参连复脉颗粒治疗室性期前收缩的药效学实验研究

龙 佳，鲁婷婷，汪吴娇，逯金金，刘 静，任建勋，万 洁，林 谦

室性期前收缩(ventricular premature contraction，VPC)是临床常见的心律失常之一。尽管通常认为无器质性心脏病的病人在体检中发现室性期前收缩属正常现象，无须干预治疗，但近年来研究显示，频发的室性期前收缩可能会影响心脏的结构与功能，进而导致心功能不全和心肌病[1]。目前药物治疗常用的β受体阻断剂禁忌证较多，其他抗心律失常药几乎均有一定的致心律失常作用[2]，而射频消融术等非药物治疗手段因具有创伤性、适应证及并发症的局限、医疗条件要求高、价格昂贵等原因仅使部分病人能够从中受益。中医药在治疗心律失常尤其是室性期前收缩方面具有一定优势[3]。益气复脉合剂为北京中医药大学东方医院心内科治疗心律失常的协定处方，已获国家发明专利(ZL 2013 1 0303390.5)。既往研究表明，该方用于治疗室性期前收缩有较好的临床疗效[4]。目前，已根据《药品注册管理办法》(GLP)的相关要求，通过水提工艺[5]和醇提工艺[6]制备成颗粒剂，命名为参连复脉颗粒(SLFM)，具有益气活血、清心化痰、安神复脉之功效[7]。本研究旨在进一步验证参连复脉颗粒对室性期前收缩的药效作用及最佳有效药物浓度，为该颗粒剂治疗室性期前收缩提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物 清洁级雄性ICR小鼠，体重23～25 g，斯贝福(北京)实验动物技术有限公司提供，许可证号：SCXK(京)2016-0004。普通级雄性豚鼠，体重240～320 g，北京芳元缘养殖场，许可证号：SCXK(京)2014-0012。清洁级雄性SD大鼠，体重190～230 g，斯贝福(北京)实验动物科技有限公司提供，许可证号：SCXK(京)2013-0004；北京华阜康生物科技股份有限公司生产，许可证号：SCXK(京)2013-0007。

1.2 药物与试剂 参连复脉颗粒，提取浸膏粉，每克粉含4.27 g生药，批号：Z70301，北京中医药大学中药学院提供。盐酸胺碘酮片，每片0.2 g，赛诺菲(杭州)制药有限公司生产，批号：130020。盐酸美西律片，每片50 mg，石药集团欧意药业有限公司，批号：377131203。0.9%氯化钠注射液，每袋500 mL，北京华润双鹤药业股份有限公司，批号：D201701093。0.9%氯化钠注射液，每袋500 mL，北京双鹤药业股份有限公司，批号：C201202095。氯化钙(CaCl2)，SIGMA-ALDRICH产品，货号：C7902-500G，批号：058k06941。哇巴因，SIGMA-ALDRICH产品，批号：057K1625。乌头原碱，批号：110720-200410，中国药品生物制品鉴定所提供。

1.3 仪器 心电图解析系统(Softron SP-2006)，北京软隆生物技术有限公司生产。ALC-IP800LB微量注射泵(ALC-IP800LB Syringe Pump)，上海奥尔特生物科技有限公司生产。

1.4 实验方法

1.4.1 实验一 参连复脉颗粒对CaCl2致小鼠心律失常的影响。采用一次性静脉注入CaCl2(225 mg/kg)的方法诱导小鼠心律失常模型，观察益气复脉颗粒抗小鼠心律失常的作用。ICR小鼠随机分为对照组(生理盐水20 mL/kg)、胺碘酮组(78 mg/kg)及SLFM大剂量组(参连复脉生药16.0 g/kg)、中大剂量组(参连复脉生药8.0 g/kg)、中剂量组(参连复脉生药4.0 g/kg)、小剂量组(参连复脉生药2.0 g/kg)。并按以上所述剂量溶于生理盐水中进行口服灌胃给药。给药后30 min，连接心电图解析系统记录标准Ⅱ导联心电图。尾静脉注入CaCl2诱发心律失常后，记录心律失常持续时间(s)并计算对数(Log)。

