液相色谱法测定复方酮康唑乳膏中丙酸氯倍他索和酮康唑的含量方法对比

林伟谦

摘要：目的：应用反相高效液相色谱法分离和测定復方酮康唑乳膏中丙酸氯倍他索和酮康唑的含量。方法：该供试品经80℃水浴锅传热溶解，放冷至室温以无水乙醇定容至50mL量瓶，超声30min，滤纸过滤。再经0.45μm滤过后采用Diamosilc18（2）为色谱柱，甲醇-0.01mol/L磷酸二氢钾【用40%氢氧化钠调PH值为7.2】（70：30）为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长239nm。结果：丙酸氯倍他索和酮康唑的线性范围分别为0.01236～0.02884mg/mL和0.4799981～1.119995mg/mL，并与相应的峰面积呈线性关系，相关系数分别为r1=0.9999611和r2=0.99999583;测得丙酸氯倍他索和酮康唑的平均回收率分别为和%。结论：该法可快速、灵敏、准确测定丙酸氯倍他索和酮康唑含量，并应用于日常样品复方酮康唑乳膏的分析检测。

关键词：反相高效液相法;丙酸氯被他索;酮康唑

引言：

复方酮康唑乳膏属于外用制剂，主要用于皮肤浅表真菌感染。反相高效液相检测的主要成分分别为丙酸氯倍他索和酮康唑。丙酸氯倍他索属外用强效皮质激素，作用迅速，具有较强的毛细管收缩作用及抗炎作用。酮康唑属吡格类抗真菌药，对皮真菌、酵母菌、双相真菌和真菌纲有抑菌和杀菌作用。目前，液相色谱仪法对乳膏制剂的测定已被广泛的应用。但在实验中发现其丙酸氯倍他索和酮康总测定的方法过于繁琐、时间长和效率较慢。因此，为了能快速、准确地测定复方酮康唑乳膏中的丙酸氯倍他索和酮康唑含量，本文建立其分析方法，并应用于日常样品复方酮康唑乳膏的液相分析。

1 仪器与试剂

高效液相色谱仪（岛津企业管理（中国）有限公司，配备LC-16型二元溶剂输送泵、SPD-16型紫外-可见检测器、CTO-16型柱温箱、SIL-16自动进样器和labsolution5.83）、电子恒温水浴锅（型号HHS21-8）、十万分之一电子天平（岛津AUW220D） 、PH计（雷磁PHS-3C）和超声仪（洁康PS-60A）

丙酸氯倍他索对照品（系中国食品药品检定研究院公司提供，批号100302-201804），标准贮备液（8mg/ml）的制备：精密称取酮康唑标准品800mg，加无水乙醇溶解并定容至100ml量瓶，摇匀，备用。

酮康唑对照品（系中国食品药品检定研究院公司提供，批号100294-201203）标准贮备液（200μg/ml）的制备：精密称取丙酸氯倍他索标准品20mg，加无水乙醇溶解并定容至100ml量瓶，摇匀，备用。

甲醇（色谱纯），磷酸二氢钾（分析纯）、氢氧化钠（分析纯）、无水乙醇（色谱纯）和蒸馏水

PH计标准缓冲溶液分别（厂家：天津科密欧化学试剂有限公司，批号20180

308）：邻苯二甲酸氢钾0.05M、混合磷酸盐0.025M和硼砂0.01M

（PH值分别为4.00、6.86和9.18）

2 实验方法

2.1色谱条件 [1]

色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂Diamosilc18（2）（迪马200mm×4.6mm，5μm;批号9662493）;流动相为甲醇-0.01mol/L磷酸二氢钾【用40%氢氧化钠调PH值为7.2】（70：30）;流速为1.0ml/min，检测波长239[1]，柱温为30℃，进样体积10μL。

2.2系统适用性

理论板数按酮康唑峰计算不低于2000，酮康唑与丙酸氯倍他索间的分离度应大于2.0。[2]

2.3方法

2.3.1样品的制备

取本品4g，精密称重，置于50mL烧杯。加入无水乙醇25ml，再将其置于80℃电子水浴锅进行加热溶解10min，时而摇匀，使溶解完全;将烧杯中样品徐徐地转移50ml量瓶中，再加入少量无水乙醇分三次转移烧杯中残留样品，定容至刻度;最后置于超声仪超声30min，滤纸过滤，取续滤液放置至室温;经0.45μm滤过后直接上机。

2.3.2专属性

测定：按2.1色谱条件项下进行测定，整个过程应避光操作。丙酸氯倍他索和酮康唑。

2.3.3线性范围和检出限

丙酸氯倍他索标准系列浓度校准曲线：精密吸取丙酸氯倍他索标准贮备液3ml（60%）、4ml（80%）、5ml（100%）、6ml（120%）和7ml（140%）分别置于酮康唑相应浓度量瓶中，加甲醇-水（70：30）定容至刻度，摇匀。

