阿斯青霉菌XK-12产铁载体特性及其抑菌活性

彭雯杰　詹伊婧　雷鹏　孙涛　钱家熠　徐虹

摘要： 对从健康草莓根际中分离出的一株阿斯青霉菌XK-12（Penicilium asturianum），进行了产铁载体的定性和定量分析，鉴定其所产铁载体为异肟羟酸型铁载体。并对XK-12产铁载体发酵条件进行了优化，利用其发酵液测定了铁载体对病原菌的抑制效果。结果表明，阿斯青霉菌XK-12产铁载体的最佳发酵条件为：3.0% NH4Cl为氮源，2.0%葡萄糖为碳源，添加0.10% L-鸟氨酸盐酸盐，培养基中不含Fe3+，初始pH 6.0，温度28 ℃，250 ml培养瓶装液量为70 ml，发酵周期为168 h;在此条件下，XK-12产铁载体最高能达到0.173 mg/ml。在添加20% （体积分数）XK-12铁载体发酵液条件下，XK-12铁载体发酵液对草莓根腐病病原菌葡萄座腔菌（Neofusicoccum kwambonambiense XKD-1）的抑制率达到了100%。

关键词： 阿斯青霉;铁载体;发酵优化;拮抗作用

中图分类号： S482.2+92 文献标识码： A 文章编号： 1000-4440（2022）01-0073-08

Abstract： The qualitative and quantitative analyses of siderophores production were carried out on Penicilium asturianum XK-12 isolated from healthy strawberry rhizosphere. The siderophores produced by XK-12 were identified as hydroxamic acid-type siderophores， and the conditions for producing siderophores were optimized. Finally， the fermentation broth of XK-12 was used to determine the inhibitory effect of siderophores on a pathogen. The results showed that the best fermentation conditions for siderophores production by XK-12 were as follows： 3.0% NH4Cl was used as nitrogen source， 2.0% glucose was used as carbon source， 0.10% of L-ornithine hydrochloride was added， there was no Fe3+ in the medium， the initial pH was 6.0， the temperature was 28 ℃， the liquid volume in 250 ml flask was 70 ml， and the fermentation period was 168 h. Under these conditions， 0.173 mg/ml siderophores could be obtained. Under the condition of adding 20% （volume fraction） XK-12 fermentation broth， the inhibition rate of fermentation broth on strawberry root rot pathogen Neofusicoccum kwambonambiense was 100%.

Key words： Penicilium asturianum;siderophore;fermentation optimization;antagonism

铁（Fe）是一种重要的植物营养元素，大多数细胞的代谢过程中都有它的参与，在植物生长过程中发挥着重要作用，主要参与了植物的呼吸作用、光合作用、氮固定以及DNA合成等[1]。铁在地壳中的含量丰富，在所有元素中处于第4位，在多数土壤中铁的含量非常丰富，但大部分铁都以水解后形成的Fe（OH）3形式存在，而植物无法直接吸收和利用这些铁[2-3]。大部分的细菌和真菌都可以分泌铁载体，微生物铁载体对Fe3+具有极高亲和力，能协助植物从土壤环境中获取并利用铁，为植物的生长提供有力保障 [4]。铁载体结构多样，按特征基团来分可以大致分为4种类型[5]。细菌铁载体的结构多样，但真菌铁载体大多为异羟肟酸型，它们大多拥有相似的生物合成途径，且真菌异羟肟酸型铁载体是以Nδ-酰基-Nδ-羟基-鸟氨酸为基本单位组成的[6]。这些真菌和细菌能够通过分泌铁载体来螯合土壤中的铁元素，形成Fe-铁载体螯合物来供给自身生长，还可以与植物病原菌竞争生存必要的铁元素来抑制病原菌的生长[7-9]。目前国内外对铁载体的应用研究主要集中在农业、渔业、重金属修复、核燃料后处理、纸浆漂白、生物传感等方面[10-13]。