1.4.2 实验二 参连复脉颗粒对哇巴因致豚鼠心律失常的影响。采用静脉恒速注入哇巴因的方法诱发豚鼠心律失常模型，观察参连复脉颗粒经灌胃口服给药对哇巴因诱导豚鼠心律失常的影响。将豚鼠随机分为对照组(蒸馏水3 mL/kg)、对照西药美西律组(50 mg/kg)、中药对照SLFM大、中、小剂量组(生药6.0 g/kg、生药3.0 g/kg、生药1.5 g/kg)。并按以上所述剂量溶于蒸馏水中经灌胃口服。给药30 min后，豚鼠分离左侧颈外静脉，以微量注射泵恒速注入哇巴因(100 μg/mL、0.08 mL/min)，观察动物出现室性期前收缩、室性心动过速、心室颤动及心脏停搏的时间，并计算哇巴因消耗量。

1.4.3 实验三 参连复脉颗粒对乌头原碱致大鼠心律失常的影响。采用一次性静脉注入乌头原碱的方法诱导大鼠心律失常模型，观察参连复脉颗粒抗大鼠心律失常的作用。SD大鼠随机分为对照组(生理盐水3 mL/kg)、西药阳性对照美西律组(60 mg/kg)、中药对照SLFM大剂量组(生药8.0 g/kg)、中剂量组(生药4.0 g/kg)、小剂量组(生药2.0 g/kg)。并按以上所述剂量溶于生理盐水中进行口服灌胃给药。给药后30 min，连接心电图解析系统记录标准Ⅱ导联心电图。颈静脉注入乌头原碱诱发心律失常后，记录心律失常持续时间。

2 结 果

2.1 参连复脉颗粒对CaCl2致小鼠心律失常发生率及持续时间的影响 对照组小鼠尾静脉注射CaCl2后出现心率由快到慢、停搏、室性期前收缩等心律失常，发生率为100%。与对照组比较，SLFM大剂量组、中大剂量组、中剂量组心律失常持续时间均明显缩短(P<0.05或P<0.01)；胺碘酮组心律失常持续时间明显缩短(P<0.01)，而SLFM大剂量组、中大剂量组、中剂量组心律失常持续时间缩短程度与胺碘酮组比较差异无统计学意义(P>0.05)。详见表1。CaCl2致小鼠心律失常心电图的变化见图1。

表1 参连复脉颗粒对CaCl2致小鼠心律失常发生率及持续时间的影响(±s) 单位：s

图1 CaCl2致小鼠心律失常心电图的变化

2.2 参连复脉颗粒对哇巴因致豚鼠心律失常的影响 与对照组比较，美西律组发生室性期前收缩、室性心动过速、心室颤动及心脏停搏时哇巴因消耗量均明显增加(P<0.01)；SLFM大剂量组发生室性期前收缩、室性心动过速、心室颤动、心脏停搏时哇巴因消耗量明显增加(P<0.01)；SLFM中剂量组、小剂量组也能够增加哇巴因的消耗量。而SLFM大剂量组发生心律失常时哇巴因消耗量与美西律组比较差异无统计学意义(P>0.05)。详见表2。

与对照组比较，美西律组和SLFM大剂量组、中剂量组、小剂量组对哇巴因诱导豚鼠不同心律失常出现时间具有一定的延长作用，差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。而SLFM大剂量组致豚鼠心律失常出现延长的时间与美西律组比较差异无统计学意义(P>0.05)。详见表3。哇巴因致豚鼠心律失常的心电图变化见图2。

表2 参连复脉颗粒对豚鼠心律失常哇巴因消耗量的影响(±s) 单位：μg/kg

表3 参连复脉颗粒对哇巴因诱导豚鼠不同心律失常出现时间的影响(±s) 单位：s

图2 哇巴因致豚鼠心律失常的心电图变化

2.3 参连复脉颗粒对乌头原碱致大鼠心律失常持续时间的影响 美西律组和SLFM大剂量组、中剂量组心律失常持续时间均明显缩短，与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。而SLFM大剂量组、中剂量组大鼠心律失常持续时间与美西律组比较差异无统计学意义(P>0.05)。详见表4。乌头原碱致大鼠心律失常心电图的变化见图3。

