新鲜赋值血清多点校准提高不同检测系统间总胆红素检测结果的一致性

何成钦，刘艳婷，杨 娜，肖光军△，陈 姝，龚国忠，曹 丹，赵明才

1.四川省遂宁市中心医院检验科，四川遂宁 629000；2.四川省遂宁市第一人民医院检验科，四川遂宁 629000

总胆红素(TBIL)检测是各级医疗机构临床实验室均普遍开展的常规生化检测项目，其检测结果常用于诊断患者有无溶血及评估其肝、胆系统在胆色素代谢中的功能状态[1-2]。目前，临床实验室TBIL检测主要以钒酸盐法、重氮法、化学氧化法、酶法和干化学法为主[3]，虽然大部分试剂生产厂家提供的试剂对TBIL的检测结果能溯源至美国国家标准与技术研究院(NIST)的标准物质SRM 916a，但相关研究显示，TBIL的检测结果在不同检测方法、不同试剂间均存在一定差异，且部分检测系统间的结果差异随标本TBIL水平升高而增加，同时TBIL见光易分解，其校准品储存和使用不当则将进一步加大检测系统间的结果差异，从而导致实验室间的检测结果无法实现互认，不利于患者的诊疗及预后评估，也为患者的转诊造成了一定影响[3-5]。故本研究以配套检测系统赋值的新鲜血清作为校准品对待评价检测系统进行多点校准，分析校准前后两检测系统检测结果的一致性，探讨新鲜赋值血清多点校准在提高不同检测系统间TBIL检测结果一致性中的可行性。

1 材料与方法

1.1标本来源 收集遂宁市中心医院新生儿科、儿科患儿常规生化检测后剩余的新鲜血清标本56份，然后将每份标本混匀后分成两份，一份标本用于新鲜赋值血清多点校准前两检测系统间检测结果的比对。另一份标本则用于校准后两检测系统间检测结果的比对，每份标本盛装于1.5 mL离心管中，编号后避光保存于-80 ℃超低温冰箱中备用。同时，收集TBIL水平在20～500 μmol/L的不同水平新鲜血清标本5份，用于配套检测系统赋值和校准待评价检测系统[6]。所有新鲜血清标本均无溶血、脂血，且人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体、丙型肝炎病毒(HCV)抗体及乙肝表面抗原(HBsAg)检测结果均为阴性。

1.2仪器与试剂 配套检测系统由Roche Cobas C702全自动生化分析仪及其配套的重氮法TBIL检测试剂(批号：50333801)与生化复合校准品(批号：41006701)组成；待评价检测系统由日立7600全自动生化分析仪、四川迈克实业有限公司生产的钒酸盐法TBIL检测试剂(批号：1220101)与配套的生化复合校准品(批号：1020081)组成，项目检测参数严格按照试剂盒说明书设置；水平2(批号：45782)和水平3(批号：45783)液体生化多项质控品由美国伯乐公司提供。

1.3方法

1.3.1新鲜血清的赋值 使用配套检测系统检测收集的5份不同TBIL水平的新鲜血清标本，每份标本检测3次，计算其均值，该均值即为配套检测系统对新鲜血清标本的赋值[6]。新鲜血清标本赋值后，2～8 ℃避光保存，并于1 h内对待评价检测系统完成校准。赋值前对仪器进行常规保养，然后使用Roche生化复合校准品对配套检测系统校准，且室内质控在控。

1.3.2待评价检测系统新鲜赋值血清多点校准 使用新鲜赋值血清对待评价检测系统进行多点校准前，对TBIL检测参数中的校准参数进行修改，其他参数不做修改，具体修改如下：Calibration Type由“Linear”改为“Spline”，Point由“2”改为“6”，Span由“2”改为“3”，同时将仪器中生化复合校准品TBIL的赋值删掉，另外新设置5个水平的校准品(校准品1～5)，并将经配套检测系统赋值的5份新鲜血清标本按水平从低到高的顺序依次输入校准品1～5赋值处。设置各水平校准品的校准架位置，新鲜赋值血清混匀后与纯化水分别放置于校准架的相应位置，选择校准类型为“Full”后对待评价检测系统TBIL检测项目进行多点校准，仪器自动绘制工作曲线。

