小儿咳喘灵制剂中麻黄碱类成分的快速定量方法研究

王亚琼，钟水生，张华锋

(苏州市药品检验检测中心，苏州 215104)

小儿咳喘灵制剂源自医圣张仲景的经典名方麻杏石甘汤，由麻黄、金银花、板蓝根、苦杏仁、甘草、石膏和瓜蒌7味药材组成，具有宣肺、清热、止咳、祛痰的功效。小儿咳喘灵颗粒剂现行标准为《卫生部药品标准》中药成方制剂第四册及20个注册标准。小儿咳喘灵口服液现行标准为《中国药典》2020年版一部、《卫生部药品标准》中药成方制剂第四册及5个注册标准。现行标准数量繁多、质量控制指标及限度差异大，其中麻黄碱的分析方法均为液相分析法。麻黄碱作为小儿咳喘灵制剂中明确药效的主要成分，普通液相分析提取方法复杂、耗时，同时普通的C18色谱柱对盐酸麻黄碱及盐酸伪麻黄碱的分离也有一定的困难[1-4]。毛细管电泳法(CE)可用水溶液直接进样，无需提取，直接分析麻黄碱类成分[5-10]。为了对市场上该制剂中麻黄碱类成分的含量进行快速定量分析，拟采用CE法对样品中盐酸麻黄碱及盐酸伪麻黄碱的含量进行快速测定，并与水蒸气蒸馏法联合高效液相分析方法(WD-HPLC)的测定结果进行比较。

1 仪器与试药

1.1仪器 安捷伦7100型电泳仪及DAD检测器，CE毛细管柱(美国Agilent公司)；AG245 型十万分之一电子天平(瑞士METTLER-TOLEDO公司)。Waters 2695-2998型液相色谱仪及DAD检测器(美国Waters公司)。

1.2试药 实验药品源自2018年国家药品评价性抽样中的抽样样品：小儿咳喘灵颗粒剂[批号1707033，湖南富兴飞鸽药业有限公司；批号161202，江西民康制药有限公司；批号171106，四川省通园制药有限公司；批号4161214、4171010，通化万通药业股份有限公司；批号170888、170908，健民集团叶开泰国药(随州)有限公司；批号171101，广西药用植物园制药厂；批号20171106，黄石燕舞药业有限公司；批号1712004Z，华润三九(黄石)药业有限公司]。小儿咳喘灵口服液(批号20170702，山东孔府制药有限公司；批号170516，陕西步长制药有限公司；批号20171202，杭州老桐君制药有限公司；批号171202，重庆小葵花儿童制药有限公司；批号171133，江西南昌制药有限公司；批号170701，江西药都樟树制药有限公司；批号20170704，库尔勒龙之源药业有限责任公司；批号170501，亚宝药业四川制药有限公司；批号180102，吉林市双士药业有限公司；批号1801078，浙江天一堂药业有限公司)。浓缩型小儿咳喘灵口服液(批号1712019)，哈尔滨市康隆药业有限责任公司。对照品：盐酸麻黄碱(批号171241-201508，质量分数为99.8%)盐酸伪麻黄碱(批号171237-201208，质量分数为99.9%)，均购自中国食品药品检定研究院。纯水(自制)；0.05 mol·L-1四硼酸钠缓冲液(pH 9.3)，0.1 mol·L-1氢氧化钠溶液(美国Agilent公司)。

2 方法与结果

2.1电泳条件及色谱条件 毛细管柱：CE 毛细管，未涂渍熔融石英，内径 50 μm；有效长度56 cm；检测波长：207 nm；盒式温度：20 ℃。高压系统：启用高压，电流：100 μA；功率：5.0 W。停止时间：6 min。注入：25 mbar，持续10 s。液相色谱条件：Waters 2695-2998液相色谱仪，采用Polar-phenyl (250 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱，以乙腈-2 mL·L-1磷酸(5∶95)为流动相，检测波长：207 nm。

2.2溶液的制备

2.2.1混合对照品溶液 分别精密称取盐酸麻黄碱及盐酸伪麻黄碱对照品10.0 mg，加水定容至20 mL量瓶中，备用。

2.2.2供试品溶液 精密称取小儿咳喘灵颗粒剂样品2 g，加水溶解并定容至10 mL，经0.22 μm水性滤膜过滤，即得供试品溶液1。精密量取小儿咳喘灵口服液样品1.5 mL，直接经0.22 μm水性滤膜过滤，即得供试品溶液2。

2.2.3阴性溶液 分别精密称取缺麻黄的模拟制剂样品颗粒2 g和口服液1.5 mL，同2.2.2项下方法制得阴性溶液1和阴性溶液2。

2.3方法学验证

2.3.1专属性实验 分别取2.2项下制备的混合对照品溶液、2种供试品溶液以及2种阴性溶液，记录色谱图，盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱色谱峰保留时间与对照色谱峰一致，各成分相互无干扰，见图1。

