测

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.25.094

【Abstract】 Objective   To investigate the effect of epidermal growth factor receptor （EGFR） gene mutation detection on lung adenocarcinoma treated with tyrosine kinase inhibitor. Methods   There were 176 patients with mutated lung adenocarcinoma treated with epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor （EGFR-TKI） in our hospital. After 12 months of treatment， all the patients had recurrent pleural effusion. The samples of pleural effusion were collected， and the cell blocks were made. The deoxyribonucleic acid （DNA） of each sample was extracted. The EGFR T790M resistance mutation in pleural effusion was detected by human ADx-EGFR gene mutation detection kit， and the influencing factors were analyzed. Results   In 176 patients with drug resistance treated by EGFR-TKI， 128 cases had T790M gene mutation， accounting for 72.7%， and 48 cases had no T790M gene mutation， accounting for 27.3%. 60 cases （74.07%） of males with T790M gene mutation， 68 cases （72.29%） of females with T790M gene mutation; there were 36 cases （69.23%） of T790M gene mutation in patients <65 years old， 92 cases （74.19%） in patients ≥65 years old; 47 cases （73.44%） in smoking patients， 81 cases （72.32%） in non-smoking patients; 121 cases （73.33%） in adenocarcinoma patients and 7 cases （63.64%） in non-adenocarcinoma patients. There was no statistically significant difference in the proportion of T790M gene mutation between patients with different gender， age， smoking and adenocarcinoma compared with those without T790M mutation （P>0.05）. Conclusion   The detection of EGFR gene status in pleural fluid samples has a good application value in predicting the resistance of EGFR-TKI， and can provide a reference for clinical monitoring of drug resistance in patients with lung adenocarcinoma.

【Key words】 Lung adenocarcinoma; Tyrosine kinase inhibitor; Epidermal growth factor receptor; T790M; Clinical monitoring

肺癌是一种严重影响人类生命健康的疾病之一， 目前已成为世界上发病率和死亡率最高的恶性肿瘤。肿瘤病因及发病机制尚未完全阐明， 但从肿瘤细胞学来看， 肺癌发生的本质在于细胞增殖和凋亡的调节失控。积极寻找特效和低毒的抗肿瘤药物是人类面临的紧迫任务之一。靶向治疗不但具有较好的疗效和疾病控制率， 且毒副反应较轻， 是临床上肺腺癌癌患者治疗的最佳选择[1]。以厄洛替尼为代表的酪氨酸激酶抑制剂类药物在一线治疗中被广泛使用[2]。然而， 目前靶向治疗面临的最大问题是治疗过程中耐药性的产生[3]。腺癌中主要的驱动基因包括EGFR、鼠类肉瘤病毒癌基因（KRAS）、鼠类肉瘤病毒病毒癌基因同源物BI（BRAF）等的突变， 对临床用药情况进行敏感性监控， 对于控制疾病发展和延长患者生存期有着十分重大和积极的意义[4]。近年来， 血液样本液体活检技术在临床上由于其具有的取样便捷和实时监控等特点， 得到越来越多的应用， 但是其在胸水中的应用并不常见[5， 6]。有研究表明胸水肿瘤细胞的含量要远大于血液中游离的肿瘤细胞[7]。本研究对经酪氨酸激酶抑制剂治疗的肺腺癌患者复发胸水中EGFR基因突变进行检测， 以期为临床上胸水中基因突变检测应用于肺腺癌患者的耐药监测提供参考。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 选取本院2016年1月～2018年6月收治的176例突变肺腺癌患者， 其中男81例， 女95例;年龄35～80岁， 平均年龄（57.52±5.75）歲。患者确诊为非小细胞型肺癌（NSCLC）， 患者无化疗治疗史， 或有过化疗经历但已从不良反应中恢复。患者及其家属均对研究过程有清楚明确认知， 并在研究同意书上签字。本研究经医学伦理委员会批准。

1. 2 研究方法 患者均接受EGFR-TKI治疗， 治疗12个月后均复发胸水， 对胸水样本进行收集。采集胸水样本30 ml， 3000 r/min离心10 min， 收集细胞沉淀， 如沉淀量不够可以进行重复离心收集， 将样本于-80 ℃保存备用。按QIAamp DNA FFPE Tissue Kit试剂盒说明书， 提取胸水细胞DNA。利用紫外线分光光度计检测各样本DNA的浓度和纯度（A260/280在1.8～2.0）。将样本的DNA按照人类ADx-EGFR 基因突变检测试剂盒说明书对所有标本进行EGFR T790M耐药突变的检测。检测胸水中EGFR T790M耐药突变。

