养胃健脾颗粒质量标准研究

花 卉，郝旭亮，倪 艳，王瑞明，林建翠，吴 琼，何宇霞

(1.山西省中医药研究院，山西 太原 030012；2.山西中医药大学附属医院，山西 太原 030012；3.山西中医药大学，山西 太原 030012)

由于生活压力增大，大家不良的饮食习惯与生活习惯逐渐增多，胃肠疾病已成为临床多发病，与胃肠疾病相关的药物是全球使用最广泛的10类非处方药之一[1-2]。现有临床治疗药物主要为抗生素，但多次使用容易产生耐药性，不适合反复使用[3]。养胃健脾颗粒为本院生产的院内制剂，临床使用安全，可长期服用，对于急慢性胃炎、胃及十二指肠溃疡、萎缩性胃炎、功能性消化不良等证属寒凝气滞血瘀的胃痛者具有较好的治疗效果。该药处方由丹参、白芍、延胡索、木香等十二味中药组成。

丹参具有活血祛瘀、凉血消痈等功效，主治胸痹心痛、脘腹胁痛、疮疡肿痛等[4]。现代药理研究表明丹参具备良好的抗菌抗炎作用，在临床上可以缓解消化性溃疡患者的症状[5]。芍药苷是白芍的主要活性成分，可降低胃肠平滑肌张力，具有止痛作用[6]。延胡索有行气止痛、活血之功效，对胃溃疡等多种疾病具有较好的临床表现[7-8]。木香有行气止痛、健脾和胃之功效，用于胸闷腹胀、恶心呕吐、腹泻腹痛、痢疾、里急后重、食积不消等，临床上木香及其配伍中药多用于治疗消化道方面的疾病，如胃炎胃痛、消化性溃疡、消化不良、食欲不振、腹胀腹痛、胸腹作痛、恶心呕吐等[9-10]。全方合用，以“通”立法[11]，重用丹参、木香治疗血淤气滞，而延胡索可以行气止痛，使气行血畅、诸痛自除；白芍温中补虚。

确定中药复方制剂中各成分定性与定量的常用方法为TLC法与HPLC法[12]，因此为了简便、有效地控制养胃健脾颗粒的质量，本研究采用TLC法对养胃健脾颗粒中丹参、白芍、延胡索、木香进行定性鉴别，采用HPLC法对白芍中芍药苷进行含量测定，建立了芍药苷的含量测定方法及含量限度。所得分析方法可为养胃健脾颗粒的质量评价提供一定的理论依据，现将实验过程报道如下。

1 实验材料

1.1 试药

养胃健脾颗粒(批号：20180901、20180902、20180903)由山西省中医院制剂室提供；芍药苷对照品(供含测用，批号：0737-200111)由中国药品生物制品检定研究院提供；丹参对照药材、白芍对照药材、延胡索对照药材和木香对照药材等所用药材均由山西省中医院提供；乙腈为色谱纯；水为重蒸馏水；其余试剂均为分析纯。

1.2 仪器

Agilent 1100高效液相色谱仪，色谱柱：依利特 C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；电子天平(德国赛多利斯 BP211D)；Millipore纯水器；Sartorius电子天平；KQ-300DA 超声仪；多功能紫外分析仪(上海嘉鹏科技有限公司)；显色加热器(武汉药科新技术开发公司)；电子恒温水浴锅(北京中兴伟业仪器有限公司)；LC-300B型数控超声波清洗机(山东济宁鲁超超声设备有限公司)。

2 方法与结果

2.1 定性鉴别方法

2.1.1 丹参鉴别 取养胃健脾颗粒10 g，研碎后加40 mL甲醇，超声30 min后滤过，滤液蒸干后加20 mL水使残渣溶解，再次滤过，滤液用10%的稀盐酸将pH调节到2左右，用20 mL乙酸乙酯提取2次，将乙酸乙酯提取液合并并蒸干，然后加无水乙醇2 mL将残渣溶解，溶解后溶液作为供试品[13]。按养胃健脾颗粒处方和工艺制备缺丹参的阴性样品，按供试品方法制得阴性供试液。精密称定丹参素钠对照品0.5 mg，加1 mL甲醇制成对照品溶液。依照2020年版《中国药典》四部(通则0502)进行试验[14]，在硅胶G板上点样10 μL，使用甲苯-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸 (4∶6∶8∶1∶4)为展开剂，展开约10cm后再取出，晾干，喷5%的三氯化铁乙醇溶液，在显色加热器上加热至斑点显色清晰。结果：日光下观察，供试品色谱和对照药材色谱对应的位置上有相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。见图1。

