女贞子的心脏抗氧化作用

梁雪兰　张志强　江洪波

摘要：目的：研究女贞子提取物对不同器官的抗氧化活性差异。方法：将女贞子用超声提取后，用D101大孔树脂分离为不同部位，进行小鼠体内抗氧化活性测试。用试剂盒检测小鼠血清及心、肝、肾组织中（N1和对照组）MDA含量、SOD和GSHpx酶活性。结果：女贞子提取物及分离部位可显著降低小鼠血清MDA含量，提高小鼠的血清及组织SOD和GSHpx活力。结论：女贞子提取物均具有体内抗氧化活性，且对心肌有较高的选择性。

关键词：女贞子;抗氧化;D101大孔树脂;水洗部位

补阴中药女贞子，具有扶正固本的功效，分布非常广泛，资源较为丰富，冬季女贞树（Ligustrum lucidum Ait.）果实成熟，变为乌黑时采收，女贞为木犀科植物女贞的干燥成熟果。《神农本草经》记载将其列之为上品，味苦平，主补中，安五脏，养精神，除百病，具有较为广泛的功效。现代医药学研究证明，女贞子其化学成分主要有三萜类、环烯醚萜苷类、黄酮类、多酚类、多糖、氨基酸、色素等多类化合物。女贞子与许多慢性疾病如骨质疏松、高血压、高血糖、高血脂、胃肠消化系统、内分泌系统、衰老等有关，这些疾病均与人体内累积过多的氧自由基存在某种关系[1]。许多学者研究表明女贞子提取物，及其含有的黄酮、环烯醚萜苷、酚类等化学成分有较强的清除自由基及抗氧化作用[2，3]。本文用女贞子的提取物，系统萃取分离后，用不同萃取部位制成混悬液或溶液对小鼠灌胃喂养，对照组小鼠灌胃纯净水，以此来研究女贞子提取物，提取物的不同萃取部位，喂养组小鼠与正常对照组小鼠血清中的超氧化物歧化酶（SOD）活力差异、谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）及丙二醛（MDA）含量差异。用来判断女贞子提取物及不同萃取部位体内是否具有抗氧化作用，为女贞子的开发利用提供一定的理论依据和支持，期望在抗氧化和抗衰老方面能做出相关产品。

1 实验材料

1.1 材料

女贞子采自四川绵阳市涪城区四川医专南山校区校园内（样品存于四川医专北校区药化实验室内，编号NZ2017），经郑雷博士鉴定为木犀科植物女贞Ligustrum lucidum Ait.的干燥成熟果实。

1.2 仪器设备

JP100S超声波提取仪（深圳洁盟设备有限公司）;TU1900型双光束紫外分光光度计（北京普析有限责任公司）。

1.3 試剂

D101大孔树脂;DPPH（2，2二苯基1苦基肼，sigma）;谷胱甘肽过氧化物酶试剂盒、丙二醛试剂盒、超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒（南京建成生物工程研究所）;其余试剂为分析纯。

1.4 实验动物

普通级昆明小白鼠，雌雄各半，11月龄，合格证编号：SYXK（川）2017113;小白鼠普通喂养饲料。

2 方法

2.1 女贞子测试样品的准备

取0.8千克女贞子，料液比1∶5，置于5000mL三角瓶中，用无水乙醇浸泡48小时候后，用超生提取器，提取液温度30℃，提取3次，每次0.5h。合并滤液，旋转蒸发仪减压浓缩，抽干，得147.4g浸膏，编号N1，冰箱保存备用。取N1约100g，搅拌分散于1000ml水中，上样D101大孔树脂柱，首先用蒸馏水洗脱至无色，出去高极性小分子单糖类等化合物，再用50%乙醇水溶液继续洗脱，直至洗脱液变为无色。将各洗脱部分减压浓缩，得女贞子水溶性部分浸膏（N2）54.5g和女贞子50%乙醇水溶液部浸膏（N3）39.8g。

2.2 体内抗氧化作用研究

用小白鼠为实验对象，通过喂养给药，给药四周后，通过试剂盒检测小鼠血清中的MDA及GSHPx含量和及SOD活力，评价女贞子提取物及各部位在小白鼠体内的抗氧化作用。

2.2.1 给药方法及取样方法

将小鼠进行适应性喂养5d后，随机分成4组：对照组，女贞子粗提取物N1组，女贞子水溶性N2组和女贞子50%乙醇水溶液部N3组，雌雄各半，每组10只小鼠。普通对照组的小鼠采用0.9%生理盐水灌胃，N1组，N2组和N3组分别灌胃女贞子提取物混悬液、女贞子水洗部溶液，女贞子50%乙醇水溶液洗部混悬液，灌胃给药量为400mg/kg，一共给药4周。实验期间饲普通饲料喂养，自由摄食和饮水。实验第28天小鼠空腹过夜，称重后眼眶取血，离心分离血清（4℃，3000r/min，10min），并于-20℃保存待测。N1组和对照组小鼠取血后，颈椎脱臼处死，取心、肝、肾，以冰生理盐水洗去浮血，滤纸吸干，称重。再用预冷的PBS缓冲液（pH74，0.2mol/L）做匀浆介质在冰浴下，将各器官组织进行机械匀浆（1.0g湿组织加9.0ml缓冲液），后于4℃，离心10min（6000r/min），分离出上清液，-20℃保存待测。