本试验以前期从健康草莓根际中筛选得到的一株产铁载体的植物生防真菌阿斯青霉菌XK-12为试验菌株，对所产铁载体类型进行鉴定，对其产铁载体的培养条件进行优化，最后用优化后的除菌发酵液考察对病原菌的拮抗效果，为植物病害防治产品的研发提供新思路。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 供试菌株 分离自草莓健康植株根际的阿斯青霉菌（Penicilium asturianum）XK-12以及草莓根腐病病原菌葡萄座腔菌（Neofusicoccum kwambonambiense XKD-1）均保存于南京工业大学材料化工国家重点实验室。

1.1.2 培养基的配制 發酵培养基：NH4Cl 0.250 0 g，蔗糖25.000 0 g，柠檬酸 1.000 0 g，Na2HPO4·H2O 0.125 0 g，KH2PO4 0.075 0 g，MgSO4 0.080 0 g，CaCl2 0.002 0 g，NaH2PO4·H2O 0.590 5 g，pH 6.8，1 000 ml水，115 ℃灭菌20 min。配制铬天青（CAS）检测液[14]。将配好的CAS检测液转入试剂瓶并用锡纸包裹，121 ℃灭菌15 min，避光保存。配制产铁载体琼脂培养基，灭菌后待培养基温度降至60 ℃以下，吸取已灭菌的CAS检测液以5%的比例缓慢加入到产铁载体培养基中，轻轻晃匀，避免产生气泡，再倒平板，待冷却凝固后使用。

1.1.3 主要试剂 L-鸟氨酸盐酸盐，Acros公司产品;L-天冬氨酸，上海源叶生物公司产品;L-谷氨酸，上海源叶生物公司产品;氯化铁，上海麦克林生化科技有限公司产品;高氯酸，上海阿拉丁生化科技股份有限公司产品;甲磺酸去铁胺，上海源叶生物公司产品;铬天青S，Sigma公司产品。

1.1.4 主要仪器 紫外可见分光光度计，上海棱光技术有限公司产品;立式压力蒸汽灭菌锅，上海申安医疗器械厂产品;精密pH计，上海雷磁仪器厂产品;隔水式恒温培养箱，上海善治仪器设备有限公司产品;标准型净化工作台，苏州净化设备厂产品;回转恒温摇床，上海第一自动化设备公司产品。

1.2 菌株产铁载体的定性分析

CAS法[15]确定XK-12是否能产铁载体。

1.3 菌株产铁载体的定量分析

通过Arnow’s法[16]、高氯酸铁分光光度法[17]、分光光度法[18]对铁载体的类型进行初步判断并定量分析。

1.3.1 甲磺酸去铁胺标准曲线制作 配制5 mmol/L FeCl3-0.1 mol/L HClO4（pH 2）溶液：称取0.811 g FeCl3于1 L去离子水中溶解，加入8.58 ml HClO4，调pH为2，避光保存。取0.5 ml阿斯青霉菌XK-12除菌发酵液（过0.22 μm膜）与2.5 ml 5 mmol/L FeCl3-0.1 mol/L HClO4（pH 2）溶液混合，静置显色30 min，以发酵培养基为空白对照，进行全波长扫描，确定最大吸收波长（ODmax）。称取1.0 mg 甲磺酸去铁胺（Deferoxamine）标准品，溶于1.0 ml去离子水中，将其稀释成7个质量浓度梯度（0 mg/ml，0.05 mg/ml，0.10 mg/ml，0.25 mg/ml，0.50 mg/ml，0.75 mg/ml，1.00 mg/ml）。取各质量浓度甲磺酸去铁胺标准品0.5 ml，加入2.5 ml 5 mmol/L FeCl3-0.1 mol/L HClO4（pH 2）溶液，测定其ODmax下的OD值，以标准品的质量浓度为横坐标，以OD值为纵坐标，绘制铁载体标准曲线。

1.3.2 铁载体含量测定 取0.5 ml阿斯青霉菌XK-12除菌发酵液与2.5 ml 5 mmol/L FeCl3-0.1 mol/L HClO4（pH 2）溶液混合，测定其ODmax下的OD值，根据方法1.3.1中的标准曲线计算阿斯青霉XK-12铁载体产量。