1.3.3新鲜赋值血清多点校准前后检测结果的一致性评估 使用新鲜赋值血清对待评价检测系统进行多点校准前， 每天从-80 ℃超低温冰箱中将收集的新鲜血清标本取出8份(编号1～8)放置于室温避光环境中，恢复至室温并充分混匀后，参照EP9-A2文件[7]的方法，按1～8 、8～1 的顺序分别在配套检测系统和待评价检测系统中完成TBIL水平的检测，每份标本的检测结果取两次检测的均值，连续7 d共检测56份标本。使用新鲜赋值血清对待评价检测系统进行多点校准后，每天从-80 ℃超低温冰箱中取出另一套新鲜血清标本中的8份(编号1～8)在待评价检测系统中按1～8、8～1的顺序完成TBIL的水平检测，每份标本的检测结果取两次检测的均值，连续7 d共检测56份标本。收集数据，并参照EP9-A2文件[7]中的方法进行离群值检验，然后以配套检测系统的检测结果为X、待评价检测系统的检测结果为Y进行线性回归分析，计算新鲜赋值血清多点校准前后两检测系统间检测结果的线性回归方程Y=bX+a和R2，并通过回归方程计算待评价检测系统在不同医学决定水平(Xc)处的预期偏倚(SE)及其95%置信区间(95%CI)[7-8]。依据卫生行业标准WS/T403-2012确定TBIL检测的允许总误差(TEa)为±15%，并以SE≤1/2TEa为临床可接受标准，评价新鲜赋值血清多点校准前后两检测系统间检测结果的一致性。SE=[(b-1)X+a] ×100/X[7]。

1.4统计学处理 采用Excel 2010软件对数据进行分析处理。

2 结 果

2.1新鲜血清标本的赋值及对待评价检测系统进行校准 使用配套检测系统对5份新鲜血清标本进行赋值，各标本3次检测的均值依次为27.7、109.4、235.5、361.4、468.0 μmol/L，以此为各标本TBIL的水平，并使用这5份新鲜血清标本对待评价检测系统进行校准，仪器自动绘制工作曲线。

2.2新鲜赋值血清多点校准前后检测结果的比较 校准前，待评价检测系统和配套检测系统检测结果线性回归方程的b值为0.888 6，不在0.97～1.03内，且待评价检测系统的结果偏倚随TBIL水平的升高而增大，见图1、2；校准后，待评价检测系统和配套检测系统检测结果线性回归方程的b值为1.012 8，在0.97～1.03内，且待评价检测系统的结果偏倚均<1/2TEa，见图3、4。

图1 校准前配套检测系统与待评价检测系统TBIL检测结果线性回归图

2.3新鲜赋值血清多点校准前后两检测系统检测结果的一致性 根据回归方程计算新鲜赋值血清多点校准前后待评价检测系统在17.1、34.2、171.0、342.0 μmol/L 4个Xc处的SE、预期值及其对应的95%CI，结果见表1。

图2 校准前两检测系统间TBIL检测结果的偏倚图

图3 校准后配套检测系统与待评价检测系统TBIL检测结果的线性回归图

图4 校准后两检测系统间TBIL检测结果的偏倚图

表1 新鲜赋值血清多点校准前后待评价检测系统的SE、预期值及对应的95%CI

3 讨 论

检测系统是由仪器、试剂、校准品、操作程序等共同组成，但因各级医疗机构临床实验室的条件存在一定差异，而全自动生化分析仪和检测试剂盒的生产厂家众多，导致目前大部分临床实验室仍采用非配套检测系统进行常规生化项目的检测[9]。由于非配套检测系统未建立完整的溯源链，继续使用试剂盒的配套校准品及其标示值对项目进行校准，将影响检测结果的准确性，可能使实验室间的检测结果缺乏一致性，从而无法实现检验结果互认，故如何实现不同检测系统结果的一致性仍是目前临床实验室急需解决的实际问题[6,10]。

