黑玫瑰水果玉米花青素组分分析研究

陈雪 叶青华 陈文俊

一、材料与仪器

1.材料。水果玉米黑玫瑰8号、黑玫瑰13号。

2.试剂。矢车菊素标准品，成都普思生物科技股份有限公司；甲醇、乙腈、乙醇，均为色谱纯，Merck公司。

3.仪器。UV-1900型紫外可见分光光度计，翱艺仪器（上海）有限公司；R-300型旋转蒸发仪，瑞士Buchi公司；超高效液相色谱（Ultra Performance Chromatography，UPLC）（Shim-pack UFLC SHIMADZU CBM30A）；串联质谱（Tandem mass spectrometry，MS/MS）（Appllied Biosystems 4500QTRAP）。

二、实验与方法

1.花青素原液的提取制备。将筛选好的黑玫瑰水果玉米样品40℃烘干并粉碎，使用95%乙醇与2mol/L的盐酸（比例1︰9）溶解，超声提取，离心取上清液。残渣按上述步骤再提取一次，合并两次离心液，即得花青素原液，并保存到进样瓶中，用于LC-MS/MS分析备用。

2.黑玫瑰水果玉米花青素的含量测定。精密称定矢车菊素标准品，配制成0.05mg/mL的母液，再依次將母液稀释成0.048mg/mL、0.040mg/mL、0.033mg/mL、0.026mg/mL、0.018mg/mL、0.013mg/mL的溶液。在530nm波长处进行比色测定，绘制标准曲线，得到回归方程：Y=14.798X-0.0352（R2=0.9991）。在530nm波长下进行比色，记录吸光度，带入回归方程计算花青素相对含量。

3.定性与定量鉴定。（1）液相条件。色谱柱：Waters ACQUITY UPLC HSS T3 C18 1.8μm，2.1mm*100mm；流动相：水相为超纯水（加入0.04%的乙酸），有机相为乙腈（加入0.04%的乙酸）；洗脱梯度：0min水/乙腈为95︰5V/V，11.0min水/乙腈为5︰95V/V，12.0min水/乙腈为5︰95V/V，12.1min水/乙腈为95︰5V/V，15.0min水/乙腈为95︰5V/V；流速：0.4mL/min；柱温：40℃；进样量：5μL。（2）质谱条件。电喷雾离子源（ESI）温度：500℃；质谱电压：5500V；帘气（CUR）：25psi；碰撞诱导电离（CAD）：高。

三、结果与分析

利用LC-MS/MS方法，对供试材料黑玫瑰8号及黑玫瑰13号花青素组分进行鉴定，结果见图1、图2和表1。基于本地代谢数据库，本研究对样本的代谢物进行了质谱定性定量分析。水果玉米黑玫瑰8号、黑玫瑰13号分别检测到17种已知的花青素类代谢物，代谢物名称及其相对含量等信息详见表1，种类远远超越了现有黑玉米品种的花青素组分，具有广阔的开发前景。

四、讨论

1.研究表明，自然界中花青素的稳定性受花青素的内部结构以及花青素组分的影响较大，一般认为，花青素的组分越多，稳定性就越强。在本研究中，2种花青素水果玉米均含有芍药花素-3-O-芸香糖苷、芍药花素3-O-（6-丙二酰葡萄糖苷）等17种花青素代谢物，结构相对稳定，营养价值极高，可以有针对性地开发功能保健食品。

2.与蓝莓等其他富含花青素的水果相比，花青素水果玉米的花青素组分丰富，对气候条件的要求较低并且产量高，尤其在南方等地可种植两季，可以作为天然色素的重要来源以及高端保健产品的重要原料进一步开发和推广。

五、结论

本研究采用LC-MS/MS法对水果玉米黑玫瑰8号、黑玫瑰13号花青素组分进行鉴定，该方法具有简单、高效、快捷、重复性好、灵敏度高等优点。检测结果表明，水果玉米黑玫瑰8号与黑玫瑰13号均含有17种已知花青素代谢物，花青素组分种类多、含量丰富。因此，这是一种高端的水果玉米新品种，具有广阔的开发价值与发展前景。