细胞死活的检测方法举隅

曹建平

农业上，播种之前需要检测种子的活力;医学上，为了检测某一男子的生育能力，需要测定精子的活力;为了检验药物对肿瘤细胞的杀伤力，需要测定肿瘤细胞的存活率等等.由此可见，细胞死活的鉴定在生产生活和医学研究方面具有重要意义.本文简单介绍几种检测细胞死活的方法，并结合部分试题进行分析.

一、检测方法举隅

1.台盼蓝染色法

台盼蓝是一种阴离子型染料，它只能透过

受损细胞或死亡细胞的细胞膜（质膜），而正常的活细胞能加以排除，即死细胞着色，活细胞不着色.

2.荧光染色法

荧光素双醋酸酯（FDA）是一种常用的动植物细胞的生活力鉴定染料.FDA本身不产生荧光，也无极性，能自由出入细胞.当FDA进入活细胞，被细胞内的脂酶分解，产生有极性的、能发出荧光的荧光素，荧光素不能自由透过活细胞膜，积累在细胞内，使细胞产生绿色荧光.

3.美蓝染色法

美蓝是一种无毒染料，氧化型为蓝色，还原型为无色，主要用于检测酵母细胞死活.由于活细胞具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，因此美蓝染色后活的酵母细胞无色;而死细胞或代谢缓慢的老细胞，被染成蓝色或淡蓝色.

4.TTC染色法

氯化三苯基四氮唑（TTC）常用于检测种子的生活力以及哺乳动物组织的缺血梗塞.TTC溶于水中形成无色溶液，细胞中的脱氢酶可将TTC作为受氢体，使之还原成不溶于水的红色稳定的三苯基甲臢（TTF）. 如果脑组织細胞或胚种细胞死亡或生活力衰退，则不能染色或染色较浅.

5.质壁分离法

质壁分离法主要是检测成熟的植物细胞有无活性的方法.因为活细胞的原生质层具有选择透过性，所以活的成熟的植物细胞才可发生质壁分离.

6.细胞质流动法

细胞质流动需要消耗细胞代谢产生的能量，活细胞才进行细胞代谢，所以活细胞具有胞质环流现象.

二、经典试题赏析

例1 TTC法和红墨水染色法是检测种子活力常用方法，下列说法错误的是（  ）.

A.在TTC法中，胚被染成红色的是具有活力的种子

B.红墨水染色法中，胚不着色或着色很浅的是具有活力的种子

C.这两种方法在原理上相似，均应用了活细胞的膜具有选择透透过性

D.在TTC染色法中，被染成红色较深的种子细胞呼吸可能较强

解析 由于TTC能被细胞呼吸产生的＼[H＼]还原成红色不溶于水的物质，胚是种子的主要结构，故胚被染成红色的是具有活力的种子，A选项正确;红墨水中的色素不是活细胞需要的物质，如果胚被染色较深，说明胚细胞死亡;如果胚不着色或着色很浅，说明胚具有活力，B选项正确;两种染色方法的原理不同，红墨水利用了细胞膜的选择透过性，根据“TTC染色法”可知，TTC染色的原理是TTC被细胞呼吸产生的＼[H＼]还原成不溶于水的红色，利用的是细胞的代谢产物，C选项错误;细胞呼吸越强，产生的＼[H＼]越多，TTC被还原产生的红色不溶于水的物质越多，D选项正确.

参考答案：C

例2 在进行植物体细胞杂交前，必须先获得有活力的原生质体.测定原生质体活力的常用方法之一是荧光素双醋酸酯（FDA）染色法，其基本原理是FDA本身无荧光，可自由通过细胞膜，经细胞内酯酶分解产生积累在细胞内并能发出绿色荧光的荧光素.相关叙述正确的是（  ）.

A.FDA是一种大分子物质，通过胞吞进入细胞

B.荧光素分子能以自由扩散的方式通过细胞膜

C.实验中配制的FDA溶液是一种低渗溶液

D.绿色荧光的强度与原生质体的活力呈正相关

解析 根据FDA可自由通过细胞膜，确定其不是大分子物质，A选项错误;根据荧光素积累在细胞内，确定其不能自由通过细胞膜，B选项错误;因为原生质体没有细胞壁，若为低渗溶液，则原生质体会吸水涨破，不能完成实验，C选项错误;原生质体的活力越强，酯酶活性越强，产生的荧光素越多，D选项正确.

参考答案：D

例3  下列有关不同实验中细胞死活的推测，正确的是（  ）.

A.在高倍镜下观察黑藻细胞，发现细胞质缓慢流动，表明此时细胞是死细胞

B.用台盼蓝染液处理酵母菌，细胞被染成蓝色，表明酵母细胞是活细胞

C.健那绿染液染色后的口腔上皮细胞，线粒体为蓝绿色，表明细胞是活细胞

D.将洋葱鳞片叶细胞置于质量分数为10%的蔗糖溶液中未发生质壁分离，则确定此细胞是死细胞

解析 活细胞的细胞质不停地流动，黑藻的细胞质流动，表明细胞是活细胞，流动缓慢可能是温度太低造成，A选项错误;活细胞的细胞膜能控制物质进出，使台盼蓝不能透过细胞膜，酵母细胞被染成蓝色，说明细胞死亡，B选项错误;健那绿染液是专一性

染线粒体的活细胞染料，可以将线粒体染成蓝绿色，C选项正确;将洋葱鳞片叶细胞置于质量分数为10%的蔗糖溶液中，细胞不能发生质壁分离，原因可能是该蔗糖溶液浓度低于细胞液浓度或细胞是死细胞，D选项错误.

参考答案：C

（收稿日期：2021-07-28）