2.1.2 白芍鉴别 取养胃健脾颗粒10 g，加30 mL乙醇，超声30 min后滤过，滤液蒸干后加1 mL乙醇使残渣溶解，作为供试品溶液。取1 g芍药药材粉末，按上述方法制成对照药材溶液[15]。按养胃健脾颗粒处方和工艺制备缺白芍的阴性样品，按供试品方法制得阴性供试液。精密称定芍药苷对照品1 mg，加1 mL乙醇制成对照品溶液。依照2020年版《中国药典》四部(通则0502)进行试验[14]，在硅胶G板上点样10 μL，展开剂为二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)，展开10 cm后取出，晾干，喷5%的香草醛硫酸溶液，在显色加热器上加热至斑点显色清晰。结果：日光下观察，供试品色谱和对照药材色谱同样的位置上有相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。见图2 。

注：1-3.供试品；4.对照药材；5.丹参素钠；6.阴性样品。

注：1-3.供试品；4.对照药材；5.芍药苷；6.阴性样品。

2.1.3 延胡索鉴别 取养胃健脾颗粒10 g，研碎后加50 mL甲醇，超声30 min后滤过，滤液蒸干，加10 mL水使残渣溶解，加浓氨试液调至碱性，用10 mL乙酸乙酯提取3次，将乙酸乙酯提取液合并并蒸干，加甲醇1 mL使残渣溶解，作为供试品溶液[15]。按养胃健脾颗粒处方和工艺制备缺延胡索的阴性样品，按供试品方法制得阴性供试液。依照2020年版《中国药典》四部(通则0502)进行试验[14]，在硅胶G板上点样10 μL，以正己烷-二氯甲烷-甲醇(15∶8∶2)为展开剂，展开约10 cm左右，取出，晾干，在碘缸中熏蒸3 min后取出，挥尽板上吸附的碘，在紫外光灯(365 nm)下检视。结果：紫外光灯(365 nm)观察，供试品色谱和对照药材色谱同样的位置上有相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。见图3。

2.1.4 木香鉴别 取“2.1.3”项下超声过滤后蒸干的滤液残渣，加2 mL甲醇使溶解，作为供试品溶液。另取木香对照药材1 g，按“2.1.3”项下供试品处理方法制成对照药材溶液[15]。按养胃健脾颗粒处方和工艺制备缺木香的阴性样品，按“2.1.3”项下供试品方法制得阴性供试液。依照2020年版《中国药典》四部(通则0502)进行试验[14]，在同一个硅胶G板上点样10 μL，以环己烷-丙酮(10∶3)为展开剂，展开约10 cm左右，取出，晾干，喷5%的香草醛硫酸溶液，在显色加热器上加热至斑点显色清晰。结果：日光下观察，供试品色谱与对照药材色谱同样的位置上有相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。见图4 。

注：1-3.供试品；4.对照药材；5.阴性样品。

2.2 芍药苷含量测定

2.2.1 色谱条件 使用的色谱柱为依利特C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为水-乙腈(84∶16)；柱温25 ℃；进样量10 μL；流速：1.0 mL/min；检测波长：230 nm。

注：1-3.供试品；4.对照药材；5.阴性样品。

2.2.2 对照品溶液制备 精密称取芍药苷对照品60 μg，加一定量甲醇制成每1 mL含60 μg的溶液，即为对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液制备 精密称取养胃健脾颗粒粉末1 g，置具塞锥形瓶中，精确加入50 mL甲醇，称定重量，超声30 min后在室温中放冷，再称定重量，用一定量甲醇补足损失的重量，振摇均匀，滤过，滤过液即为供试品溶液。

2.2.4 阴性对照溶液制备 取除白芍之外的各味药按养胃健脾颗粒处方和工艺自制不含白芍的阴性制剂，按“2.2.3”项下对照品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。

