甲状腺乳头状癌超声造影定量参数与微血管密度的相关性

陈 萍 唐春霖 陈凯旋 谭 鹰 林 勇 吴 峰 陈小情 郭燕丽

近年甲状腺乳头状癌（PTC）的发病率有所上升［1］，约占甲状腺恶性肿瘤的70%～80%［2］，虽然PTC预后良好，但其具有侵袭性，如甲状腺外侵犯、远处转移、局部淋巴结转移和局部复发等。目前高频超声是检查甲状腺的首选方法，其可以有效评估甲状腺结节，但隐匿性PTC缺乏特殊的超声表现。超声造影是超声成像的重要进展之一，第二代微泡造影剂如SonoVue®，作为信号增强剂，使脏器实质灌注和微循环实现可视化［3］。微血管密度（MVD）是衡量肿瘤血管生成的重要指标，被认为是血管量化的参考标准［4］，然而使用手术和活检标本进行计数MVD有创，因此建立一种可重复使用、无创评估肿瘤血管的检测手段非常重要。本研究旨在探讨PTC的超声造影定量参数与MVD的相关性。

资料与方法

一、临床资料

选取于2016年8月～2018年9月我院超声科行超声造影检查，并行手术切除获得病理结果的PTC结节患者61例（共61个结节），男24例，女37例，年龄10～79岁，平均（41.2±7.6）岁。结节直径0.5～3.3 cm，平均（1.7±0.9）cm。入选标准：①0.5 cm<结节直径<4.0 cm；②单发实性结节；③病理类型为PTC。排除标准：①蛋壳样钙化或纯钙化的结节；②不愿意签署超声造影知情同意书；③既往曾行甲状腺手术；④妊娠患者。本研究经我院医学伦理委员会批准，入选者均知情同意。

二、仪器与方法

1.仪器与试剂：使用迈瑞Resona 7彩色多普勒超声诊断仪，L11-3U线阵探头，频率5～9 MHz；机械指数0.04～0.06。造影剂为SonoVue（意大利博莱科公司），使用前注入5.0 ml 0.9%无菌生理盐水溶解造影剂白色冻干粉，反复摇匀，配制成乳白色微泡造影剂混悬液。

2.检查方法：受检者取仰卧位，首先行二维超声评估甲状腺结节的情况，选取感兴趣结节最佳成像切面。切换至超声造影模式，经肘部静脉团注1.5～2.0 ml配制好的造影剂混悬液，开启计时，同时注入3.0～5.0 ml 0.9%无菌生理盐水冲管，启动录像按键，录制超声造影动态影像过程不少于120 s。

3.超声造影观察指标及定量分析：进入软件对动态图像进行离线分析，以不均匀低增强模式作为PTC的诊断标准；选择感兴趣区（ROI），避开结节内的粗大钙化，在结节和周围甲状腺实质分别绘制3个ROI，取平均值，获得两条时间-强度曲线（TIC）和两组定量参数值，包括4个指标：造影剂开始增强时间（AT）、峰值时间（TTP）、峰值强度（PI）、曲线下面积（AUC）。

4.CD31免疫组化染色及MVD检测：采用鼠抗人CD31单克隆抗体（福州迈新生物技术开发有限公司），按常规方法进行染色，标记血管内皮细胞。参照Weidner［5］的计数方法，在光学显微镜下，由我院经验丰富的病理学专家（双盲）测定MVD。首先在40倍光镜下寻找切片的“热点”区域，即5个MVD最高的区域，然后在400倍光镜下记录血管数，取5个微血管平均数为肿瘤的MVD。

三、统计学处理

结 果

一、PTC的超声特征及TIC定量分析结果

61个结节常规超声表现：58个结节为低回声（图1A），3个结节为等回声；57个结节边界模糊；41个结节伴钙化；48个结节纵横比>1；55个结节CDFI示血流信号不丰富。

61个结节均行手术切除，并经病理证实，超声造影显示55个（90.1%）结节呈不均匀低增强（图1B），3个结节呈高增强或环状增强，3个结节呈等增强，超声造影诊断PTC的准确率为90.1%。

TIC定量分析显示，PTC峰值向后移，曲线低平，上升段和下降段平缓，造影剂呈慢进慢退模式（图1C、D）。PTC的PI和AUC分别为（14.47±6.42）dB、（603.1±222.80）dB·s，低于周围正常甲状腺组织的（21.06±5.65）dB、（1025.43±260.37）dB·s，差异均有统计学意义（均P<0.05）；TTP、AT比较差异均无统计学意义。见表1。

二、PTC结节与周围正常甲状腺实质的MVD比较

PTC结节MVD计数平均值为（64.99±17.51）条/HP，周围正常甲状腺实质MVD计数平均值为（91.71±7.54）条/HP，两者比较差异有统计学意义（P<0.05），见图2。

三、超声造影定量参数与MVD的相关性分析

PI、AUC与MVD均呈显著正相关（r=0.811、0.734，均P<0.001），AT、TTP与MVD无相关性，见图3，4。

表1 PTC结节与周围正常甲状腺实质的超声造影定量参数和MVD比较（）

表1 PTC结节与周围正常甲状腺实质的超声造影定量参数和MVD比较（）

AT：开始增强时间；TTP：峰值时间；PT：峰值强度；AUC：曲线下面积；MVD：微血管密度

部位PTC结节（61）周围正常实质（61）P值MVD（条/HP）64.99±17.51 91.71±7.54 0.016超声造影参数AT（s）1.87±1.21 2.23±2.29 0.935 TTP（s）17.38±7.73 13.87±4.53 0.825 PI（dB）14.47±6.42 21.06±5.65 0.008 AUC（dB·s）603.1±222.80 1025.43±260.37 0.003

讨 论

肿瘤生长和转移依赖于血管生成，MVD是反映血管生成活性和强度的标志［6］。然而，通过活检来计数肿瘤的MVD有创，且由于肿瘤的异质性，活检部位不能充分反映整个肿瘤的微血管系统，无法对微血管循环进行动态监测。

超声造影是无创性成像方式，是检测脏器病变有效的、独特的筛查工具，可连续、动态观察肿瘤血管灌注情况，有助于肿瘤的形态学分析、微循环和血流动力学的评估［7］。本研究将超声造影应用于PTC结节，分析其造影特征及TIC定量参数，结果显示，PTC结节的AUC和PI均较周围甲状腺实质低，差异有统计学意义（均P<0.05）。另外，本研究免疫组化染色结果显示，PTC的MVD较周围甲状腺实质低；相关性分析提示AUC和PI均与病理MVD呈显著正相关（r=0.734、0.811，均P<0.05）。关于超声造影对肿瘤血管生成评估的研究很多，Guo等［8］证实超声造影参数可以反映膀胱尿路上皮肿瘤的MVD，有助于评估肿瘤血管生成情况。Li等［9］研究发现乳腺癌患者的ITP、DS、PI、AUC等参数与病理MVD显著相关，根据灌注特征可以评价乳腺良恶性病变。本研究结果显示，PTC的MVD可以通过超声造影来评估，这为超声造影检测PTC提供了有价值的依据和一定的病理学基础，与文献［10］报道一致。

本研究也存在不足之处：超声造影仅能从病灶部位选择一个特定的切面来评估增强模式和参数，不可能完全观察病灶；入选病例由已经选择手术的患者组成，因此选择偏倚不可避免；本研究样本量小，需要更多病例进行多中心研究来验证。

综上所述，应用超声造影定量分析技术可以间接反映PTC的MVD，能够客观反映PTC的基本病理特征，可作为PTC术前评估的补充检查，对PTC的诊断、治疗有指导意义。