鸿茅健酒中总皂苷含量测定

张 飞,刘利芳,刘晓华,王建国,韩 霜,聂妙兰

(内蒙古鸿茅药业有限责任公司,内蒙古 乌兰察布 013750)

鸿茅健酒由红景天、藏红花、天麻、人参、枸杞子、山药、茯苓、桑椹、黄精、覆盆子10味蒙中药材经提取、浓缩、调配制成的酒剂,为保持处方中蒙中药材质量、提取工艺稳定、产品质量一致性,采用以水饱和正丁醇萃取法测定鸿茅健酒总皂苷含量,作为评价该产品的质量指标。

1 实验器材

1.1 仪器

分析天平(型号XPR10)梅特勒;紫外/可见分光光度计 (型号756)上海奥普勒仪器有限公司; 离心机(型号TG16-Ⅱ)长沙平凡仪器仪表有限公司。

1.2 试剂与试药

人参皂苷Re(批号110754-201827)中国食品药品检定研究院提供; Amberlite-XAD-2 大孔树脂(批号XAD-2-9003)BIOSZUNE LIFE SCIENCES DEP;其他试剂均为分析纯。

1.3 供试品

鸿茅健酒(批号:20180401;20190601;20200401;20200402;20200403;20200901)鸿茅药业提供。

2 显色原理

总皂苷在高氯酸的作用下与香草醛反应,产生特征的紫红色,在560 nm波长处有最大吸收。

3 实验方法

3.1 提取方法的选择

3.1.1 大孔树脂柱层析法

样品前处理:精密吸取样品10.0 mL,置水浴上挥尽乙醇后,用水转移至10mL容量瓶中,并用水稀释至刻度,样品液备用。

层析柱制备:用10 mL注射器作层析管,内装3cm大孔树脂,上加1 cm中性氧化铝。先用25 mL 70%乙醇洗柱,弃去洗脱液,再用约25 mL水洗脱至无醇味,弃去洗脱液。

供试品制备与测定:向制备好的层析柱内加入处理后的样品液0.5 mL,用25 mL水洗柱,弃去洗脱液,再用25 mL或以上70%乙醇洗脱人参皂苷至洗脱液无色,收集洗脱液于蒸发皿中,置于60℃水浴挥干,残渣用少量甲醇溶解并转移至10mL具塞比色管中,置水浴中挥干溶剂,加入0.2 mL香草醛冰乙酸溶液,再加入0.8 mL高氯酸,混匀,使溶解,置60℃水浴中加热10 min,取出,立刻冰浴冷却,加入5.0 mL冰乙酸,摇匀后,在紫外/可见分光光度计扫描。

3.1.2 水饱和正丁醇萃取法:

供试品溶液制备:精密吸取样品10.0 mL,置水浴蒸至近干,用15mL水溶解并水转移至分液漏斗中,分别加入20 mL水饱和正丁醇萃取,分取正丁醇液(必要时可离心),重复萃取3次,合并正丁醇液用20 mL氨试液洗涤2次,弃去氨试液,正丁醇液水浴蒸干,残渣用甲醇溶解并转移至10 mL量瓶中,加甲醇定容至刻度,摇匀,即得。

显色与测定:分别精密吸取供试品溶液0.5mL,二份,分别置于10 mL纳氏比色管中,置水浴中挥干溶剂,其中一份加入0.2 mL香草醛冰乙酸溶液,再加入0.8 mL高氯酸,混匀,使溶解,另一份加入1.0mL高氯酸,混匀,使溶解,两管同时置60℃水浴中加热10 min,取出,立刻冰浴冷却,加入5.0 mL冰乙酸,摇匀后,在紫外/可见分光光度计扫描。

图1 两种提取方法与对照品扫描图

3.2 结论

大孔树脂柱层析法制备样品显色后与标准品显色后颜色不一致,水饱和正丁醇萃取法制备样品显色后与标准品显色后颜色基本一致并且在560nm处有相同的吸收峰,因此,选择采用水饱和正丁醇萃取法。

4 方法学考察

4.1 线性范围

吸取人参皂苷Re标准溶液(2.4mg/mL)0 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL、1.2 mL于10 mL具塞比色管中,置水浴中挥干溶剂,加入0.2 mL香草醛冰乙酸溶液,再加入0.8 mL高氯酸,混匀,使溶解,置60℃水浴中加热10 min,取出,立刻冰浴冷却,加入5.0 mL冰乙酸,摇匀后,于560 nm波长处测定吸光度,结果显示:以吸光度为横坐标,以人参皂苷Re的质量(mg)为纵坐标,绘制标准曲线,人参皂苷Re在0.096mg～0.288mg之间,呈良好的线性关系。详见表1和图2。

表1 标准曲线试验结果

图2 人参皂苷Re标准曲线

4.2 重复性试验

取样品6份,按3.1.2制备供试液并显色与测定,记录吸光度,从标准曲线读取对应的量(mg)。

样品中总皂苷的含量(以人参皂苷Re计),按式计算,结果表明,在规定条件下6次测定结果的相对标准偏差(RSD%)为3.3%,认为测定方法较稳定,重复性良好。详见表2。

式中:

Xi——样品中总皂苷的含量(以人参皂苷Re计),单位为毫克每百毫升(mg/100mL);

Ci——由标准曲线得出被测液中人参皂苷Re的量,单位为毫克(mg);

V——被测定样液的定容体积,单位为毫升(mL);

V0——被测定样液的显色体积,单位为毫升(mL);

m——样品的取样体积,单位为毫升(mL);

100——单位转换。

4.3 样品测定

取不同批号样品,按4.2方法测定、计算,结果详见表3。

表2 重复性试验结果

表3 不同批次样品测定结果

5 讨论

5.1 鸿茅健酒中的总皂苷比较稳定,两年之内的产品总皂苷含量匀大于48mg/100mL,可以作为评价该产品的质量指标之一。

5.2 本比色法是样品萃取蒸干后显色测定。由于鸿茅健酒的颜色较深,为消除其它组分颜色的干扰,采用不加入0.2 mL香草醛冰乙酸溶液作为空白,可以有效地解决其它组分颜色在560nm处有吸收干扰的问题。