1. 3 统计学方法 采用SPSS17.0统计学软件对数据进行处理。计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验。P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2. 1 EGFR-TKI治疗后出现T790M突变情况分析176例EGFR-TKI治疗耐药患者的胸水样本中， T790M基因突变128例， 占比为72.7%， 无T790M基因突变48例， 占比为27.3%。

2. 2 T790M突变的影响因素分析 男性发生T790M基因突变60例（74.07%）， 女性发生T790M基因突变68例（72.29%）;<65岁患者发生T790M基因突变36例（69.23%）， ≥65岁患者发生T790M基因突变92例（74.19%）;吸烟患者发生T790M基因突变47例（73.44%）， 非吸烟患者发生T790M基因突变81例（72.32%）， ;腺癌患者发生T790M基因突变121例（73.33%）， 非腺癌患者发生T790M基因突变7例（63.64%）;不同性别、年龄、吸烟情况、腺癌患者发生T790M基因突变的占比与非T790M突变患者比较， 差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。

3 讨论

肺癌作为发病率和死亡率均居首位的恶性肿瘤， 严重地威胁着人类的健康[8-10]。目前， 随着生态环境的改变， 以及吸烟人数的增多， 肺癌每年发病率都在上升， 且具有较高致死率。肺腺癌的发病率占比能达到80%～85%， 其5年死亡率>80%[11-14]。肺癌组织学分类主要由小细胞肺癌和非小细胞肺癌两大类， 非小细胞肺癌可占到85%， 其主要由腺癌、鳞癌、大细胞癌及其他类型肺癌组成， 腺癌患者人数最多。靶向治疗已经成为当今医疗发展的大方向， 给患者带来了更好的康复机会， 但靶向治疗仍然不可避免耐药性， 所以当前对药物耐药性的研究和探索正逐渐成为临床研究的重要内容和主流方向。晚期肺腺癌的致死率非常高， 而随着医学对基因组探究的深入治疗方法已经有了质的改变， 主流的治疗方式已经由化疗变成以基因检测为向导开展的精准治疗[15-17]。

EGFR基因位于7号染色体短臂上， 包含28个外显子， 大小约170 kD， EGFR-TKI可显著提高EGFR基因的突变阳性， EGFR-TKI治疗中EGFR基因突变型NSCLC易出现T790M突变[18， 19]。所以对T790M突变的监测对治疗具有非常重要而长远的影响。为了寻找易获得的标本进行EGFR基因突变的检测， 近年来国内外研究者将注意力集中在了胸水和外周血上。恶性胸腔积液是晚期非小细胞肺癌患者的常见症状， 采集胸水标本具有操作风险小、检出率高、与组织标本高度一致等优点[20-22]。使用胸水进行T790突变检测具有较高的敏感性和特异性， 在检测费用等方面可能比血液检测更具有优势， 可以在耐药早期监控非小细胞肺癌患者酪氨酸激酶抑制剂耐药性， 及时调整治疗方案。本次研究中176例EGFR-TKI治疗耐药患者的胸水样本中， T790M基因突变128例， 占比为72.7%， 无T790M基因突变48例， 占比为27.3%。男性发生T790M基因突变60例（74.07%）， 女性发生T790M基因突变68例（72.29%）;<65岁患者发生T790M基因突变36例（69.23%）， ≥65岁患者发生T790M基因突变92例（74.19%）;吸烟患者发生T790M基因突变47例（73.44%）， 非吸烟患者发生T790M基因突变81例（72.32%）， ;腺癌患者发生T790M基因突变121例（73.33%）， 非腺癌患者发生T790M基因突变7例（63.64%）;不同性别、年龄、吸烟情况、腺癌患者发生T790M基因突变的占比与非T790M突变患者比较， 差异无统计学意义（P>0.05）。说明T790M基因突变与性别、年龄、是否吸烟等均无关系。魏媛等[17]在对T790M与晚期非小细胞肺癌患者EGFR-TKI继发耐药和预后的相关性研究中发现T790M阳性突变与晚期非小细胞肺癌患者的年龄、性别、临床分期等均无相关性， 与本研究结果相一致。

总之， 检测胸水样本中EGFR基因状态对于预测EGFR-TKI耐药性具有很好的应用价值， 为临床检测提供方便有效的诊断方法， 便于临床开展实施， 具有很好的应用前景。

参考文献

[1] 杨新杰， 张卉， 秦娜， 等. 盐酸埃克替尼一线治疗晚期肺腺癌的临床疗效观察. 中国肺癌杂志， 2013， 16（7）：364-368.

