农用微生物菌剂与硅藻页岩混配保存的初步探究

吴元凤 江洋

摘要：研究硅藻页岩与微生物菌剂主要功能菌（枯草芽孢杆菌、胶冻样类芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、米曲霉）混配保存问题。试验采用梯度稀释法和平板涂布法进行检测，当微生物菌剂的添加浓度为2亿/克、6亿/克、10亿/克时，其有效菌数变化趋势基本一致，且与胶冻样类芽孢杆菌混配最为合适。

关键词：微生物菌剂；硅藻页岩；混配保存

微生物菌剂的本质特征在于含有已知的、具有特定功能的微生物，并通过微生物的活动产生相应的肥效。已有研究表明，其在改良土壤、提高作物品质和数量等方面具有不可估量的前景。其中枯草芽孢杆菌、胶冻样类芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉、米曲霉等菌株在实际生产中应用领域最为广泛。农用微生物菌剂作为微生物肥料生产中的一类重要资源，其参与土壤的调控作用，有效抑制病虫害的侵染，可达到增产提质的效果。

硅藻页岩是具有会呼吸机能的稀有原生态海洋古生物活化石，被世界地质学家誉为“地球的肺泡”，地球70%的氧气是从海洋硅藻中诞生的，它支撑着地球上有生命物种的呼吸所需的氧气。硅藻页岩是在矿化腐殖质的基础上，经过低温超微细研，形成的一种表面活性强、元素含量丰富、对环境友好的一种有益物质。因此，硅藻页岩对微生物的影响不可小觑。

1 材料与方法

1.1 供试材料

供试菌剂：微生物肥料技术研究推广中心保存的菌剂（枯草芽孢杆菌、胶冻样类芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、米曲霉）。吸附剂：硅藻页岩为购买产品。试剂：葡萄糖、磷酸氢二钾、磷酸氢二钠、硫酸镁、氯化铁、琼脂、氯化钠、牛肉膏、蛋白胨等试剂，均为国产分析纯和生化试剂。所用检测培养基：依据微生物肥料产品检验规程NY/T2321-2013执行。

1.2 试验方法

依据农用微生物菌剂标准（GB20287-2006），关于对产品的技术指标要求，粉剂产品有效活菌数要≥2.0亿/克，因为在进行相关产品的混配试验时，其有效活菌数不低于此标准。

样品混合前，依据检测结果可知，上述5种菌剂含菌量分别为1000亿/克、100亿/克、1000亿/克、1000亿/克、50亿/克。将菌剂与硅藻页岩混合配置100克样品，设置含菌量浓度分别为2.0亿/克、6.0亿/克、10.0亿/克。

1.3 加样及培养

在无菌操作台上用移液器分别吸取适宜的稀释梯度的菌悬液0.1毫升，添加到事先备好的含有检测培养基的平板上，并涂布均匀。每个处理重复3次，而后将相关平皿置于32℃恒温培养箱中，24～48小时后，直到不再长出新菌落为止，计数时取3次重复的平均数。

1.4 数据分析

试验设置5个菌剂水平（C1、C2、C3、C4、C5），每个水平3个处理（菌粉添加量为2亿/克、6亿/克、10亿/克）。每次处理的首次检测结果标记为0（即为空白对照），依据混合样品的保存时长，设置样品检测时间，依据检测的次数，分别记为1、2、3、4。样品进行检测时，利用平板梯度稀释法，每个平板3次重复取平均值。5个菌株共计225个数值，在上述条件下，进行数据分析。

2 结果与分析

2.1 各菌剂间受不同菌剂添加比例的影响

通过各菌剂的不同添加比例数据值的统计发现，2亿/克、6亿/克、10亿/克时，5种菌剂隨着时间的推移，其有效活菌数的变化趋势基本一致。在首次混养后，其样品的有效菌数都保障了添加比例的准确性，伴随时间推移，其有效菌数有不同程度的改变。C1的主要成分为枯草芽孢杆菌，混合一周后，样品中的有效活菌数急剧的锐减，一个月后，其有效活菌数有一定的提升，这与硅藻页岩为枯草芽孢杆菌的生长、发育、代谢等提供了一定的条件有关。后期基本稳定，但其含菌量减少明显。其原因在于枯草芽孢杆菌本身随着时间的推移有降解的可能性。

2.2 各菌剂间受不同时期同种菌剂添加比例的影响

同种添加比例混合样品时，以含菌量10亿/克为例。C2在保存一个月后检样时含菌量增加，而后逐步减少。10个月后，其有效含菌量仍能保持在相对稳定的范围之内。其余各处理在1次检样时，样品的含菌量急剧减少，以C1变化最为显著。通过对各个水平进行变异系数的计算，分别为，79.1%、22.7%、38.1%、36.9%、58.9%。其中以C1的变异系数最大，C2的变异系数最小。结合有效活菌数含量的变化，硅藻页岩与各菌剂混配最适为，C2>C4>C3>C5>C1。

3 结论

微生物菌剂对全世界农业做出了重要的贡献，截至目前，针对农用微生物菌剂与农药相互作用等方面研究较多，指导实际生产的研究相对甚少。本试验探索了硅藻页岩与常用微生物菌剂混配的初步阶段，通过本试验可知，硅藻页岩与胶冻样类芽孢杆菌混配最为适宜，在实际的生产使用过程中，菌剂添加量达到相关标准要求即可。