羌活炮制工艺研究

饶 智，陈光宇，何 群，瞿昊宇*，谢梦洲*

(1.湖南中医药大学，湖南 长沙 410208；2.湖南省药食同源功能性食品工程技术研究中心，湖南 长沙 410208；3.湖南中医药大学 中医诊断研究所，湖南 长沙 410208)

羌活为伞形科植物羌活NotopterygiumincisumTing ex H.T.Chang或宽叶羌活N.franchetiiH.de Boiss.的干燥根茎和根，主要产于四川、甘肃、云南等地，在我国有数千年应用历史，是中医药常用药材，具有解表散寒、祛风除湿、止痛的功效，用于风寒感冒、头痛项强、风湿痹痛、肩背酸痛，为历版中国药典收载，以饮片入药。2015版《中国药典》羌活饮片炮制规定：“除去杂质，洗净，润透，切厚片，干燥。”各种版本的中药炮制规范中羌活的炮制工艺基本上皆为净制、软化、切制和干燥，皆无确切和具体的工艺参数，其工艺具有变数大、欠规范、可操作性不强、批间差异大、重复性差等缺点，从而影响羌活饮片的质量。为使羌活炮制工艺科学、客观、量化、数字化、可操作性强，故本实验以浸出物、挥发油、羌活醇、异欧前胡素为评价指标，参照2015版《中国药典》一部、各种炮制规范及相关文献，对羌活进行炮制工艺参数优化研究，优选出科学、合理、稳定、可行的羌活炮制工艺参数，为工业化生产提供质量一致的羌活饮片。

1 仪器与药材

1.1 仪器

Ultimate 3000高效液相色谱系统(赛默飞世尔科技(中国)有限公司；包括G1316A四元梯度泵、G1313A标准型自动进样器、G1316A恒温箱、G1314A紫外检测器、Agilent Chemstation 色谱工作站)；中文液晶台式超声波清洗器(昆山美美超声仪器有限公司)；ME204E型电子分析天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司)；TCS-100型电子台秤(上海乾峰电子仪器有限公司)；PW135型中草药粉碎机(天津泰斯特仪器有限公司)；SHH.W21电子三用水箱(北京中兴伟业仪器有限公司)；QY-1中药切片机(温州顶历医疗器械有限公司)；HWS-80B型恒温恒湿培养箱(天津市意博高科实验仪器厂)；101-0AB型电热鼓风干燥箱(北京中兴伟业仪器有限公司)。

1.2 药材及试剂

羌活购于甘肃省陇西县，经王智老师鉴定为伞形科植物羌活NotopterygiumincisumTing ex H.T.Chang的干燥根茎和根；羌活醇对照品(批号：111820-201705)购自中国食品药品检定研究院(国家药品标准物质)，供含量测定用(羌活醇含量99.9%，ID：D9EE-H3BD)；异欧前胡素对照品(批号：B21546-20 mg，BZO，HPLC≥98%，LOT：Y1808H46133)购自上海源叶生物科技有限公司；乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水；液相色谱柱(月旭，Ultimate® XB-C18，4.6 mm×250 mm，5 μm)。

2 方法与结果

2.1 羌活浸出物测定

将羌活饮片粉碎过二号筛，取羌活饮片粉末4.000 g，精密称定，用乙醇作溶剂，按照2015版《中国药典》四部通则2201浸出物测定法202页“2.醇热浸法”测定[1]。

2.2 羌活挥发油测定

按照2015版《中国药典》四部通则2204挥发油测定法203页进行测定[2]，具体操作如下：将羌活饮片粉碎过二号筛，取羌活饮片粉末，精密称定70.00 g(相当于含挥发油0.5～1.0 mL)，置2 000 mL圆底烧瓶中，加水700～1400 mL与玻璃珠5粒，振摇混合后，连接挥发油测定器与回流冷凝管。自冷凝管上端加水使充满挥发油测定器的刻度部分，并溢流入烧瓶时为止。置电热套中缓缓加热至沸，并保持微沸约5 h，至测定器中油量不再增加，停止加热，放置片刻，开启测定器下端的活塞，将水缓缓放出，至油层上端到达刻度0线上面5 mm处为止。放置2 h，再开启活塞使油层下降至其上端恰与刻度0线平齐，读取挥发油量，并计算供试品中挥发油的含量(%)。

2.3 羌活醇和异欧前胡素含量测定[3]

