新疆石河子地区临床型奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定及耐药性分析

杨瑞钰，屈勇刚，李 静，常军帅，何高明

(石河子大学动物科技学院，新疆 石河子 832000)

0 引言

乳制品，尤其是牛奶，是人们最基本的食物来源之一[1]。全球对乳制品的需求日益增长，促使人们需要提高单头奶牛的平均产奶量。牛奶产量的增加是由于遗传选择以及奶牛营养和管理改善双重影响的结果。影响高产奶量的最大问题之一是乳房健康不佳，尤其是奶牛乳房炎。根据目前的研究表明，奶牛乳房炎的发病原因多为细菌感染，常见的致病菌为金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和链球菌[2]。有研究显示，金黄色葡萄球菌感染引发的奶牛乳房炎常发生于泌乳高产期的患病奶牛[3]；链球菌引发的奶牛乳房炎常发生于干乳早期[4]；大肠杆菌引发的奶牛乳房炎多见于产后泌乳高峰期[5]。本研究拟对新疆石河子地区奶牛场引起奶牛乳房炎的病原菌情况展开研究，以期掌握该地区致病菌及耐药的分布情况，为奶牛乳房炎治疗的新方法奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

血琼脂平板、LB液体培养基、LB固体培养基、BHI液体培养基、BHI固体培养基、麦康凯琼脂平板、高盐甘露醇培养基和革兰氏染色液；主要试剂包括牛肉高、琼脂粉、蛋白胨、氯化钠等，均为国产分析纯；生化鉴定管和药敏纸片购于杭州天和微生物试剂有限公司，药敏纸片包括青霉素G、氧氟沙星、卡那霉素、克林霉素、万古霉素、氨苄西林、红霉素、诺氟沙星、庆大霉素、链霉素、复方新诺明、头孢噻污、环丙沙星等。

1.2 方法

1.2.1 奶样采集

2020年5—7月采集石河子地区周边奶牛场确诊临床型奶牛乳房炎的奶牛奶样，使用灭菌离心管收集，4℃备用，共采集样品121份。

1.2.2 病原菌的分离

使用接种环蘸取奶样划线接种于BHI琼脂平板上，37℃过夜培养，观察菌落形态特点；挑取单个菌落分别接种于LB琼脂平板、血琼脂平板、高盐甘露醇平板、麦康凯琼脂平板，37℃培养过夜；继续挑取单个菌落，进行多次纯化培养。

1.2.3 病原菌的鉴定

观察菌落形态、革兰氏染色镜检，利用生化鉴定管采取不同的生化鉴定方法。

1.2.4 耐药性试验

采用Kirby-Bauer法检测分离菌的药物敏感性。

2 结果与分析

2.1 病原菌的形态和培养特性

金黄色葡萄球菌在LB琼脂平板上的菌落特性为黄色圆形中等大小，表面光滑湿润、边缘整齐，在血琼脂平板上形成湿润、光滑、较大的菌落隆起，表现为明显的β溶血，镜检结果为革兰氏阳性，呈葡萄串状排列。大肠杆菌在普通琼脂平板上形成圆形凸起、光滑、湿润、半透明、灰白色的大菌落，表现为波浪形蔓延生长，在血琼脂平板上部分菌株有溶血现象，在麦康凯琼脂平板上形成红色菌落，镜检结果为格兰仕阴性，杆状，两端钝圆。链球菌在普通琼脂平板上不生长，在血琼脂平板上形成灰白色、半透明、表面光滑、圆形隆起的小菌落，一般能够产生α或β溶血。

2.2 生化试验结果

金黄色葡萄球菌、链球菌和大肠杆菌的生化鉴定试验结果如表1、表2、表3所示。

表1 链球菌的生化特性鉴定结果

表2 链球菌生化特性鉴定结果

表3 大肠杆菌的生化试验结果

2.3 细菌分离鉴定结果

对121份样品中分离出的203株病原菌的分离鉴定结果如下：金黄色葡萄球菌97株、大肠杆菌33株、链球菌43株。

2.4 耐药性结果

几种病原菌对常用抗菌素的耐药性，具体如表4所示。

表4 抗生素耐药检测结果

3 讨论与分析

本研究主要从患临床型乳房炎的奶牛奶样中分离出203株病原菌，对其进行分离鉴定，主要为金黄色葡萄球菌、大肠杆菌及链球菌，为引起奶牛乳房炎的主要致病菌，该结果与其他学者的研究结果相似[6-7]。据不同研究结果显示，金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和链球菌是分离到最多的菌株。在不同饲养环境和不同地域的奶牛乳房炎病原菌表现出不同的特点[8]。

不同地区的病原菌对相同抗菌药物所表现出的耐药性也有不同[9]；同一菌种的不同菌株对某种药的耐药性也有不同。该种情况的出现很大程度上与抗生素的滥用有关。根据药敏试验结果显示，该奶牛场的细菌对多种不同抗菌素产生了耐药，出现对复方新诺明、青霉素和万古霉素的多重耐药性。为在实际生产应用中选用合适的抗生素提供了一定的依据。