2.2.5 专属性实验 以上3种溶液各吸取10 μL，依次进样，阴性对照品色谱在芍药苷色谱相应的保留时间处无吸收峰出现。见图5。

注：A.阴性对照品；B.供试品；C.芍药苷对照；1.芍药苷。

2.2.6 线性关系考察 精密称取经五氧化二磷干燥至恒重的对照品适量，定容至5 mL容量瓶中，制备成每1 mL含0.611 mg的对照品溶液，分别吸取2、4、6、10、15、20 μL进样，将峰面积积分结果作为纵坐标，将芍药苷(μg)的含量作为横坐标，制作标准曲线，标准曲线的回归方程为：Y=627.9X+267.9，(r=0.999 8，n=6)。由此可知，芍药苷在1.22～12.20 μg这个含量内，峰面积与进样量具有良好的线性关系。

2.2.7 精密度考察 精密吸取芍药苷对照品溶液10 μL，反复进样6次，结果峰面积的RSD为1.65%(n=6)，说明高效液相色谱仪精密度良好。

2.2.8 稳定性考察 取同一批样品制备成供试品，按“2.2.1”项下的色谱条件，分别精密量取供试样品溶液10 μL，于0、2、4、6、8h进样，计算各时间峰面积的RSD为1.66%(n=5)，该供试品溶液8 h内稳定。

2.2.9 重复性实验 取同一批样品(批号：20180901)，制备6份平行的供试品溶液，依此进样测定其含量，结果芍药苷平均含量为5.429 mg·g-1，含量的RSD为0.69%(n=6)，该方法重现性良好。

2.2.10 回收率实验 采用加样回收法，称取已知含量(批号：20180901)的样品适量，每份0.5 g，精密称定，共6份，依次精密加入一定量的芍药苷，使用“2.2.3”项下方法制备供试品溶液方法制备，在上述色谱条件下测定，算出芍药苷含量。详细结果见表1。

表1 芍药苷加样回收率试验结果

2.2.1 样品含量测定 取三批样品(批号：20180901、20180902、20180903)养胃健脾颗粒按照上述方法分别测定含量，3批样品芍药苷含量分别为 21.223 mg/袋、23.977 mg/袋、23.283 mg/袋，结合药典规定白芍饮片中芍药苷的限量(不少于1.6%)，以及本品中芍药苷的转移率，考虑到不同批次药材质量存在差异及本品装量差异，暂定本品每袋含芍药苷不得低于15.0 mg。

3 讨论

(1)白芍的色谱鉴别。依据《中国药典》中的方法，使用的展开剂含有致癌物质三氯甲烷[16]，本试验改为甲苯-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(4∶6∶8∶1∶4)为展开剂，降低了对实验人员的危害。本试验采用HPLC法检测芍药苷的含量，将《中国药典》中以乙腈-0.1%磷酸溶液(14∶ 86)为流动相改为乙腈-水(16∶84)为流动相，结果表明乙腈-水(16∶84)为流动相洗脱效果较好，出峰时间早，峰形较窄，降低了流动相配置难度，同时可增加色谱柱的使用寿命。

(2)延胡索的薄层鉴别。《中国药典》使用的萃取溶剂为乙醚，改用乙酸乙酯为萃取溶剂，降低了毒性。还考察了以环己烷-三氯甲烷-甲醇(10∶6∶1)为展开剂，但因含有致癌物质三氯甲烷[16]，对检测人员损害大，故不选用；还考察了在碘缸熏蒸不同时间对薄层结果的影响，结果表明置于碘缸中熏蒸3 min后挥尽碘蒸汽斑点最为清晰。

(3)木香的鉴别。参考2020版《中国药典》中“木香”项下供试品制备方法与六味香连胶囊木香鉴别的展开剂。试验中还考察了以环己烷-乙酸乙酯(9∶1)为展开剂，但主斑点的Rf值较小，分离效果不理想，还考察了不同显色剂对薄层颜色深浅的影响，结果表明选用5%香草醛硫酸乙醇显色效果最明显，主成分斑点最清晰。

本研究采用TLC法鉴别丹参、白芍、延胡索和木香，采用HPLC法测定了制剂中芍药苷的含量，整个试验方法操作简便、专属性强，结果直观明了，可以有效控制养胃健脾颗粒的内在质量，适用于养胃健脾颗粒的质量控制。