1.4 孢子悬液的制备

将PDA液体培养的阿斯青霉菌XK-12涂布到PDA平板，并在28 ℃下培养5 d，待阿斯青霉菌菌丝铺满整个平板并生出大量绿色孢子，吸取适量无菌水加入平板，用接种环刮下孢子，使其充分混匀。将平板上的孢子液转移至50 ml离心管中，稀释至1×107CFU/ml。

1.5 培养基成分对铁载体产量的影响

在产铁载体培养基中，接种2%的孢子悬液，将氯化铵、磷酸二氢铵、硫酸铵、乙酸铵、草酸铵分别作为氮源，以D-果糖、葡萄糖、D-麦芽糖、蔗糖、乳糖分别作为碳源，在培养温度30 ℃、转速为200 r/min的条件下培养5 d后，用方法1.3.2计算铁载体产量，分析比较采用不同碳、氮源对阿斯青霉菌XK-12产铁载体的影响，并在确定最佳碳、氮源后设置9组质量分数梯度（1%～9%），在培养温度30 ℃、转速为200 r/min的条件下培养5 d后确定最佳碳、氮源质量分数。向产铁载体发酵培养基中加入Fe3+，使培养基中Fe3+终浓度分别为0 μmol/L、0.1 μmol/L、0.5 μmol/L、1.0 μmol/L、1.5 μmol/L、2.0 μmol/L，培养5 d后，测定铁载体产量，确定培养基中Fe3+浓度对XK-12铁载体产量的影响。将产铁载体发酵培养基灭菌后，加入经0.22 μm滤膜过滤后的不同氨基酸， T1组培养基中不添加氨基酸（对照），T2组培养基中加入0.10% L-鸟氨酸盐酸盐，T3组培养基中加入0.10% L-天冬氨酸，T4组培养基中加入0.10% L-谷氨酸，T5组培养基中加入0.05% L-鸟氨酸盐酸盐与0.05% L-谷氨酸，T6组培养基中加入0.05% L-天冬氨酸与0.05% L-谷氨酸混合物，在培养温度30 ℃、转速为200 r/min的条件下培养5 d后，确定不同氨基酸对铁载体产量的影响。

1.6 培养条件对铁载体产量的影响

使用方法1.5中确定碳、氮源后的培养基，在20 ℃、25 ℃、28 ℃、30 ℃、35 ℃温度下培养，在转速为200 r/min的条件下培养5 d后，通过方法1.3.2测定铁载体产量，并确定最佳培养温度。使用碳、氮源优化后的培养基，分别调节初始pH为5、6、7、8、9，在培养温度30 ℃、转速为200 r/min的条件下培养5 d后，通过方法1.3.2测定铁载体产量来确定培养基最佳初始pH。使用碳、氮源优化后的培养基，分别以不同装液量（30 ml、50 ml、70 ml、90 ml、110 ml）在250 ml的三角瓶中培养，在培养温度30 ℃、转速为200 r/min的条件下以方法1.3.2测定铁载体产量。

1.7 不同条件下铁载体产量的时间曲线测定

使用优化后的培养基成分及培养条件，设置3组试验，第1组加入为0.10%的鸟氨酸盐酸盐，第2组加入Fe3+使其终浓度为2.0 μmol/L，第3组两者都不加（对照）。使用方法1.3.2，每24 h測定一次各组铁载体产量，并绘制其在不同条件下铁载体产量的时间曲线，确定阿斯青霉菌XK-12产铁载体的最佳时间。

1.8 阿斯青霉菌XK-12铁载体发酵液对病原菌生长的影响

将以上试验中得出的最佳发酵培养基和发酵条件综合起来进行阿斯青霉菌发酵，发酵液经0.22 μm滤膜除菌，将发酵液分别按终浓度0、5%、10%、15%、20%（体积分数）的比例添加到灭菌后的PDA培养基中混匀并倒平板。培养基凝固后，用直径8 mm的打孔器将病原菌平板打孔并倒置接种到含铁载体的PDA平板中央，置于28 ℃培养箱培养2 d后，采用十字交叉法测量病原菌菌落直径，并计算各平板病原菌的抑制率[7]。

