液相色谱-串联质谱法测定鸡肉中尼卡巴嗪残留标志物的不确定度评定

黄 英，蒋 龙

（深圳信测标准技术服务有限公司，广东深圳 518000）

尼卡巴嗪是一种广谱的抗球虫剂，常用于防治鸡等禽类球虫病。4,4’-二硝基均二苯脲（下文均用DNC表示）是尼卡巴嗪成分之一，是起抗虫效果的主要活性成分，通常将其作为尼卡巴嗪的残留标志物。本文通过对测量DNC残留量的过程进行分析，识别不确定度来源，列出影响测定结果的不确定度因素，计算相对扩展不确定度[1-2]。

1 测量方法和数学模型

1.1 测量方法

①材料。DNC标准物质、乙腈、甲醇。②步骤。取均质后鸡肉样品m（2 g），加乙腈提取，取上层液浓缩，定容至V（1.0 mL），滤膜过滤。③设备。液相色谱质谱联用仪（AB）、万分之一天平。④色谱条件。色谱柱C18，流速 0.3 mL/min。

1.2 数学模型

样品与标准溶液同时测定，以峰面积比值为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，从标准曲线上求得样品溶液的浓度，按公式计算待测样中DNC的含量，计算公式：

式中：X-待测样中DNC的含量，μg/kg；C-由标准曲线所得的DNC浓度，ng/mL；V-样品最终定容体积，mL；m-取样量，g。

X是由C、V、m计算得到的，因此X的不确定度分别由C、V、m的不确定度合成，采用相对标准不确定度分析。

2 测量总相对标准不确定度的来源

由标准曲线所得DNC浓度的相对标准不确定度urel（C），样品称量产生的相对标准不确定度urel（m）， 样品定容产生的相对标准不确定度urel（V），重复性测量产生的相对标准不确定度urel（重复），因此urel(总)=。各相对不确定度分量及其影响因素[4]见图1。

图1 不确定度来源分析

3 测量不确定度的计算

3.1 标准曲线所得的DNC浓度的相对标准不确定度urel(C)

3.1.1 标准溶液产生的相对不确定度urel（标准）

（1）配制标准工作液产生的相对不确定度。DNC标准溶液：100 μg/mL，不确定度为5%，k=2。配制标准工作液： 1.00 μg/mL、0.10 μg/mL、0.01 μg/mL。①使用10 mL容量瓶（A级），允差为0.02 mL，使用3次。②使用20～200 μL 移液器，允差为0.002 mL，使用2次。③使用100～1 000 μL 移液器，允差为0.01 mL，使用1次。④DNC标准溶液产生的不确定度为。按矩形分布，以上4项合成配制标准工作液的相对不确定度为：

（2）配制曲线使用容量瓶产生的相对不确定度。使用 5 mL容量瓶（A级），允差为0.02 mL，使用6次，按矩形分布计算相对不确定度为：

（3）配制曲线使用移液器时产生的相对不确定度。使用100～1 000 μL移液器，允差为0.005 mL、0.010 mL。0.250 mL、 0.500 mL和1.000 mL各移取2次，按矩形分布计算相对不确定度为：

合并（2）（3）（4）得标准溶液的相对不确定度为：

3.1.2 标准曲线所得DNC浓度的相对标准不确定度urel（C）

标准曲线为6个浓度点，每个浓度测定3次，共n=18个。由实验数据进行线性拟合得线性方程y=0.414 32x-0.116 07，相关系数0.998 5。对样品测量7次，由峰面积比值通过直线方程求得其浓度，结果见表1。

表1 样品参数

依据式[3]：

式中：u(c样液)代表标准曲线求得C样液产生的不确定度；SA/C代表标准曲线求得的A标和相应的Ai的回归剩余标准差；m代表样品溶液的测定次数，m=7；n代表标准溶液测定的次数，n=18；b代表回归系数；C样液代表样品处理液中DNC的浓度，ng/mL；C代表样品处理液中DNC浓度的回归值，ng/mL；C代表标准溶液中DNC浓度平均值，ng/mL；Ci代表各标准溶液中DNC浓度，ng/mL；Ai代表标准溶液各点峰面积的测定值；A标代表标准溶液各点峰面积的回归值。

计算：SA/C为0.335，u(c样液)为0.360 ng/mL，得urel（回归）=，综上得：。

3.2 重复性测量产生的相对不确定度urel（重复）

3.3 样品称量产生的相对不确定度urel(m)

使用万分之一天平，允差为0.5 mg，按矩形分布计算相对不确定度为

3.4 样品定容产生的相对不确定度urel（V）

使用100～1 000 μL移液器，允差为0.01 mL，按矩形分布计算相对不确定度为

3.5 合成总相对标准不确定度

当 包 含 因 子k=2，则 扩 展 不 确 定 度 为0.260×2≈ 0.52 μg/kg。

4 结论

当DNC含量为4.57 mg/kg时，其相对扩展不确定度为0.52 μg/kg（k=2)）。LC-MS/MS测定鸡肉中尼卡巴嗪残留标志物时，不确定度主要由标准物质、移液器、容量瓶的误差、线性回归引入；样品称量、样品提取过程所引入的不确定度很小，可以忽略。可通过选择较高纯度的标准物质、增加标准曲线重复测定和多次测量平行样降低结果的不确定度[5]。