表4 参连复脉颗粒对乌头原碱致大鼠心律失常持续时间的影响 (±s) 单位：min

图3 乌头原碱致大鼠心律失常心电图的变化

3 讨 论

室性期前收缩在中医学属于“心悸”范畴。心悸的基本病机有虚实两方面，虚者为气血阴阳亏损、心神失养所致；实者则多由痰火扰心、水饮凌心或瘀血阻脉、气血运行不畅引起，虚实之间可以相互夹杂或转化。随着人民生活水平不断提高，嗜食肥甘厚味、饮食失节的人群增多，室性期前收缩病人多易在气虚血瘀基础上化生痰热。临床证候学研究表明，室性期前收缩病人气虚血瘀合并痰热内蕴证所占比例较多[8]。目前上市的以治疗室性期前收缩等心律失常且相对应用广泛的中成药仅有稳心颗粒、参松养心胶囊两个品种，但二者均为针对气阴两虚、瘀血阻络的证型，尚无同时针对气虚血瘀合并痰热扰心证型的中成药。参连复脉颗粒由党参、丹参、黄连、法半夏、赤芍、川芎、鬼箭羽、白芍、远志、酸枣仁、炙甘草组成。全方配伍，共奏益气活血、清心化痰、安神复脉之效[7]。适用于气虚血瘀、痰热扰心所致心悸，症见胸闷、胸痛、心烦、口苦、气短、乏力、咽干、便干、口唇紫暗、舌暗红、苔黄腻。

参连复脉颗粒药物中君药丹参的主要有效成分丹酚酸B和丹参酮ⅡA对心脑血管系统都具有一定的保护作用[9-10]。已有研究表明，臣药黄连的主要有效成分小檗碱具有显著抗心律失常作用，且对不同病因引起的各种心律失常均有效，具有广谱的抗心律失常作用[11]。佐药赤芍的有效成分芍药苷通过抑制细胞内钙离子超载、抗自由基，从而改善由缺血、缺氧引起的心脑血管舒缩功能障碍[12]。使药炙甘草的主要成分甘草酸二铵注射液能明显减少大鼠心肌缺血再灌注性心律失常的发生率及降低心律失常评分[13]；甘草总黄酮可延长乌头碱诱发的小鼠心律失常的潜伏期，减少氯仿诱发的小鼠心室颤动阳性率[14]，增加哇巴因诱导豚鼠出现室性期前收缩等心律失常所用剂量。参连复脉颗粒中主要药物组分的药理作用均具有抗心律失常的作用。

本研究团队曾采用参连复脉颗粒组方的水煮汤剂——益气复脉合剂进行了相关的动物实验研究[15-17]，并对益气复脉合剂治疗室性期前收缩的有效性和安全性做了初步验证[4]。而参连复脉颗粒是在益气复脉合剂处方基础上，通过部分水提和部分醇提等符合药物非临床研究质量管理规范(GLP)标准制备加工后，最终研发成颗粒剂。相对汤剂存在熬制方法难以规范、易发霉变质、质量难以控制而言，颗粒剂有效成分含量更稳定，携带方便，保质期长，能够更好地发挥并利用中药的有效成分。根据不同种属动物心脏电生理特点而选择小鼠、大鼠和豚鼠进行实验研究，实验结果表明：①参连复脉颗粒大剂量组、中大剂量组、中剂量组对CaCl2致小鼠心律失常发生率及持续时间的影响与胺碘酮组比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。表明参连复脉颗粒大剂量、中大剂量、中剂量有类胺碘酮作用，剂量越大，心律失常持续时间越短。②参连复脉颗粒大剂量组对豚鼠心律失常哇巴因消耗量的影响与美西律组比较，差异无统计学意义(P>0.05)，且与美西律对哇巴因消耗量及心律失常出现的时间有相同的拮抗趋势。③参连复脉颗粒大剂量组、中剂量组对乌头原碱致大鼠心律失常持续时间的影响与美西律组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。由此推断参连复脉颗粒有类胺碘酮、美西律等抗心律失常药物的药效作用，与剂量呈正相关。相对胺碘酮、美西律等西药，参连复脉颗粒毒性作用更小，安全性更高。

本研究结果提示，参连复脉颗粒对氯化钙、哇巴因、乌头原碱引起的室性期前收缩均有一定的抑制作用，中剂量为最低起效剂量，故推荐临床常用剂量(即成人生药40.5 g/d)为最佳有效剂量。通过本研究可知，参连复脉颗粒具有抗心律失常的药效作用，可以用于治疗室性期前收缩，其临床疗效及作用机制有待后续研究进一步探索验证。