1.9 数据分析

试验数据利用SPSS Statistics软件进行方差分析（P<0.05），计算所有均值的标准差。

2 结果与分析

2.1 阿斯青霉菌XK-12产铁载体种类

取阿斯青霉菌XK-12发酵液，过膜除菌后吸取50 μl加入到打孔器打孔的CAS检测平板上，置于暗处反应30 min后平板出现橙红色反应圈（图1），说明XK-12菌株能产铁载体。

在高氯酸铁试验中，由XK-12制备的铁载体溶液颜色能够立即发生变化呈红色，并在495 nm处出现吸收峰，说明该菌能够产生异羟肟酸型铁载体，因此阿斯青霉XK-12所产的铁载体为异羟肟酸型铁载体。

2.2 阿斯青霉菌XK-12铁载体标准曲线

通过全波长扫描，确定XK-12菌株所产铁载体的最大光吸收值在495 nm处，因此，我们在最大吸光值处制作相应的标准曲线（图2），依照此标准曲线可以计算出菌株产铁载体的量。

2.3 培养基成分对阿斯青霉菌XK-12产铁载体的影响

2.3.1 不同氮源及其质量分数对铁载体产量的影响 由图3可知，XK-12铁载体产量在不同氮源下有显著差异，磷酸二氢铵和草酸铵作为氮源时，铁载体产量最低，而氯化铵作为氮源时，铁载体产量最高。进一步对氯化铵质量分数对铁载体产量的影响进行研究发现，随着氯化銨质量分数的增加，铁载体产量先上升后下降，当氯化铵的质量分数为3.0%时，阿斯青霉菌XK-12的铁载体产量最高，为0.145 mg/ml。

2.3.2 不同碳源及其质量分数对铁载体产量的影响 由图4可知，XK-12铁载体产量在不同碳源下有显著差异，D-麦芽糖作为碳源时铁载体产量最低，葡萄糖作为碳源时铁载体产量最高。通过研究葡萄糖质量分数对铁载体产量的影响发现，随着葡萄糖质量分数的增加，铁载体产量先上升后下降，当葡萄糖的质量分数为2.0%时，阿斯青霉菌XK-12的铁载体产量最高，达到0.134 mg/ml。

2.3.3 不同氨基酸对铁载体产量的影响 由图5可知，与对照相比，当培养基中添加0.10%的L-鸟氨酸盐酸盐时，阿斯青霉菌XK-12菌株的铁载体产量明显提高，产物质量浓度最高达到0.106 mg/ml;当培养基中加入0.10%的L-天冬氨酸时，XK-12菌株的铁载体产量也有明显提高，产物质量浓度达到0.097 mg/ml;培养基中单独添加L-谷氨酸时XK-12铁载体产量最低;加L-鸟氨酸盐酸盐和L-谷氨酸的混合物时，铁载体产量与对照相比无显著差异;添加L-天冬氨酸和L-谷氨酸的混合物时，铁载体产量与对照相比也无显著差异。

2.3.4 不同铁离子浓度对铁载体产量的影响 由图6可知，Fe3+浓度能对XK-12铁载体的产量产生显著影响，在完全不添加Fe3+的培养基中，XK-12产铁载体产量最高，能达到0.122 mg/ml。随着铁浓度的增加，XK-12菌株产铁载体产量逐渐减少，这也反映了XK-12在低铁条件下产铁载体的特性。

2.4 装液量对阿斯青霉菌XK-12产铁载体的影响

由图7可知，装液量与XK-12菌株液态发酵铁载体产量关系密切。随着装液量的逐渐增加，铁载体产量先升高，在装液量为70 ml时达到最高后下降。XK-12铁载体产量最高为0.145 mg/ml。

2.5 初始pH对阿斯青霉菌XK-12产铁载体的影响

由图8可知，XK-12铁载体的分泌随着培养基初始pH的增大呈现先增加后减少的趋势。XK-12菌株在发酵培养基初始pH为5时铁载体产量较低，pH为6时，XK-12菌株产铁载体量最大，达到0.147 mg/ml，之后阿斯青霉菌XK-12产铁载体能力随着pH的增大逐渐降低，当初始pH为9时，铁载体的产量最低。