2.3.1 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(44∶56)为流动相；检测波长为310 nm。理论塔板数按羌活醇峰计算应不低于5 000。

2.3.2 羌活醇对照品溶液的制备 取羌活醇对照品约0.010 0 g，精密称定，于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，制成每1 mL含羌活醇1.03 mg的羌活醇浓液1；精密移取1 mL羌活醇浓液1于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，制成每1 mL含羌活醇0.103 mg的羌活醇浓液2；再精密移取6 mL羌活醇浓液2于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，制成每1 mL含羌活醇61.8 μg的羌活醇对照品溶液，过0.22 μm微孔滤膜至进样小瓶中，即得。

2.3.3 异欧前胡素对照品溶液的制备 取异欧前胡素对照品(B21546-20 mg；CAS#482-45-1；上海源叶生物科技有限公司)，精密称定，置10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，制成每1 mL含异欧前胡素1.04 mg的异欧前胡素浓液1，精密移取1 mL异欧前胡素浓液1于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，制成每1 mL含异欧前胡素0.104 mg的异欧前胡素浓液2；再精密移取3 mL异欧前胡素浓液2于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，制成每1 mL含异欧前胡素31.2 μg的异欧前胡素对照液，过0.22 μm微孔滤膜至进样小瓶中，即得。

2.3.4 供试品溶液的制备 取羌活饮片样品粉末(过三号筛)约0.4 g，精密称定，置100 mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，称定重量，超声处理(功率250 W，频率50 kHz)30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，各取10 mL滤液置离心管中离心3 min，取上清液过0.22 μm微孔滤膜至进样小瓶中，即得。

2.3.5 测定法 分别精密吸取对照品溶液5 μL与供试品溶液7 μL，注入液相色谱仪，测定，见图1-图4。

图1 羌活醇对照品HPLC图谱

图2 异欧前胡素对照品HPLC图谱

图3 羌活饮片供试品HPLC图谱

图4 羌活阴性对照品HPLC图谱(甲醇空白)

2.4 羌活原药材前处理方法[4-5]

取羌活药材，除去泥沙、杂草、非药用部位和虫蛀、霉败品，将其放入沥箕内，用自来水淋湿，旋转沥箕(模拟滚筒式洗药机)1 min，再用自来水冲洗1 min，如此操作数次，直至洗净为止(无肉眼可见泥沙灰尘等，约5 min)。

2.5 单因素考察闷润工艺

2.5.1 羌活原药材吸水实验 称取干燥羌活原药材100 g，放入广口玻璃瓶中，加水淹没药材，按表1时间浸泡，捞出药材，置沥箕内沥至无水滴下，表面无明显水迹，称重，一直浸泡至药材重量不再增加为止，记录数据。

表1 羌活原药材吸水实验结果

增重=不同时间点药材质量-0 h药材质量；增重率(%)=不同时间点药材质量-0 h药材质量/0 h药材质量×100%。摸索出泡透药材所需时间与增重质量(即润透药材“内无干心、白心、硬心”所需水量，利于切片即可)。实验表明，浸泡1 h、增重质量60%左右比较合适。

2.5.2 羌活原药材闷润时间考察 称取药材100 g，用自来水淋洗使药材表面全部湿润，将其放入广口玻璃瓶中，密闭，置20 ℃电热培养箱中，并不时摇动瓶子，待表面无明显水迹，用喷壶均匀喷入清水，边喷水边翻动药材，使药材表面全部湿润(约5%)，装入盆中盖紧，置20 ℃电热培养箱中，并不时摇动瓶子，待表面无明显水迹，再喷水、闷润，直至润透(内外含水一致、全体软化)，见表2。

表2 羌活原药材闷润时间考察结果

由表2可知，最佳闷润时间为2 h，药材吸水率达42%左右。

2.5.3 羌活原药材闷润温度考察 称取药材100 g 3份，用自来水淋洗使药材表面全部湿润，将其放入广口玻璃瓶中，密闭，分别置20 ℃、30 ℃、40 ℃电热培养箱中，并不时摇动瓶子，待表面无明显水迹，用喷壶均匀喷入清水，边喷水边翻动药材，使药材表面全部湿润，装入盆中盖紧，如此反复操作，直至润透(内外含水一致、全体软化)，记录不同温度软化所需时间，见表3。

