液质联用法测定2-（邻乙氧基苯氧基）溴乙烷中四丁基溴化铵的残留量

吴凡，刘继华，周兰，李宏，王光灿

2-（邻乙氧基苯氧基）溴乙烷是盐酸坦洛新的合成中间体，四丁基溴化铵（TBAB）作为催化剂可用于其合成。TBAB 为白色晶体或粉末，具有特殊气味，可溶于水、醇和丙酮。TBAB 作为表面活性剂广泛用于日用化工产品生产中［1］，但其吸入、摄取和皮肤接触均有一定毒性，可刺激皮肤、眼睛和呼吸系统。本研究建立液质联用法［2-4］并用于检测2-（邻乙氧基苯氧基）溴乙烷中TBAB 的残留量，现报道如下。

1 仪器与试剂

1.1 仪器 AB Sciex QTRAP®4500 液质联用仪，CPA225D 电子天平，超声仪（Fungilab SK10GT，频率53 kHz）。

1.2 试剂 甲醇为色谱纯，水为纯化水，甲酸为优级纯，TBAB（国药集团化学试剂有限公司生产，生产批号：20150827）为分析纯，2-（邻乙氧基苯氧基）溴乙烷（昆明积大制药股份有限公司生产，生产批号：160302、160102、160502）。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备（1）对照品储备液：精密称取TBAB，采用甲醇制成每1 ml 中含有TBAB 1 μg 的溶液。（2）对照品溶液：精密称取对照品储备液，采用甲醇稀释成浓度约为10 ng/ml 的溶液。（3）系统适用性溶液：精密称取TBAB 及2-（邻乙氧基苯氧基）溴乙烷，采用甲醇稀释成每1 ml 含有TBAB 约20 ng 及2-（邻乙氧基苯氧基）溴乙烷20 ng 的溶液。（4）样品溶液：精密称取供试品0.1 g，精密加甲醇5 ml，超声2 min 使其溶解，摇匀。

2.2 液质条件 液相条件：色谱柱为Welch Xtimate UHPLC C18（GD），2.1 mm×50 mm，1.8 μm；柱温40 ℃，流动相：甲醇∶0.1%的甲酸水溶液（50 ∶50），流速：0.2 ml/min；进样量：1 μl。质谱条件：多反应离子检测（MRM）；正离子检测模式，气动辅助电喷雾离子化（ESI）；毛细管电压：5.50 kV，去簇电压：80.00 V，离子源温度：550 ℃。

TBAB 分子式为（CH3CH2CH2CH2）4NBr，（C16H36BrN），分子量为322.3。取TBAB 对照品储备溶液注入质谱仪，获得m/z 为242.3 的分子离子峰，即TBAB 脱去溴的离子；碎片离子中以m/z 为142.1 及100.0 较强，故选取m/z 为242/142 的离子对作为监测对象［5］。2-（邻乙氧基苯氧基）溴乙烷选择m/z为245/165 的离子对进行检测，调节流动相使TBAB 与2-（邻乙氧基苯氧基）溴乙烷达到良好分离。检测样品时为避免高浓度的2-（邻乙氧基苯氧基）溴乙烷污染离子源，故将2-（邻乙氧基苯氧基）溴乙烷部分做阀切换分流使其不进入质谱检测器，进而达到仅检测TBAB 的目的。TBAB 的质谱图见图1，TBAB 与2-（邻乙氧基苯氧基）溴乙烷的分离图见图2。

图1 TBAB 的质谱图

图2 TBAB 与2-（邻乙氧基苯氧基）溴乙烷的分离图

2.3 方法学考察

2.3.1 标准曲线 精密量取对照品储备液，分别采用甲醇稀释成约为54.0、21.6、10.8、5.4、2.16、1.08、0.54 ng/ml的对照品溶液，按“2.2”项下方法进行测定，记录液质谱图，以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标作图，得到回归方程：Y=3.65e+5x-4.37e+4（R2=0.998 8），表明浓度在0.54～54.0 ng/ml 范围内呈良好线性关系。

2.3.2 精密度试验 精密度试验取标准曲线项下的10.8 ng/ml的TBAB 溶液，按“2.2”项下方法测定，平行试验5 次，测得的峰面积RSD%为1.4%，提示精密度良好。

2.3.3 方法重复性试验 取同一批次2-（邻乙氧基苯氧基）溴乙烷适量，按“2.1”项下方法制备6 份样品溶液，按“2.2”项下液质条件测定TBAB 的残留量，检出TBAB 平均值为638.2 ng/g，RSD%为1.8%。

2.3.4 稳定性试验 取标准曲线项下浓度为10.8 ng/ml 的溶液，分别于0、2、4、6、8 h进样，以峰面积计算得RSD%为1.8%，提示该溶液8 h 内稳定。

2.3.5 检测限及定量限 取TBAB 对照品溶液逐级稀释，以3倍信噪比计，检测限为0.1 pg；以10 倍信噪比计，定量限为0.5 pg。见图3。

图3 检测限与定量限图

2.3.6 回收率试验 精密称取同一批次2-（邻乙氧基苯氧基）溴乙烷适量，共9 份，分别精密加入TBAB 对照品溶液（20 ng/ml）2.0 ml、2.5 ml、3.0 ml，加甲醇至5 ml，按“2.1”项下方法制备样品溶液，并按“2.2”项下条件进行测定，计算回收率。测得平均回收率为105.91%（见表1），RSD%为2.68%，提示方法准确性较好，可准确测定2-（邻乙氧基苯氧基）溴乙烷中TBAB 的残留量。

表1 回收率的测定结果

2.4 样品测定 取3 批2-（邻乙氧基苯氧基）溴乙烷适量，按“2.1”项下方法制备样品溶液，并按“2.2”项下条件进行测定，3 批样品中均检测到TBAB，含量分别为647.5、623.8、617.5、665.3、392.6、365.7 ng/g。见图4。

图4 2-（邻乙氧基苯氧基）溴乙烷中TBAB 残留量的液质图谱

3 讨论

TBAB 为季铵盐型阳离子表面活性剂，因其无紫外吸收，也不具有挥发特性，故无法采用液相色谱或气相色谱等常规方法进行测定。当TBAB 作为催化剂使用时，成品中残留量较少。液质联用法具有液相的高分离能力与质谱的强鉴定能力，采用液相分离2-（邻乙氧基苯氧基）溴乙烷与TBAB，将2-（邻乙氧基苯氧基）溴乙烷部分做阀切换分流使其不进入质谱检测器，而仅让TBAB 进入质谱检测器，故无需提取即可达到富集TBAB 的作用。本研究主要目的是建立测定2-（邻乙氧基苯氧基）溴乙烷中TBAB 残留量的液质联用法，该方法专属性强，其标准曲线、定量范围、精密度、准确度、样品稳定性及回收率等均符合要求，表明该方法灵敏、准确、可靠，可用于检测2-（邻乙氧基苯氧基）溴乙烷中TBAB 的残留量，以利于药品质量标准的提高及控制。