酮康唑标准系列浓度校准曲线：精密吸取酮康唑标准贮备液3ml（60%）、4ml（80%）、5ml（100%）、6ml（120%）和7ml（140%）分别置于不同的50ml量瓶中，加甲醇-水（70：30）定容至刻度，摇匀。

按2.1色谱条件项下进行测定，分别以丙酸氯倍他索和酮康唑的标准系列浓度为横坐标，以各对应峰面积为纵坐标绘制标准曲线，丙酸氯倍他索和酮康唑的线性范围分别为0.01236～0.02884mg/ml和0.4799981～1.119995mg/mL，其线性方程分别为Y=2.21615×107* X和Y=1.84691×107*X，相关系数分别为r1=0.9999611和r2=0.99999583。以3倍信噪比计算丙酸氯倍他索和酮康唑的检出限平均值分别为0.00017mg/mL和0.00025mg/mL 。

2.3.4精密度

在同一天内对同一份对照品溶液连续进样6次，以测定值考察其精密度，结果测得丙酸氯倍他索和维生素D3的RSD分别为和，实验结果表明该精密度符合要求，见表3。

2.3.5供试品分析

按2.3项下测定复方酮康唑乳膏中的丙酸氯倍他索和酮康唑含量方法操作，共测定5批次，并与标准方法进行了比较，实验结果见表4。

3 讨论

3.1流動相组成改变

由于在2020版《中国药典》二部规定：复方酮康唑乳膏中涉及液相检测的主要成分为丙酸氯倍他索与酮康唑，当它们作为药物原料时，各自色谱条件中流动相分别采用缓冲盐（0.05mol/L磷酸二氢钠和0.34%硫酸氢四丁基铵溶液）与甲醇或乙腈组成比例，而在作为复方酮康唑乳膏药物制剂，所采用流动相为甲醇-水（74：26），而参照卫生部颁药品标准WS-10001-HD-0030）-2002复方酮康唑发用洗剂在色谱条件中[4]，方法规定流动相为甲醇-0.01mol/L磷酸二氢钾【用40%氢氧化钠调PH值为7.2】（70：30），因为它们主成分也是丙酸氯倍他索与酮康唑。

2020版《中国药典》二部中复方酮康唑乳膏规定流动相为甲醇-水（74：26），使主成分峰易产生前沿或拖尾，峰形变差，加之复方酮康唑乳膏的辅料较难洗脱，导致辅料洗脱时间不够，易积存干扰下一针采集，只能延长采集时间，经改为缓冲盐会抑制前沿或拖尾，改善峰形，提高理论塔板数，重复性高。同时易把辅料成分洗脱出来，大大缩短采集时间。

3.2分离度确认

由于2020版《中国药典》二部规定：复方酮康唑乳膏的系统适用性规定丙酸氯倍他索与酮康唑分离度应大于2，为了符合上述规定，将流动相比例以及组成调整为甲醇-0.01mol/L磷酸二氢钾【用40%氢氧化钠调PH值为7.2】（70：30）。

优化目的：解决色谱柱（尤其柱长150mm）不适宜作为2020版《中国药典》二部复方酮康唑乳膏规定色谱条件使用用色谱柱，因分离度稍微>2且，若色谱柱子使用频率增加，分离度就会趋向临界值（分离度接近2.0）。若更换柱长250mm，虽能提高分离度，延长采集时间，降低工作效率，若流动相比例和组成更换后，提高分离度>3，缩短采集时间，提高工作效率

3.3流速的选择

由于检测复方酮康唑乳膏中主成分丙酸氯倍他索与酮康唑，仍采用2020版《中国药典》四部规定默认流速1.0ml/min，若采用流速1.5ml/min及以上，采集时间缩短反而降低两者之间分离度，对检测来说毫无意义;若采用流速0.5ml/min，采集时间延长反而减低工作效率，缩短柱子使用寿命。

4 结论

本文对复方酮康乳膏中所含的丙酸氯倍他索和酮康唑进行样品制备步骤处理，并采用液相色谱技术，使丙酸氯倍他索和酮康唑得到良好分离和取得较为满意的测定结果。在测定的同时，与标准方法进行了比较，两者测定结果基本一致，相对标准偏差均符合2020版《中国药典》四部≤2%的规定要求[2]。该法操作简便、快速 、重现性好、分离度好、大大缩短测定时间;供试品专属性强，稳定性好，结果准确，可作为日常样品复方酮康唑乳膏的快速分析。

参考文献：

[1]中国药典（2020版），二部[S]复方酮康唑乳膏含量测定

[2]中国药典（2020版），四部[S]高效液相色谱法：通则0512

[3]ZL-SOP615-04，药品复方酮康唑发用洗剂含量测定操作规程[S]

[4]卫生部颁药品标准第一册WS-10001-HD-0030）-2002[S]复方酮康唑发用洗剂