2.6 培养温度对阿斯青霉菌XK-12产铁载体的影响

由图9可知，阿斯青霉菌XK-12在20～35 ℃培养均可产铁载体;在20～28 ℃，随着培养温度的升高，铁载体产量逐渐提高，当培养温度为28 ℃时，XK-12铁载体产量最高，为0.156 mg/ml;28～35 ℃，随着温度升高铁载体产量显著下降。说明温度在XK-12铁载体分泌中有重要影响，在真菌的最适生长温度范围（25～30 ℃）内，铁载体产量较高，培养温度为28 ℃时最利于XK-12产铁载体。

2.7 不同条件下阿斯青霉菌XK-12铁载体产量的时间曲线

由图10可知，在3种不同条件下，在培养168 h时阿斯青霉菌XK-12铁载体产量最高。添加L-鸟氨酸盐酸盐能大大提高XK-12产铁载体产量，能达到0.173 mg/ml;而添加Fe3+则明显降低了铁载体的产量，仅为0.063 mg/ml。与对照相比，添加L-鸟氨酸盐酸盐能使XK-12铁载体产量提高49.2%，而添加Fe3+使铁载体产量下降了45.2%，进一步证明了培养基成分中Fe3+和L-鸟氨酸盐酸盐是影响XK-12产铁载体的重要因素，与文献[23]的结论相同。

2.8 阿斯青霉菌XK-12铁载体发酵液对致病菌生长的影响

由图11可以看出，阿斯青霉菌XK-12铁载体发酵滤液对草莓根腐病病原菌Neofusicoccum kwambonambiense XKD-1具有较强的抑制作用，添加5%、10%、15%、20%铁载体发酵液的PDA平板对XKD-1病原菌的抑制率分别为36.96%±0.01%、99.42%±0.12%、100%、100%，15%、20%铁载体发酵液添加量与5%添加量和10%添加量之间差异显著。随着发酵液添加量的增加，XK-12铁载体发酵液对病原菌XKD-1抑制率增大。在添加10%加Fe3+ XL-12铁载体发酵液时，病原菌生长不受抑制，说明对病原菌XKD-1的抑制效果是XK-12铁载体在起作用。

3 结论与讨论

本试验对阿斯青霉菌XK-12产铁载体进行了研究，鉴定XK-12所产铁载体为异肟羟酸型铁载体。对影响XK-12铁载体分泌的几个影响因子进行了研究，发现碳、氮源种类及质量分数、初始pH、温度、装液量、发酵时间对其铁载体产量有显著影响，且在低铁胁迫下XK-12能产生更多的铁载体，这种现象可能是微生物为了获得足够的铁营养来为自身的生长营造有利环境，被迫启动铁载体转运系统，产生更多的铁载体来竞争自然界中的铁元素[19-20]。在本试验中，添加0.10%的L-鸟氨酸盐酸盐能显著提高XK-12铁载体的产量，L-鸟氨酸盐酸盐是真菌合成异羟肟酸型铁载体第1步的原料[21]，因此，L-鸟氨酸盐酸盐对XK-12菌株的铁载体生产可能有重要的作用。Wang等[22]对海洋酵母HN6.2产铁载体进行研究，发现在培养基中添加Fe3+抑制了编码鸟氨酸N5-加氧酶的羟化酶基因的表达，而在添加鸟氨酸的培养基中培养的酵母细胞中羟化酶基因的表达增强。汪少林在对真菌铁载体发酵条件的研究中发现固体发酵培养相较于液体发酵培养，粗提物的产出更高，几种真菌中FECH-031产量最高，为32 mg/g，FECH-050产量最低，为12 mg/g[23]。Wang等[22]在对海洋普鲁兰类酵母（Aureobasidium pullulans）HN6.2产铁载体的培养基优化中，发现在培养基中添加鸟氨酸能显著提高铁载体的产量，同时添加Fe3+后明顯抑制了铁载体的产量，在优化后的最佳培养条件下，菌株最大铁载体产量能达到1.1 mg/ml。

