葫芦药材质量标准研究

2022-02-15 06:49侯文欣魏红立徐利亚孟宪磊吕勤芝邢台市食品药品检验所河北邢台054000
特种经济动植物 2022年2期
关键词:薄层灰分草酸

●侯文欣 魏红立 徐利亚 孟宪磊 吕勤芝(邢台市食品药品检验所 河北 邢台 054000)

葫芦为葫芦科植物瓢葫芦Lagenaria Siceraria(Molina)Standl.var.depressa(Ser.)Hara,药用部分是干燥果皮[1],具有利水、通淋、消肿的功效,用于面目浮肿、大腹水肿等症,常与猪苓、茯苓、泽泻等药同用[2-4]。2013年,河北省食品药品监督管理局修订2003 年版《河北省中药饮片炮制规范》,将葫芦列为新增补药材品种。

葫芦含有莽草酸,测定其含量,并按照《中国药典》(2020年版)四部通则方法测定水分、总灰分,以期为有效控制该药材质量提供依据。

1 材料

1.1 仪器

高效液相系统(Waters e2695,美国waters公司),电子天平(METTLER TOLEDO MS205DU,瑞士梅特勒-托利多集团),超声仪(KQ-600DE,昆山市超声仪器有限公司),显微镜(BX53 OLYMPUS),电热恒温干燥箱(202-1,北京市永光明医疗仪器有限公司),箱式电阻炉(SX-4-10,北京市永光明医疗仪器有限公司),色谱柱(Agilent ZORBAX SB-C18,4.6 mm×250 mm,5 μm)。

1.2 供试材料及试剂

莽草酸(批号:130067-201508,上海奈启生物科技有限公司),葫芦对照药材(201509,上海奈启生物科技有限公司),甲醇为色谱纯,水为超纯水,其余试剂均为分析纯。共收集了10批葫芦样品,经河北省药品检验研究院鉴定均为葫芦。具体信息,见表1。

2 方法

2.1 性状

检查10组样本,并参考《中国药典》(1977年版)、《山东省中药材标准》(2002年版)等材料的描绘作出叙述[1,4]。

2.2 薄层色谱鉴别

2.2.1 样品溶液的制备取样品粉末2.5 g,加乙醇20 mL,超声处理15 min,过滤,滤液蒸干,残渣加甲醇1 mL溶解,作为供试品溶液。

2.2.2 对照药材溶液的制备取葫芦对照药材2 g, 同法制成对照药材溶液。

2.2.3 薄层色谱方法按照《中国药典》(2020年版)薄层色谱法(通则0502)实验。吸取上述2种溶液各5μL分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(60~90℃)-乙酸乙酯(4∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷5%香草醛硫酸溶液,加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。

2.3 水分和总灰分测定

2.3.1 水分本研究增加了葫芦水分检查,按《中国药典》(2020年版)四部通则0832第二法进行测定。

2.3.2 总灰分为了控制可能带入的泥沙等杂质,确保药材质量,本研究增加了灰分检查,按《中国药典》(2020年版)四部通则2302进行测定。

2.4 莽草酸含量测定

莽草酸是自然界中存在的一种重要的有机酸,具有较好的抗炎、镇痛作用。莽草酸为治疗禽流感特效药物“达菲”的重要原料,也是一些抗病毒和抗癌药物的中间体。有报道称葫芦含有莽草酸、葫芦素B,但经试验未从葫芦中提取出葫芦素B,所以选择测定莽草酸[5-13]。

2.4.1 色谱条件及系统适应性试验色谱柱:C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:甲醇-1%磷酸溶液(3∶97);检测波长:210 nm;柱温30℃,理论板数按莽草酸峰计不得少于3000。

2.4.2 对照品溶液的制备精密称取莽草酸对照品(批号:130067—201508,上海奈启生物科技有限公司)9.78 mg,置100 mL量瓶中,加水至刻度,摇匀,作为储备液。再精密吸取5 mL置于10 mL量瓶中,用水稀释至刻度,制成1 mL含48.9 µg莽草酸的对照品溶液。

2.4.3 供试品溶液的制备取样品粉末(过三号筛)约1 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入水100 mL,密塞,称定重量,超声处理(功率600 W,频率40 kHz)60 min,放冷再称定重量,用水补足减失的重量,摇匀,过滤,精密量取续滤液50 mL,蒸至近干,转移至5 mL量瓶中,加水至刻度,摇匀即得。

