实时荧光PCR探针法检测丙型肝炎病毒核酸的应用效果分析

邵长年

[摘要]目的：分析对接受丙型肝炎病毒核酸检查的患者实施实时荧光PCR探针法检测方式的应用效果。方法：选择2018年12月至2020年12月，在血站环境中拿到的样本40例丙型肝炎病毒感染患者及40例健康体检者作为研究对象，均接受实时荧光PCR探针法检测，并分为观察组（40例，丙型肝炎病毒感染患者）和对照组（40例，健康体检者）。结果：对比两组研究对象的PCR检出结果、观察组HCV-RNA阳性血清分型检出结果，与对照组相对比，观察组抗-HCV阳性检出人数、ALT异常人数更多，1b型检出人数最多，3b型检出人数最少，数据对比有统计学差异（P<0.05）。结论：对丙型肝炎病毒感染者实施实时荧光PCR探针法检测，可有效检出受检者是否感染有丙型肝炎病毒，且能有效鉴别诊断其具体的病毒基因感染类型，使患者能得到更有针对性的救治。

[关键词]丙型肝炎病毒;核酸检查;实时荧光PCR;探针法;应用效果

[中图分类号]R373.21;R440

[文献标识码]A

[文章编号]2096-5249（2021）17-0177-02

丙型肝炎病毒是1989年美国科学家迈克尔发现的一种新型病毒種类，此病毒为单股正链的RNA病毒，且具有一定传染性，经血源传播、母婴传播、性传播等方式，均可造成病毒感染现象，一旦患者因病毒感染而诱发肝炎病症，则会对其肝功能造成较大损伤，致其肝脏出现慢性炎症坏死、纤维化等问题，严重影响患者的生命健康[1-2]。因此可利用实时荧光PCR探针法检测方式对丙型肝炎病毒患者进行有效检查诊断，为医师的临床诊断提供有效依据，使患者能尽快得到有效且有针对性的救治。则为进一步探究此检测方式的应用情况，本研究主要分析了对接受丙型肝炎病毒核酸检查的患者实施实时荧光PCR探针法检测方式的应用效果，具体如下。

1资料与方法

1.1一般资料选择2018年12月至2020年12月，在血站环境中拿到的样本40例丙型肝炎病毒感染患者及40例健康体检者作为研究对象，均接受实时荧光PCR探针法检测，并分为观察组（40例，丙型肝炎病毒感染患者）和对照组（40例，健康体检者），其中观察组女17例、男23例，年龄范围为19～72岁，平均年龄（45.73±6.32）岁;对照组女19例、男21例，年龄范围为20～71岁，平均年龄（45.78±6.34）岁。通过应用统计学对比分析后显示，两组患者年龄、性别组成等基线资料差异细微（P>0.05），有可比性。纳入标准：本研究中所有丙型肝炎病毒感染患者，均符合《丙型肝炎防治指南》中诊断标准[3];研究选择的所有研究对象及其家属均自愿签字同意，并经由医学伦理委员会同意。排除标准：研究对象合并有其他免疫系统疾病;研究对象合并有其他肝功能障碍病症;研究对象有长期酗酒问题;研究对象合并有其他药物性、中毒性疾病。

1.2方法本研究中所有研究对象均接受实时荧光PCR探针法检测，其检测方式具体如下：样本采集：采集所有研究对象的血液样本，于其清晨空腹时，用一次性非抗凝负压采血管采集3mL静脉血，并在2h内送检，经离心处理后，取上层血清，于-70°C环境下保持。丙型肝炎病毒RNA检测：利用RT-PCR-荧光探针法对受检者进行丙型肝炎病毒RNA检测，用试剂（中山大学达安基因股份有限公司）、荧光PCR扩增仪（北京乐普医疗科技有限责任公司，型号Lepgen-96）对受检者进行血清中的丙型肝炎病毒核酸检测。其涉及到的方式有：1RNA提取，首先需提取丙型肝炎病毒的RNA，可直接利用核酸提取试剂（厦门泰普生物科学有限公司）的丙型肝炎病毒分型试剂盒，进行RNA提取;2PCR扩增，向1b亚型、2a/6a亚型、3a/3b亚型及酶系等反应体系中加入10uL的RNA提取物，混合均匀后，将待测物放置在荧光PCR扩增仪中进行PCR扩增，扩增仪参数设定分别为42°C30min、95°C3min、94°C20s、55°C20s、72°C30s，所有检测均需进行10个循环，后再分别在94°C、60°C条件下扩增15s、45s，30个循环;3PCR-荧光探针分型，扩增完成后，即可进一步检测其RNA具体类型，将荧光探针设定为FAM-TAMAR、JOE-TAMAR在60°C、45s环境下进行荧光信号收集，有效鉴别诊断丙型肝炎病毒的1b、2a、6a、3a、3b这五种亚型类型。最后统计记录相关检测结果及指标数据。