从抑菌试验的结果可以看出，对照平板和10%加Fe3+ XK-12铁载体发酵液平板上病原菌XKD-1生长情况几乎一致，说明螯合足量铁后的铁载体失去了螯合平板中铁离子的能力，病原菌生长所需的铁元素未被夺去，可以正常生长。添加不同含量XK-12铁载体发酵液的PDA平板对草莓根腐病病原菌Neofusicoccum kwambonambiense XKD-1有较强的抑制作用，且随着发酵液用量的增大，抑制作用更明显。由于微生物之间存在营养竞争[24-25]，生防微生物可以通过分泌具有螯合能力大于病原菌铁载体的铁载体来竞争土壤中微生物生长必需的的铁元素，从而达到抑制病原菌生长的目的。张科立[26]从香蕉根际分离出内生菌劳尔氏菌（Ralstonia sp.），发现该菌株产铁载体能力强，通过平板对峙试验对其抗病活性进行了评价，测得该菌对病原镰刀菌的抑制率为73.2%。沈冰冰[27]在小麦和玉米种植地土壤中筛选出一株产铁载体真菌YZ9，在平板拮抗试验中，发现对玉米大斑病病原菌（Exserohilum tarcicum）和玉米茎腐病病原菌（Fusarium graminearum）的抑制率分别为64%和79%。赵荣艳等[8]从根际分离出一株产铁载体真菌黄蓝状菌z-15（Talaromyces flavu），在体外试验中，对蒜薹炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides）、水稻恶苗病菌（Fusarium moniliforme）、小麦根腐病菌（Bipolaris sorokiniana）3种病原菌均有一定拮抗效果，抑制率均超过20%，其发酵液对小麦根腐病菌的生长抑制效果较为显著，最高抑制率达50.9%，并能有效抑制3种病原菌孢子萌发率，分别为100.0%、98.3%和81.2%。从根际分离到一株铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）FP6，其铁载体对立枯丝核菌（Rhizoctonia Solani）和胶孢炭疽菌（Colletotrichum Gloeosporioides）作用明显，但对胶孢子菌（C. gloeosporioides）无明显抑制[8，28]。由此可见，铁载体可以用于病原菌的防治，阿斯青霉菌XK-12在抗病促生长方面有着较大的应用潜力。

参考文献：

[1] HELL R， STEPHAN U W. Iron uptake， trafficking and homeostasis in plants [J]. Planta， 2003， 216（4）： 541-551.

[2] 刘艳萍，滕松山，赵 蕾. 高产嗜铁素恶臭假单胞菌A3菌株的鉴定及其对黄瓜的促生作用[J]. 植物营养与肥料学报， 2011， 17（6）： 1507-1514.

[3] 贾 凯，郭长虹. 高等植物体内铁运输机制研究进展[J]. 基因组学与应用生物学， 2010， 29（6）： 1152-1158.

[4] HAAS D， DéFAGO G. Biological control of soil-borne pathogens by fluorescent pseudomonads [J]. Nature Reviews Microbiology， 2005， 3（4）： 307-319.

[5] KHAN A， SINGH P， SRIVASTAVA A. Synthesis， nature and utility of universal iron chelator-Siderophore： A review [J]. Microbiological Research， 2018， 212： 103-111.

[6] HIDER R C. Siderophore mediated absorption of iron [J]. Structure And Bonding， 1984， 58： 25-87.

[7] 孔维亮，周 敏，吴小芹. 水拉恩氏菌JZ-GX1产嗜铁素特性及其对林木病原菌的拮抗作用[J]. 微生物学通报， 2019， 46（12）： 3278-3285.

[8] 赵荣艳，翟凤艳. 嗜铁真菌z-15对几种病原菌的抑制作用[J]. 贵州农业科学， 2014， 42（10）： 127-129.