2.2.2 检测方法

GSHPx含量、SOD活力及MDA含量测定按照试剂盒说明书完成。

2.2.3 数据处理

最终的实验数据用x±s形式表示，采用t检验，进行显著性检验，SPSS软件统计、分析和比较。

3 结果（体内抗氧化实验）

3.1 血清中GSHPx、MDA含量及SOD活力比较

女贞子粗提取物（N1），提取物水溶性部位（N2）和提取物50%醇部位（N3）喂养组小鼠血浆内的GSHPx活性、SOD含量均高，而MDA水平相比于对照组降低（p<0.01）。且N2组小鼠血浆内的SOD，GSHPx活性（含量）比N3组及N1组高，且MDA水平最低。N1，N2和N3均有体内抗氧化活性，且N2体内抗氧化活性更佳。

3.2 组织中SOD活力，MDA及GSHPx含量（N1组）

由表2可知，女贞子提取物（N1）组小鼠的心肌和肾SOD活力均高于正常对照组，特别是心肌SOD活力显著高于正常对照组，而肝组织中的SOD活力有所下降。N1组小鼠肝、肾的MDA含量分别低于和高于对照组，但变化不大，而心肌的MDA含量显著低于对照组。N1组小鼠的肝、肾组织GSHpx活力值虽高于正常对照组，可是不是太明显，但心肌的GSHpx活力比对照组较为明显升高，显示N1对心肌有一定的靶向性，GSHpx值的升高最为显著。

4 讨论

女贞子的乙醇提取物（N1）和，富集得到的水洗脱部位浸膏（N2）和50%乙醇洗脱部位浸膏（N3）清除DPPH自由基的能力都比较强，具有良好的自由基清除能力。经D101大孔树脂分离的水洗脱的N2部位主要含有水溶性的成分，如花青素、多酚类、环烯醚萜苷类等化学成分，清除DPPH·自由基的能力最强，参考文献强于维生素C。N3主要含黄酮类成分，黄酮类的清除自由基的能力也较强，故N3比女贞子粗提取原液清除自由基能力强。体外清除自由基的能力强弱分别为：N2>N3>N1。

超氧化物歧化酶SOD是一种重要的金属酶，存在于各种生物体内的，它能催化生物氧化，使产生的O2转变成H2O2和H2，减少对细胞的损伤，起到保护细胞的作用[5]。表1数据表明，小鼠的血清SOD水平高低为：N2组>N3组>N1组>对照组。血清GSHPx活力高低为：N2>N3>N1>对照组。丙二醛MDA为脂质过氧化反应的产物，MDA水平的高低，间接反映生物体内自由基生成与清除的平衡状态。MDA含量高低为：对照组>N1>N3>N2。

喂食女贞子（N2）组小鼠血清中GSHPx含量，SOD水平最高，MDA含量最低，表明女贞子中的化合物有抗氧化作用。与对照组对比，GSHPx含量，SOD水平分別增加71%和15%，MDA含量降低17%。这表明各女贞子组均有提高体内抗氧化能力的作用，但主要含有环烯醚萜苷类和花青素类等的N2组在体内抗氧化能力提高最强。在某种程度上展示了体外清除DPPH·自由基能力与体内抗氧化能力之间有一定的相关性。

喂食女贞子粗提物N1组小鼠的心肌中的SOD活力显著高于对照组，MDA含量显著低于对照组，GSHpx活力值高出正常对照组较为明显，而肝肾组织中SOD，MDA，GSHpx指标变化不是太明显或略有下降。显示了N1的抗氧化作用对心肌最强，对由于各种原因导致的心脏自由基增多，都可能有较好的清除作用，从而起到保护心肌的作用。

女贞子在四川地区冬春季为鸟儿主要食物，且在我国分布广泛，资源丰富，是一种比较理想的天然来源的抗氧化资源。因此对女贞子进一步研究，并将其开发成为天然抗氧化产品有一定的可行性。女贞子产品可能对人体保障机体健康、预防疾病，特别是与自由基过多的心脏相关疾病有重要意义。

参考文献：

[1]钟秀倩.氧自由基与疾病[J].韶关学院学报：自然科学，2006，27（6）：8790.

[2]边晓丽，王晓理，李金娜，等.6种抗衰老中药清除氧自由基和抗脂质过氧化作用的测定[J].西北药学杂志，2001，16（2）：6869.

[3]刘新，夏雪奎，袁文鹏，等.女贞子体外抗氧化活性研究[J].山东中医药大学学报，2010，34（4）：364365.

[4]赵艳红，李建科，李国秀.天然抗氧化物体外活性评价方法的优选与优化[J].食品科学，2008，29（6）：6469.

[5]宫璀璀，郑玉霞，郑乃刚，等.金银花在体内抗氧化作用的实验研究[J].实用医药杂志，2006，23（5）：584585.

基金项目：四川中医药高等专科学校项目基金：女贞子抗衰老研究（17ZRYB03）

作者简介：梁雪兰（1969—），男，汉族，四川南充人，本科，高级职称，研究方向：中药学应用。

*通迅作者：江洪波，研究方向：中药活性成分研究。