渐尖叶粉花绣线菊中连翘脂素的分离与鉴定

车 畅，段晨晨，张学晶，李春斌，石玉生

(大连民族大学 生命科学学院，辽宁 大连 116605)

植物用药在中国已有多年的历史，一直扮演着重要的角色。在不同领域的书籍中对植物药也有着广泛的记载。《中药大词典》就记载着绣线菊属 (Spiraea) 植物的药用价值，如渐尖绣线菊具有通便利尿[1]、调经止痛、消肿解毒、去腐生肌、明目退翳的功效[2]。绣线菊属植物属蔷薇科，绣线菊亚科[3]，全世界约有100种，主要分布于北温带[4]，中国约有70多种，主要分布于河南、陕西、甘肃、云南、四川等地区[5]。绣线菊属植物为多年生落叶灌木，大部分植物的花色艳丽，叶子细致，大多生长在山坡旷地、疏密杂木林、山谷或河沟旁，生长适应性强，种子、叶、根均可入药。近年研究发现绣线菊属植物中含有生物碱[6-7]、萜类[8]、黄酮[9]、木脂素、苯丙素类、甾体等多种化学成分，现代药理研究结果也表明该属植物具有抗血栓[10]、抗菌[11]、抗病毒[12]、抗血小板聚集[13]、抗炎、抗氧化、抗疲劳等作用[14]。

1 材料与方法

1.1 材 料

材料：采自于云南的渐尖叶粉花绣线菊全草，黑龙江中医药大学陈效忠副教授鉴定其为渐尖叶粉花绣线菊(SpiraeajaponicaL.f.var.acuminataFranch)，样品标本现保存于黑龙江中医药大学中草药标本馆。

1.2 仪器与试剂

仪器：LT-TQNS-200，200L提取浓缩机组，北京中联台电机械有限公司；LC-20AD高效液相色谱仪，日本岛津SHIMADZU；LCMS-2010EV液相质谱仪，日本岛津SHIMADZU；LC100半制备等度液相色谱，北京赛诺华博科技有限责任公司；DC952505-0分析色谱柱，Agela Technologies；YMC-Pack ODS-A半制备色谱柱，Agela Technologies；其他设备均为实验室常规设备。

试剂：色谱纯甲醇，Avantor Performance Materials；色谱纯乙腈，Avantor Performance Materials；色谱纯三氟乙酸，Avantor Performance Materials；硅胶100～200目，国药集团化学试剂有限公司；ODS，Agela Technologies；其他试剂均为国产分析纯试剂。

2 提取分离

取干燥渐尖叶粉花绣线菊全草30 kg粉碎，用95%乙醇100 L浸泡4 h后，加热回流提取3次，每次3 h，提取液减压回收，浓缩得到1.2 kg浸膏。将得到的浸膏加入0.1mol·L-1的盐酸调节浸膏pH为2～3。分别用石油醚和乙酸乙酯萃取，分别得到石油醚层萃取物和乙酸乙酯层萃取物。用浓氨水调节萃取物pH为9～10，然后用二氯甲烷萃取，得二氯甲烷萃取物，用旋转蒸发仪减压浓缩，得到初提物260 g。初提物用硅胶柱层析进行分离，用不同比例的甲醇和二氯甲烷依次进行洗脱，分别为50∶1、30∶1、25∶1、20∶1、15∶1、10∶1、8∶1、5∶1、3∶1、1∶1。通过薄层色谱法将组分相似的进行合并，旋转蒸发仪减压浓缩，得到浸膏，共得到用9个部位命名为CHE1～9。CHE4部位洗脱物浸膏采用甲醇-水梯度洗脱的条件使用中压制备进行分离，用浓度为10%～80%的甲醇进行洗脱，每500 ml为一个组分，共得到65个组分。将组分用高效液相进行检测分析，筛选出含有目标成分的组分；将这些筛选出的样品通过改变波长、流动相等条件找到分离度较好的制备条件。

3 实验结果

化合物1 白色粉末；1H-NMR (600MHZ, CD3OD) δH:7.00 (1H, s, H-2), 6.80 (1H, d, J=8.2 HZ, H-5), 6.97 (1H, d, J=8.2 HZ, H-6), 4.11 (1H, d, J=7.2HZ, H-7), 2.93 (1H, m, H-8), 4.12 (1H, m, H-9a), 3.82 (1H, m, H-9b), 4.88 (1H, d, J=5.1HZ,H-7'), 3.31 (1H, m, H-8'), 3.84, 3.42 (H2-9'), 3.85, 3.85, 3.84 (各3H, s, CH3O-3,3',4');13C-NMR (150MHz, CD3OD) δC:133.2 (C-1), 111.3 (C-2), 149.5 (C-3), 147.8 (C-4), 119.6 (C-5), 119.6 (C-6), 89.8 (C-7), 56.1 (C-8), 71.1 (C-9), 133.2 (C-1'), 111.3(C-2'), 149.5 (C-3'), 147.8 (C-4'), 116.5 (C-5'), 116.5 (C-6'), 83.7 (C-7'), 51.6 (C-8'), 71.1 (C-9'), 56.8 (9H,CH3O-3,3',4')。数据与文献[15]报道基本一致，故确定化合物1为连翘脂素。化合物1结构式如图1, 化合物1液相色谱图如图2。

图1 化合物1结构式

图2 化合物1液相色谱图

4 讨论与展望

本实验所鉴定出的化合物连翘脂素为木脂素类化合物，为首次在本植物中发现的化合物，由于纯化分离的量较少，本实验并没有进行活性鉴定。但查阅大量文献后了解到连翘脂素作为药物的重要性，例如：连翘脂素在对人肝癌细胞(SMMC-7721)体外活性实验研究中，具有活性；对小鼠黑色素肉瘤细胞(B16)也具有较强的抑制活性。同时研究表明连翘脂素具有较强的抗炎，抗氧化，降血脂活性，具有重要的医学价值[16]。在今后的实验中可以深入研究化学成分的细胞活性。本植物中主要的化学成分还有生物碱类和萜类，这两类化合物也具有很大的开发和利用价值。绣线菊属植物作为植物用药，在中国已有几百年的历史。但目前对粉花绣线菊的检测研究很少，尤其是绣线菊变种。本实验建立了渐尖叶粉花绣线菊中连翘脂素的提取纯化和含量测定的方法，为绣线菊属植物的药用价值和后续开发提供了依据。