本研究结果显示，两检测系统分别使用试剂盒配套校准品进行校准时，其回归方程的b值为0.888 6，不在0.97～1.03内，说明两检测系统间检测结果存在较大的系统误差，待评价检测系统的偏倚随标本TBIL水平的升高而呈增大的趋势，与王杨等[3]、于智君等[4]的研究结果一致。因线性回归分析显示R2>0.95，说明进行比对的标本水平范围合理，其线性回归方程的b值和a值可靠，可通过回归方程计算待评价检测系统在不同Xc处的SE[7-8]。新鲜赋值血清多点校准前待评价检测系统在17.1、34.2、171.0、342.0 μmol/L这4个Xc处的SE均>1/2TEa，且SE随TBIL水平的升高而呈逐渐升高趋势，说明两检测系统检测结果缺乏一致性，这与王杨等[3]的研究结果存在一定差异，可能与其选择以SE≤±10%为临床可接受标准有关，也侧面反映了方法比对试验中所选择的质量标准将影响结果的评价。

本研究发现，校准前待评价检测系统在TBIL低水平处的偏倚较小，随着TBIL水平的降低偏倚趋近于零，而高水平处偏倚则随着TBIL水平的升高而逐渐增加，说明两检测系统间检测结果可能并不呈线性关系，此时肖光军等[11]使用的用外部校正因子来实现不同检测系统结果一致性的方法可能不适用于本研究中的两套检测系统，故应采用其他适宜的方法来提高检测结果的准确性和可比性。相关研究显示，非配套检测系统可使用国际公认的有证标准物质、参考方法或配套检测系统赋值的新鲜血清来进行校准，实现溯源链的传递，从而提高检测结果的准确性和可比性，虽然对大部分临床实验室来说，国际公认的有证标准物质和经参考方法赋值的新鲜血清均较难获得，但新鲜血清在不同检测系统间不存在基质效应，是非配套检测系统最佳的校准品[6,10]，故本研究采用经配套检测系统赋值的新鲜血清对待评价检测系统进行校准。同时，因两检测系统间检测结果可能并不呈线性关系，故本研究将TBIL的校准类型由两点校准改为多点校准，以进一步提高两检测系统对不同水平标本检测结果的一致性和可比性。本研究结果显示，经新鲜赋值血清多点校准后，其线性回归方程的b值由0.888 6变为1.012 8，已满足b值在0.97～1.03内的质量要求，检测结果偏倚及其在4个Xc处的SE均<1/2TEa，检测结果具有一致性，说明新鲜赋值血清多点校准可减小检测系统间的系统误差，使两检测系统间TBIL的检测结果具有一致性。本研究校准后，当TBIL水平接近600 μmol/L时，待评价检测系统的结果偏倚虽在可接受范围内，但与其他水平处的偏倚相比较明显增加，可能与TBIL水平已接近配套检测系统线性范围的上限和校准品5的水平较低有关，但该水平已远高于342.0 μmol/L这一Xc，该偏倚对新生儿病理性黄疸等疾病的诊疗影响较小，可在以后的研究中适当调整5份新鲜赋值血清标本的TBIL水平，以进一步提高不同检测系统间高水平标本检测结果的可比性。

综上所述，应用新鲜赋值血清作为非配套检测系统的校准品，可实现溯源链的传递，提高非配套检测系统检测结果的准确性及不同检测系统间检测结果的一致性，且具有成本低、操作简单的优点，在实现区域检验结果互认中具有较高的可行性。同时，试剂生产厂家和临床实验室应关注不同检测系统在低水平和高水平处检测结果的准确性和可比性，通过改变校准类型、调整校准品水平范围等方法进一步提高检测结果的准确性和可比性。本研究未对新鲜赋值血清两点校准与多点校准对TBIL检测结果一致性的影响进行探讨，也未在更多的检测系统间进行应用和探讨，因此所得结论仍需进一步研究验证。