2.4.4 专属性考察分别取对照品溶液和供试品溶液各10 µL在“2.4.1”项色谱条件 下进样测定,记录色谱图,结果见图1。进行了峰纯度测试,结果见图2。结果显示,样品色谱峰的保留时间与对照品一致,分离度>1.5,而且达到基线分离,表明该方法专属性良好。

图1 莽草酸对照品(A)和样品(B)HPLC色谱图

图2 莽草酸对照品(C)和样品(D)峰纯度图

2.4.5 线性关系考察精密吸取“2.4.2”项对照品溶液1,2,5,10,15,20 μL,分别按上述色谱条件进行测定,记录峰面积。在“2.4.1”项色谱条件下进样测定。以色谱峰峰面积Y为纵坐标,以对照品浓度X(μg)为横坐标,进行线性回归,得线性方程:Y=2.995×106X-1.038×105,R2=0.999 99,在0.0489~0.9780 μg范围内线性关系良好。

2.4.6 精密度试验精密吸取“2.4.2”项对照品溶液10 μL,在“2.4.1”色谱条件下连续进样6次,莽草酸色谱峰面积的RSD值为0.21%。表明用该方法测定莽草酸精密度良好。

2.4.7 稳定性试验取药材粉末(1号)约1.0 g,精密称定,按“2.4.3”项所述方法制备供试品溶液,分别于0,2,4,8,12,24 h在“2.4.1”色谱条件下进样,计算出莽草酸色谱峰面积的RSD为0.1%。表明样品溶液在24 h内稳定。

2.4.8 重复性试验称取葫芦药材粉末(1号)6份,各约1 g,精密称定,按“2.4.3”项所述方法制备供试品溶液,在“2.4.1”色谱条件下进样测定,结果莽草酸含量RSD为0.58%。表明本方法重复性良好,适用于葫芦中莽草酸的提取及含量的测定。

2.4.9 加样回收试验取已知含莽草酸为0.053% 的样品粉末6份,各约0.5 g,精密称定。精密称取莽草酸对照品9.78 mg置于100 mL量瓶中,用水溶解并稀释至刻度,作为标加溶液,分别精密吸取2 mL此溶液置上述6个锥形瓶中。按“2.4.3”项所述方法制备供试品溶液,进行测定,计算回收率,见表2。

表2 莽草酸回收率

3 结果

3.1 性状

本品呈瓢状,多碎成不规则的块状,厚0.5~1.5 cm。外表面黄棕色,较光滑;内表面黄白色或灰黄色,松软。体轻,质硬,断面黄白色。气微,味淡[1,4]。结果10组样品性状均合格。

3.2 薄层色谱

按照薄层色谱条件试验,10批样品薄层色谱图,见图3。

图 3 10批样品薄层色谱图

3.3 水分和总灰分测定

水分和总灰分测定结果,见表3。

表3 葫芦水分、总灰分测定结果 单位:%

3.4 样品莽草酸含量测定

取各批样品粉末 0.2 g,按“2.4.3”项所述方法制备供试品溶液,每个样品平行做2份,并按“2.4.1”色谱条件进行测定,以干燥品计算各供试品中莽草酸的含量,结果见表4。

表4 莽草酸含量测定结果

4 结论与讨论

通过采用薄层色谱法对葫芦饮片进行定性分析,根据药典方法测定葫芦中水分、灰分含量,采用HPLC法测定莽草酸含量。结果表明,葫芦饮片薄层色谱斑点清晰明显,10批葫芦样品的水分含量为7.2%~9.4%,总灰分含量为3.8%~10.0%,莽草酸含量为0.002%~0.043%。

依据上述试验结果, 建议增加水分、总灰分检查项、薄层色谱鉴别、含量测定项,评价葫芦饮片的质量标准;增加水分不得超过 12.0%,总灰分不得超过12.0%,按干燥品计算含莽草酸不得少于0.010%这三项检测指标,以期为葫芦药材质量标准的制定及资源的开发利用提供依据。

猜你喜欢
薄层灰分草酸
武夷岩茶总灰分研究
欧洲山杨热值及灰分含量研究*
藏药“隆久”中云南樟的薄层鉴别研究
低剂量薄层螺旋CT平扫及后处理重建在不同胖瘦体型患者输尿管结石中的应用研究
红花续断胶囊中当归、川芎及大黄的薄层鉴别
薄层色谱法在中药定性定量研究中的应用
草酸与钙会发生反应小葱拌豆腐搭配健康吗?
X—荧光光谱法测定聚丙烯灰分含量的研究