[2] 王鸯， 李敏， 蒋娟， 等. 一代表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂一线治疗晚期非小细胞肺癌患者166例无进展生存期分析. 中国实用内科杂志， 2019， 39（5）：68-71.

[3] 高剑坤， 王谷， 吴静蓉， 等. 靶向抗癌治疗存在的问题及发展方向. 医学争鸣， 2018， 9（6）：12-16.

[4] 杨宁， 郭妹， 宋玉兰， 等. 430例中国非小细胞肺癌患者EGFR、KRAS、BRAF和PIK3CA基因突变状态及其临床意义. 中国肿瘤生物治疗杂志， 2015， 22（6）：734-739.

[5] 胡琨， 向倩， 崔一民. 液体活检技术及在精准医疗中的应用 . 临床药物治疗杂志， 2016， 14（4）：1-7.

[6] 林铖， 姜傥. 液体活检技术在非小细胞肺癌患者EGFR-TKI继发耐药中的应用. 检验医学， 2016， 31（10）：835-843.

[7] 黄健， 王于理， 代平， 等. 胸水、血液EGFR基因突变检测在非小细胞肺癌治疗中的应用价值. 山东医药， 2018， 58（6）：61-63.

[8] 臧若川. 早期非小细胞肺癌淋巴结转移研究及肺癌新标志物探讨. 北京协和医学院， 2017.

[9] 王丽. 中国原发性肺癌诊疗规范（2015年版）解读. 中华肿瘤杂志， 2016， 37（7）：433-436.

[10] 邹小农. 中国肺癌流行病学. 中华肿瘤防治杂志， 2007， 14（12）：881-883.

[11] 王晓薇， 李文新. 晚期肺腺癌的靶向治疗研究进展. 世界最新医学信息文摘， 2017， 17（86）：82-84.

[12] 李雪涛. miR-181b-5p促进肺癌干细胞样细胞发生上皮间质转化中的作用及机制研究. 第三军医大学， 2016.

[13] 庞东生， 宋志刚， 汪雪原， 等. 晚期非小细胞肺癌化疗和靶向治疗的现状. 肿瘤预防与治疗， 2009， 22（2）：219-222.

[14] 杜凤华， 孔维博， 孔祥舟， 等. 靶向联合化疗与常规化疗治疗表皮生长因子受体基因突变肺腺癌患者的临床效果. 安徽医学， 2019， 40（4）：20-23.

[15] 鄧豫， 郝志鹏， 付向宁. “精准医疗”理念下单孔VATS肺癌根治术的发展现状、应用细节和展望. 中国肺癌杂志， 2016， 19（6）：371-376.

[16] 苏暄. 基因检测掀开精准医疗帷幕， 带来医学领域颠覆性革命 中国医科大学第一医院肿瘤内科主任刘云鹏谈——最新基因检测整体态势和未来趋向. 中国医药科学， 2015， 5（4）：1-6.

[17] 魏媛， 魏莉， 马晓平， 等. T790M与晚期NSCLC患者EGFR-TKI继发耐药及预后的相关性. 中华肿瘤防治杂志， 2016， 23（6）：364-368.

[18] 周娟. T790M及EMT在预测EGFR-TKI继发耐药后化疗疗效中的重要作用及机制. 第二军医大学， 2016.

[19] 刘根贤， 慕进勇， 张守翠. 非小细胞肺癌患者胸水与外周血检测 EGFR基因突变的比较. 国际检验医学杂志， 2016， 37（7）：985-987.

[20] 师艺， 马志萍， 崔文丽， 等. 肺腺癌活检组织、胸水及血液中表皮生长因子受体基因突变检测的比较分析. 中华病理学杂志， 2018， 47（10）：775-779.

[21] 李丹. 临床微生物标本采集对微生物检验结果的重要性分析. 临床检验杂志（电子版）， 2018， 7（3）：543.

[22] 王勐. 表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKI）及EGFR单克隆抗体联合治疗非小细胞肺癌的研究. 天津医科大学， 2010.

[收稿日期：2020-03-23]