1.3观察指标统计分析两组研究对象的PCR检出结果，包括统计抗-HCV阳性检出人数及ALT异常人数，由于HCV-RNA检出值的升高，抗-HCV阳性及ALT异常的检出人数也会有所上升，因此通过这两项指标数据的对比，可有效评估丙型肝炎病毒感染者同健康体检者间的PCR检出结果差异性。对观察组HCV-RNA阳性血清分型检出结果进行统计分析，即统计经PCR-荧光探针分型检测后，检出结果分别为1b、2a、3a、3b这四种基因类型的患者人数，以进一步评估丙型肝炎病毒感染者具体的感染情况。

1.4统计学方法使用SPSS20.0软件对数据进行统计学分析，使用t和x±s表示计量资料，使用χ2和%表示计数资料，P<0.05表示数据差异有统计学意义。

2结果

2.1两组研究对象PCR检出结果的对比在本研究中对两组研究对象的PCR检出结果进行对比分析，观察组抗-HCV阳性检出人数及ALT异常人数相比于对照组更多。数据对比有统计学差异（P<0.05），详情如表1所示。

2.2观察组HCV-RNA阳性血清分型检出结果的对比在本研究中对观察组HCV-RNA阳性血清分型检出结果进行对比分析，其中1b型检出人数最多，3b型检出人数最少。数据对比有统计学差异（P<0.05），详情如表2所示。

3讨论

丙型肝炎病毒感染是导致丙型病毒性肝炎的主要原因，且此病毒具有较强传染性，人群普遍易感，经血源传播、母婴垂直传播等方式，均可导致丙型肝炎病毒感染现象，且丙型肝炎病毒感染后，在病程前期，感染者多无明显临床症状，极易致其错失病毒感染前期的最佳诊疗时间，待其出现食欲下降、腹胀等症状时，其肝功能多已受到一定损伤，因此需及时对丙型肝炎病毒感染者或疑似感染者进行有效检查，使其能得到及时有效的救治[4]。

利用实时荧光PCR探针法检测方式对丙型肝炎病毒患者进行临床检查诊断，在此检查过程中，PCR主要是指放大扩增特定DNA片段，即于生物体外进行特殊DNA复制，最终通过对其基因序列的观察判断，有效鉴别受检物质的具体情况。而实时荧光定量PCR则主要是在PCR反应体系中加入荧光基因，以便于医师对PCR进程进行进一步的监控、观察，有利于医师对其检验结果的评估。同时利用实时荧光PCR探针法，在混有荧光基因的PCR进程中，对经反应后的荧光信号进行收集，可有效提升医师对检验结果诊断的精准度[5-6]。在本研究中，通过健康体检者同丙型肝炎病毒感染者间，实时荧光PCR探针检验结果的对比可知，丙型肝炎病毒感染者的抗-HCV阳性检出人数及ALT异常人数更多，这主要是由于肝炎病毒感染后，机体会后相应抗体的产生，以抵抗病毒对人体的侵害。而ALT主要存在于肝细胞中，则一旦人体肝脏受到损伤，肝细胞出现异常，则ALT检测值也会有所变动，因此随受检者机体内HCV-RNA检出值的提升，这两项指标也会有所变化。在分型检查方面，1b型检出人数最多，而随病毒感染基因类型的不同，其对人体的损伤也会有所不同，干扰素等诊疗方式也会有所不同。

综上所述，对丙型肝炎病毒感染者实施实时荧光PCR探针法检测，可有效检出受检者是否感染有丙型肝炎病毒，且能有效鉴别诊断其具体的病毒基因感染类型，使患者能得到更有针对性的救治。

参考文献

[1]向秀华，李丹，徐文波，等.实时荧光PCR探针法检测丙型肝炎病毒核酸性能验证[J].化学工程与装备，2020，28（10）：256-257.

[2]郭杰，曲沛，李韦杰，等.丙型肝炎病毒核酸定量检测性能验证及评价[J].传染病信息，2019，32（5）：394-398.

[3]饶慧瑛，段钟平，王贵强，等.《丙型肝炎防治指南（2019年版）》重要更新要点[J].中华肝脏病杂志，2020，28（2）：129-132.

[4]王俊芳.应用双抗原夹心法和间接法两种方法检测丙型肝炎病毒抗体的结果比较[J].中国疗养医学，2019，28（02）：124-126.

[5]张云丹，杨源，王军，等.I群禽腺病毒血清4型TaqMan探針实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用[J].西北农业学报，2019，28（6）：20-28.

[6]马红霞，潘静静，李懿，等.实时荧光RT-PCR方法检测新型冠状病毒核酸结果分析[J].中华微生物学和免疫学杂志，2020，40（4）：245-249.

（收稿日期：2021-3-19 接受日期：2021-4-30）