液相色谱法测定果酱中的柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红、亮蓝

为了改善食品的颜色或外观，从而有利于产品销售，着色剂在食品工业中得到了很广泛的应用。与天然色素相比，合成着色剂的着色力强、色泽鲜艳、不易褪色、稳定性好、易溶解、易调色、成本低，但安全性低，所以国家对合成着色剂的监管很严格。

根据GB 2760-2014《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》的规定，果酱（食品分类号04.01.02.05）产品允许使用合成着色剂，限值为：柠檬黄0.5g/kg、日落黄0.5g/kg、苋菜红0.3g/kg、胭脂红0.5g/kg、亮蓝0.5g/kg。不过，GB 5009.35-2016《食品安全国家标准 食品中合成着色剂的测定》只适用于巧克力豆、硬糖、着色糖衣制品、蜜饯、配制酒、饮料、淀粉软糖等7种产品的测定，对于允许而且经常使用合成着色剂的果酱产品，则不在适用范围内。

本文通过检出限、回收率和精密度等检验数据，验证GB 5009.35-2016《食品安全国家标准 食品中合成着色剂的测定》的检测方法是否适用于果酱产品的检测，从而解决实验室选择测试方法的问题。

一、实验材料

1 .试剂及配制方法。甲醇：色谱纯。乙酸铵（CH3COONH4）溶液（0.02mol/L）：称量乙酸铵1.54g，加水至1L，后经微孔滤膜（0.45μm）过滤。柠檬酸（C6H8O7·H2O）溶液（20g/100mL水），用该浓度的柠檬酸溶液把水调到pH6和pH4。氨水溶液：氨水含量要求20%-25%，把2mL的氨水加水稀释至100mL。甲醇-甲酸溶液：把甲醇、甲酸按体积比（6+4）混匀。无水乙醇-氨水-水溶液：把无水乙醇、氨水溶液、水按体积比（7+2+1）混匀。聚酰胺粉（尼龙6）：过200μm（目）筛。无水乙醇（CH3CH2OH），乙酸（CH3COOH）。

2.标准品。柠檬黄（CAS︰1934-21-0）；苋菜红（CAS︰915-67-3）；胭脂红（CAS︰2611-82- 7）；日落黄（CAS︰2783-94-0）；亮蓝（CAS︰3844-45-9）。

3.标准溶液配制。购买浓度为0.500mg/L合成着色剂标准溶液，吸取2.0mL标准溶液，加pH6的水定容至10.0mL，配成浓度为0.100mg/mL的标准使用液。分别吸取浓度为0.100mg/mL标准溶液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0mL加pH6的水定容至10.0mL，配成每毫升相当1.0μg、2.0μg、5.0μg、10.0μg、20.0μg的合成著色剂。

二、仪器和设备

配有紫外可见光检测器的LC-2010AHT高效液相色谱仪，日本岛津公司。电子天平，美国赛多利斯丹佛，型号TP-213，感量为0.001g。HWS-12恒温水浴锅，上海一恒科学仪器有限公司。G3垂融漏斗。

三、实验方法

1.试样制备。称取果酱产品3-5g（精确至0.001g），放入100mL的小烧杯中，加入约30mL水，搅拌溶解（不溶解的样品可以适当延长时间或提升温度至全部溶解）。如果溶解后的样品溶液pH较高，可用柠檬酸溶液把样品溶液的酸碱度调成pH6。

2.色素提取。果酱产品的色素提取选用聚酰胺吸附法，试验过程要注意溶液的温度和pH值。先称量1g聚酰胺粉于小烧杯中，加少许水调成粥状备用；再把样品溶液加热到60℃，趁热把准备好的聚酰胺粉倒入样品溶液中，搅拌1分钟后，用G3垂融漏斗对样品溶液进行抽滤；将大约20mL的水（pH为4，温度为60℃）倒入烧杯进行洗涤，并把洗涤水倒入G3垂融漏斗中抽滤；上述洗涤操作重复3-5次，然后用甲醇-甲酸溶液洗涤3-5次，再用水洗涤至样品溶液为中性。换一个接收瓶，用乙醇-氨水-水混合溶液进行解吸，重复3-5次，直到聚酰胺粉上的色素被完全解吸出来；收集全部解吸液，加入乙酸中和，水浴加热蒸发至近干，加水溶解，定容到10mL；经0.45μm微孔滤膜过滤后，上机分析。根据保留时间定性，以外标峰面积法定量。

3.液相色谱条件。色谱柱为SHIMSEN Ankylo C18（250mm×4.6mm，5μm），检测波长为254nm，柱温控制在35℃，流速为1.0mL/min，进样量为10μL。其中，流动相A为乙酸铵溶液，流动相B为甲醇（色谱纯），梯度洗脱程序详见表1。

四、结果计算

试样中着色剂含量的计算公式如下：

其中，X为样品着色剂含量，g/kg；m为样品质量，g；v为试样稀释总体积，mL；1000为换算系数。

五、检出限、回收率和精密度

1.检出限。将浓度为1.0μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL的标准溶液分别上机测定得出峰面积数据，以色素的含量（μg/mL）为横坐标X，以峰面积为纵坐标Y，绘制坐标图，进行线性回归分析，回归方程如表2所示。

2.回收率。在相同基质的空白样品中加入6个目标色素（加标量1mL，浓度为20μg/mL），加标后进行前处理，上机测定，经计算得出加标回收率及相对标准偏差，详见表3。

六、综述

根据GB 5009.35-2016《食品安全国家标准 食品中合成着色剂的测定》规定，柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红的方法检出限为0.5mg/kg，亮蓝为1.0mg/kg。在上述检出限验证试验中，色素线性回归方程的相关系数R2达到0.999以上，说明方法检出限满足标准要求。果酱产品中目标色素的回收率在83.1%-100.7%之间，对于样品前处理经过吸附、解析再上机测定的实验过程来说，回收率已经满足要求。回收率6次试验的相对标准偏差RSD在3.3%-5.3%之间，均在6%以内，数据稳定。目标色素在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值占算术平均值的百分比在3.4%-8.9%之间，符合国家标准不超过10%的规定。

综上所述，果酱产品中柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红、亮蓝的测定可参照GB 5009.35-2016《食品安全国家标准 食品中合成着色剂的测定》执行，其检出限、回收率和精密度均满足该标准规定。

作者简介：刘少梅（1980-），女，汉族，质量工程师，大学本科，研究方向为质量管理、食品检验。