表3 羌活原药材闷润温度考察结果

表3结果可知，20、30、40 ℃闷润均可切片，均未霉变，故闷润温度在20～40 ℃均可切片，30 ℃增重值最大，故闷润温度定为30 ℃较合适。

2.6 正交设计试验优选羌活最佳切制工艺参数

2.6.1 正交设计试验因素水平的确定 影响饮片质量(成分损失率与煎出率)的因素主要有鼓风干燥温度、饮片厚度、铺层厚度、翻动次数，考察因素水平参照文献确定[4-5]，见表4。

表4 正交设计试验因素水平

2.6.2 正交设计试验安排及数据统计处理 以浸出物、羌活醇、异欧前胡素、挥发油的含量百分率为评价指标，采用L9(34)正交设计试验安排表进行试验，其组合方案见表5。饮片样品制备：取净药材约900 g，按大小品质均分为9份，每份100 g，分别淋洗5 min，30 ℃闷润2.0 h，1、4、7号切片2 mm，2、5、8号切片3 mm，3、6、9号切片4 mm，湿饮片按表4的因素水平与表5的组合试验号进行实验，对9个试验号所得饮片按照“2.1-2.3”项评价指标及测定方法，结果见表5，极差分析见表6，方差分析见表7。由表6-表7结果可知，以挥发油含量及浸出物含量为评价指标时，因素水平皆无统计意义，各因素可取任意水平；以羌活醇为评价指标时，A因素和D因素皆有统计意义，其水平数按最佳确定，A因素取1水平，D因素取2水平；以异欧前胡素为评价指标时，A因素、C因素和D因素皆有统计意义，A因素取1水平，C因素取2水平，D因素取2水平；B因素误差最小影响最小(作为误差项)可取任意水平，即饮片切制厚度无统计意义，对结果影响最小，从降低成本考虑，B因素取3水平；综合分析可得，A因素取1水平，C因素取2水平，D因素取2水平，最终确定最佳组合为A1B3C2D2，即最佳炮制工艺为40 ℃干燥，切4 mm厚片，堆放1 cm厚，翻动2次。

表5 羌活炮制正交设计试验安排及实验结果 (%)

表6 羌活炮制正交设计试验极差分析结果

表7 羌活炮制正交设计试验方差分析(完全随机模型)

2.6.3 羌活炮制正交设计验证试验 取除去杂质和泥沙的羌活原药材3份，每份1 000 g，淋洗5 min，装入不锈钢桶中盖紧密闭，分别置30 ℃电热培养箱中，用喷壶均匀喷入清水，边喷水边翻动药材，使药材表面全部湿润，闷润2 h，再按正交试验确定的最佳组合因素水平，即切4 mm，堆放1 cm厚，40 ℃干燥，翻动2次，进行验证试验，并与同批次原药材3份样品比较，按“2.1-2.3”项评价指标及测定方法，结果见表8。

表8 正交设计验证试验结果

由表8结果可知，挥发油、浸出物、羌活醇、异欧前胡素等指标均优于正交设计中最佳的2号，量值传递率均达到90%以上，表明优选出的工艺稳定可靠。

3 结语

羌活中含挥发油及挥发性成分(羌活醇、异欧前胡素等)较多，故炮制工艺中尽可能降低闷润、干燥温度，试验结果也证明了温度不宜过高，避免羌活挥发油及挥发性成分损失。

羌活炮制工艺中的干燥时间以干燥至含水量达5%为标准，故无须考察干燥时间，而且正交设计试验9个样品的含水量皆一致，使实验结果具有可比性。

羌活有两种基原，即羌活和宽叶羌活，本实验药材系羌活，若是宽叶羌活，则炮制工艺参数必须调整，宽叶羌活个头大，除泥沙难，淋洗时间长，闷润时间长，干燥时间也长，故须根据药材来源、质地灵活掌握调整羌活炮制工艺参数。

本实验闷润采用恒温恒湿培养箱，不但可控制温度，也可控制湿度，设定为RH=80%，使实验过程中闷润的湿度参数一致，结果具有可比性。

随着科学技术的进步中药炮制逐步走向现代化、智能化，如：干洗法清洗药材，采用切药机切片，则无需闷润软化，更不需要加热干燥。本实验开始采用手工切片，因切的厚度不一，改用切药机切片，发现可以不经闷润过程，药材淋洗后，沥干水可直接用切药机切片，若采用干洗技术，无需加热，则可彻底颠覆传统的炮制方法。