牛病毒性腹泻病诊断技术研究进展

周登鹏

甘肃省灵台县星火乡畜牧开发服务站,甘肃灵台 744411

近年来，随着中国畜牧业的持续发展，中国牛病毒性腹泻的流行正在增加,严重阻碍了中国畜牧业的健康发展，造成了巨大的经济损失，同时这种病广泛分布在鹿的养殖场，牛病毒性腹泻病毒是鹿难治性腹泻的主要病原体。

1 BVDV的传播和现状

1.1 BVDV的传播

分离和判断BVDV的方法有很多，一般来说，BVDV是由牛内腔、血液、肾脏淋巴结以及肠间膜淋巴结的分泌来传达的，分离是由胎儿牛肾脏细胞和小牛精巢细胞的接种决定的。

1.2 BVDV的现状

自从发现牛病毒性腹泻黏膜病以来，在世界上广泛传播。基因型多，病原性复杂，它可以产生永久性的感染症和免疫耐受。近年来，国内外很多研究人员都关注着牛病毒性腹泻性黏膜病病毒，尤其是主要防御抗原E0和E2的分子结构和蛋白质功能，为转换诊断技术和开发新疫苗打下了坚实的基础。

2 血清学诊断

2.1 中和试验

这个经常被研究所的研究人员使用，这可以用来诊断牛的病毒性腹泻和黏膜疾病。1～3周内采集两次血液样品，稀释血清。如果第二个涡轮增压器是最初的两倍大小，则可以认为是被怀疑的疾病，可以确定是4倍以上的阳性。但是，这种方法的诊断是有限的。如果检测出的感染牛是阴性的话，牛就可以免疫耐受。因此，为了准确有效地诊断牛的病毒性腹泻，需要结合其他有用的方法。

2.2 免疫琼脂扩散法

这种方法简单实用，实验室人员操作简单，通常溃疡或炎症组织的黏膜与BVDV阳性血清直接反应来检测抗原。标准阳性抗原可以用来检测疾病动物的血清，但其灵敏度低于中和测试。检测BVDV抗体并与微中和测试进行比较。外国学者也得出了同样的结论，在检测牛病毒性腹泻病免疫琼脂扩散法不能替代中和试验方法。

2.3 蛋白A胶体金免疫电镜法

它可用于直接鉴定病原体或细胞，调查病毒颗粒的形状。但其特异性和敏感性较低，易被病毒样颗粒搅扰。很难调查病毒颗粒本身。

2.4 免疫过氧化物酶法

这是正确可靠的诊断牛病毒性腹泻的方法，这种方法广泛用于抗体检测。感染细胞通过单层培养浓缩，BVDV感染细胞无色，可以通过使用结合二磷酸抗生物质蛋白质二氧基激酶检测系统的单克隆抗体来改善检测的特异性和准确性。

2.5 免疫荧光技术

这是一种通过将免疫组织的特异性和感受性与显微镜技术相结合，能够检测病毒粒子，快速检测感染病理组织的细胞培养的新技术。

2.6 酶联免疫吸附实验 (ELISA方法)

良好的检测方法可以检测BVDV的抗体水平，基于抗原抗体特异性耦合的原理，ELISA具有高灵敏度，强特异性和高检测精度的优点。

3 BVDV的分子生物学检测技术

3.1 核酸扩增技术

由于在牛病毒性腹泻的诊断中应用了分子生物学的检测技术，核酸放大在临床检查中被广泛使用。牛的病毒性腹泻的诊断主要方法是体外循环(LAMP)等温扩增、一步RT-PLR、双RT-PLR、嵌套RT-PLR、实时荧光定量RT-PLR下的等温放大。这些技术识别了不同的BVDV基因类型，并在分子水平上检测BVDV。

3.2 核酸探针杂交

与传统方法相比，核酸杂交具有高灵敏度和特异性。初始主要使用放射性同位素探针，辐射障碍和稳定性低。之后，开发了生物标记DNA探针。虽然探针没有放射性损伤，但是其特异性与放射性同位素不同。