图1 电泳图谱

2.3.2线性关系考察 采用对半稀释法将混合对照品溶液制成系列标准曲线溶液，按照2.1项下电泳条件分别进样测定，以各对照品的峰面积为纵坐标(y)、质量浓度为横坐标(x)绘制标准曲线，并计算回归方程。逐级稀释，按照2.1项下色谱条件分别进样测定，以3倍信噪比估算检出限，结果见表1。

表1 回归方程与线性范围

2.3.3精密度实验 取2.3.2项下制备的系列混合对照品溶液，连续进样6次，计算出2种成分的精密度RSD值分别为4.11%、4.45%，均小于5%，表明该仪器精密度良好。

2.3.4稳定性实验 取2.2.2项下制备的2种供试品溶液，分别放置0、2、4、8、16、24 h后，按照2.1项下色谱条件分别进样测定，计算RSD值，结果颗粒剂中2种成分的RSD值分别为1.31%、1.41%，口服液中2种成分的RSD值分别为1.28%、3.16%，均小于5.00%，表明供试品溶液在室温放置24 h稳定性良好。

2.3.5重复性实验 取2.2.2项下制备的2种供试品溶液，按照2.1项下色谱条件分别进样6次，测得颗粒剂中2种成分的RSD值分别为0.76%、1.38%，口服液中2种成分的RSD值分别为0.66%、2.55%，均小于5.00%，表明实验重复性良好。

2.3.6回收率实验 分别取3份不同厂家的供试品溶液(小儿咳喘灵颗粒剂，批号分别为161202、171106、1712004Z；小儿咳喘灵口服液，批号分别为20170702、171202、171133)，分别精密加入与样品中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱等量的对照品，按照2.2.2项下方法制备供试品溶液，滤过，按照2.1项下色谱条件分别进样测定，结果3批颗粒剂中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的平均回收率分别为98.73%、100.49%。3批口服液中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的平均回收率分别为96.54%、93.47%，颗粒剂的回收率略高于口服液。

2.3.7样品含量测定 CE法除浓缩型小儿咳喘灵口服液的电泳色谱行为异常外，其他样品均可在5.5 min内完成盐酸麻黄碱及盐酸伪麻黄碱的测定，且二者分离度好，色谱峰纯度高。WD-HPLC法测定经系统的条件考察和方法学研究，样品处理条件确定为：精密称取小儿咳喘灵颗粒剂1 g(或小儿咳喘灵口服液5 mL)，加100 g·L-1氢氧化钠溶液120 mL，蒸馏，蒸馏液用盛有10 mL·L-1盐酸5 mL的100 mL量瓶收集近95 mL后，加水定容至刻度，取续滤液，作为液相分析的供试品溶液。将二者的测定结果进行比较，结果见表2和表3。

表2 小儿咳喘灵颗粒剂中盐酸麻黄碱及盐酸伪麻黄碱的含量比较

表3 小儿咳喘灵口服液中盐酸麻黄碱及盐酸伪麻黄碱的含量比较

2.3.8相关性分析 采用SPSS 22.0软件对小儿咳喘灵口服液中麻黄碱类成分的含量与口服液中蔗糖的含量进行相关性统计学分析，结果见表4。

表4 小儿咳喘灵口服液中盐酸伪麻黄碱RSD值与蔗糖的含量相关性分析

3 讨论

对小儿咳喘灵颗粒剂及口服液不同厂家10个批次样品中盐酸麻黄碱及盐酸伪麻黄碱的含量进行CE法的快速测定，并与采用WD-HPLC法测定的结果进行比较，结果发现，2种检测方法的含量测定结果基本一致。通过相关性统计学分析发现，小儿咳喘灵口服液中盐酸伪麻黄碱的RSD值与蔗糖含量呈正相关(r=0.867，P=0.001)。蔗糖的含量超过5%的小儿咳喘灵口服液在CE法测定中盐酸伪麻黄碱的测定值偏低。杭州老桐君制药有限公司和江西南昌制药有限公司2个厂家的口服液中蔗糖含量较高，盐酸伪麻黄碱的CE法测定结果偏低。哈尔滨市康隆药业有限责任公司的浓缩型口服液在CE法分析中无法正常出峰，只能采用WD-HPLC法进行分析。

采用CE法对小儿咳喘灵颗粒剂及口服液中盐酸麻黄碱及盐酸伪麻黄碱的含量进行测定，时间为5.5 min，二者分离度好，不受其他杂质干扰，色谱峰纯度高，但不适合浓缩型制剂及蔗糖含量超过5%的制剂分析，浓缩型制剂和蔗糖含量对CE法分析的影响原因还需进一步研究。总体而言，采用CE法对麻黄碱类成分进行测定，不需要经过萃取或蒸馏等复杂的前处理方法，水溶液过滤后直接进样，分析时间短，适合短时间内对大批量样品进行快速分析。