[9] SASIREKHA B， SRIVIDYA S. Siderophore production by Pseudomonas aeruginosa FP6， a biocontrol strain for Rhizoctonia solani and Colletotrichum gloeosporioides causing diseases in chilli [J]. Agriculture and Natural Resources， 2016， 50（4）： 250-256.

[10]SCHALK I J， HANNAUER M， BRAUD A. New roles for bacterial siderophores in metal transport and tolerance [J]. Environ Microbiol， 2011， 13（11）： 2844-2854.

[11]DAHLHEIMER S R， NEAL C R， FEIN J B. Potential mobilization of platinum-group elements by siderophores in surface environments [J]. Environ Sci Technol， 2007， 41（3）： 870-875.

[12]AHMED E， HOLMSTROM S J. Siderophores in environmental research： roles and applications [J]. Microb Biotechnol， 2014， 7（3）： 196-208.

[13]曾加會，李元媛，阮迪申，等. 植物根际促生菌及丛枝菌根真菌协助植物修复重金属污染土壤的机制[J]. 微生物学通报， 2017， 44（5）： 1214-1221.

[14]刘 群. 缺铁胁迫下棘孢木霉菌及其嗜铁素对植物的促生机制研究 [D]. 济南： 山东师范大学， 2017.

[15]NEILANDS J B. Universal chemical assay for the detection and determination of siderophores[J]. Analytical Biochemstry， 1987， 160（1）： 47-56.

[16]ARNOW L E. Colorimetric determination of the components of 3，4-dihydroxyphenylalanine-tyrosine mixtures.[J]. Biological Chemistry，1937， 118（2）：531-537.

[17]LEONG S A， NEILANDS J B. Siderophore production by phytopathogenic microbial species [J].Arch Biochem Biophys，1982， 218（2）：351-359.

[18]SHENKER M，OLIVER I，HEBNANN M， et al. Utilization by tomatoes of iron mediated by a siderophore produced by Rhizopus arrhizus[J]. Journal of Plant Nutrition， 1992，15（10）： 2173-2182.

[19]NEILANDS J B. Siderophores： structure and function of microbial iron transport compounds [J]. Journal of Biological Chemistry， 1995， 270（45）： 26723-26726.

[20]张茜茜，朱慧明，杨肖静，等. 枯草芽孢杆菌MB8儿茶酚型铁载体的合成与结构分析[J]. 西南农业学报， 2019，32（6）：1259-1266.

[21]HAAS H. Molecular genetics of fungal siderophore biosynthesis and uptake： the role of siderophores in iron uptake and storage [J]. Appl Microbiol Biotechnol， 2003， 62（4）： 316-330.

[22]WANG W， CHI Z， LIU G， et al. Chemical and biological characterization of siderophore produced by the marine-derived Aureobasidium pullulans HN6.2 and its antibacterial activity [J]. Biometals， 2009， 22（6）： 965-972.

[23]汪少林. 产铁载体活性真菌筛选及铁载体化合物对微生物群落结构影响初步探究[D]. 昆明： 云南大学， 2017.

[24]邓琳梅，杨 蕾，张俊星，等.云南省不同森林土壤中三七促生拮抗细菌的分离筛选[J].南方农业学报，2020，51（1）：115-122.

[25]刘 琴，徐 健，祁建杭，等. 娄彻氏链霉菌SR-1102对番茄枯萎病的防效及根际微生物的影响[J] .江苏农业学报，2020，36（5）：1133-1138.

[26]张科立. 香蕉嗜铁内生细菌BEB3的分离鉴定及其生防机理初探[D]. 海口： 海南大学， 2010.

[27]沈冰冰. 玉米茎腐病和大斑病生防菌的筛选及其促生作用的研究[D]. 哈尔滨： 东北农业大学， 2019.

[28]SASIREKHA B， SRIVIDYA S. Siderophore production by Pseudomonas aeruginosa FP6， a biocontrol strain for Rhizoctonia solani and Colletotrichum gloeosporioides causing diseases in chilli [J]. Agriculture and Natural Resources， 2016， 50（4）： 250-256.

（责任编辑：张震林）

2975500783218