鸡蛋花鞘锈菌重寄生真菌的种类鉴定及其寄主范围测定*

黄奕蔓，白津铭，朱文倩，李 峰，黄桂香，廖咏梅

(广西大学农学院，广西南宁 530004)

鸡蛋花Plumeriarubra是一种落叶灌木，树冠茂盛、花朵清香，是世界上多个国家的重要园林树种，我国广东、广西、海南等省区均有种植[1]。鸡蛋花锈病(Plumeria rust)是鸡蛋花的一种重要病害，病原菌为鸡蛋花鞘锈菌Coleosporiumplumeriae，感病叶片表面出现淡黄色病斑，叶片背面的病斑有大量橙黄色的夏孢子堆，发病后期叶片坏死，提前脱落，影响树势[2]。目前，印度[3]、美国、马来西亚[4]、越南和中国[5]均有鸡蛋花锈病的报道。

利用重寄生真菌防治植物锈病已有一些报道。李靖等[6]报道一种子囊菌门Ascomycota拟盘多毛孢属真菌Pestalotiopsiskenyana是茶麃生柱锈菌Cronartiumribicola的重寄生真菌，将P.kenyana的孢子悬浮液接种于茶麃生柱锈菌的锈孢子堆上5 d，P.kenyana的菌丝完全覆盖茶麃生柱锈菌的锈孢子堆，在电子显微镜下观察发现，茶麃生柱锈菌的锈孢子内含物浓缩，锈孢子壁变形。沈阔程[7]研究发现枝孢样枝孢霉Cladosporiumcladosporioides是落叶松-杨栅锈菌Melampsoralarici-populina的重寄生真菌，将枝孢霉的孢子悬浮液喷于落叶松杨栅锈菌的夏孢子堆上10 d，在电子显微镜下观察到夏孢子有菌丝穿透，原生质退化，在光照16 h/黑暗8 h、25℃的条件下，夏孢子萌发率从69.92%下降至36.74%。隋国强等[8]报道2种拟盘多毛孢菌P.kenyana和P.oryza均为石楠锈孢锈菌Aecidiumpourthiaea的重寄生真菌，将P.kenyana和P.oryza的孢子悬浮液分别接种于石楠锈孢锈菌的锈孢子堆后，在光学显微镜下观察到锈孢子均变成空壳。有关鸡蛋花鞘锈菌的重寄生真菌，仅见Baiswar等[9]报道鞘柄锈柱隔孢菌Ramulariacoleosporii为鸡蛋花鞘锈菌的重寄生真菌，但仅鉴定了重寄生真菌的种类，未见其对鸡蛋花鞘锈菌的重寄生作用的研究。

本研究在广西南宁市上林县万古茶园采集有重寄生现象的鸡蛋花锈病叶片，通过分离和纯化病叶背面病原菌夏孢子堆上的白色霉状物，结合形态特征观察和ITS、SSU、LSU的序列分析，鉴定重寄生真菌的种类，并测定其寄主范围，为丰富植物锈菌重寄生真菌的资源及开展鸡蛋花锈病及其他植物锈病的生物防治提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样品采集

在广西南宁市上林县万古茶园采集鸡蛋花鞘锈菌夏孢子堆上覆盖着白色霉状物的鸡蛋花锈病叶片；在广西大学学生宿舍区采集未施用农药的鸡蛋花鞘锈菌夏孢子堆上覆盖着白色霉状物的鸡蛋花锈病叶片；在广西大学常规喷洒农药的绿化区采集鸡蛋花鞘锈菌夏孢子堆呈橙黄色、无白色霉状物覆盖的鸡蛋花锈病叶片；在广西大学多功能标本园采集无花果Ficuscarica锈病(Ceroteliumfici，无花果蜡锈菌)叶片；在广西大学亚热带农科新城(扶绥)采集甘蔗锈病(Pucciniakuehnii，屈恩柄锈菌)叶片；在广西药用植物园采集鸡矢藤Paederiafoetida锈病(C.paederiae，鸡矢藤鞘锈菌)、杨树Populussimonii锈病(M.larici-populina，落叶松-杨栅锈菌)、虎杖Polygonumcuspidatum锈病(Pucciniapolygoni-amphibii，两栖蓼柄锈菌)、美人蕉Cannaindica锈病(P.thaliae，美人蕉柄锈菌)和紫苏Perillafrutescens锈病(C.plectranthi，香茶菜鞘锈菌)叶片；在广西玉米研究所采集玉米锈病(P.sorghi，玉米柄锈菌)叶片。

1.1.2 仪器与试剂

SU5000发射扫描电子显微镜(日本Hitachi公司)，VHX-6000超景深三维显微系统(日本基恩士公司)，80i光学显微镜(日本Nikon株式会社)，Fire reader XS D-55-26凝胶成像系统(英国UVItec公司)，EMS150R喷金仪(美国Electron Microscopy Sciences公司)，DHG-9246A型电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)，LRH-300-G恒温光照培养箱(韶关市泰宏医疗器械有限公司)，XW-80A涡旋混合器(上海青浦沪西仪器厂)，移液器(德国Eppendorf公司)，血球计数板(上海求精生化试剂仪器有限公司)。

Biospin真菌基因组DNA提取试剂盒(杭州博日科技股份有限公司)，琼脂糖(西班牙Biowest公司)，Dream Taq Green PCR Master Mix (2×)、双蒸水(Double distilled water，dd H2O)(南宁国拓生物科技有限公司)，引物ITS1、ITS4、NS1、NS4、NL1、NL4 [生工生物技术(上海)股份有限公司合成]，pH值6.8磷酸盐缓冲液(青岛高科技工业园海博生物技术有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 鸡蛋花鞘锈菌重寄生真菌的分离与纯化

用无菌接种针挑取鸡蛋花锈病叶片背面夏孢子堆上的白色菌丝体，移到马铃薯葡萄糖琼脂(Potato Dextrose Agar，PDA)平板上，置于恒温光照培养箱，在光照16 h/黑暗8 h、28℃的条件下培养。待长出的白色菌落直径达1 cm左右时，用无菌接种针挑取边缘菌丝体，移到新的PDA平板上纯化，纯化操作重复3次。在光学显微镜下观察到产孢后进行单孢纯化。用灭菌牙签在PDA平板上刮取菌丝体，收集于2 mL的灭菌离心管中，加入1.5 mL灭菌去离子水和2个直径2 mm的灭菌玻璃珠，置于涡旋混合器振荡，用4层纱布过滤后，得到分生孢子悬浮液。将分生孢子悬浮液稀释1 000倍后，涂布于新的PDA平板上，在光学显微镜下挑取单个分生孢子，再将单个分生孢子移至新的PDA平板上，置于光照16 h/黑暗8 h、28℃的条件下培养，当单个菌落直径达0.5 cm左右时，用无菌接种针将单个菌落转移到PDA斜面上，28℃培养至菌丝体长满斜面，置于4℃冰箱中保存备用。根据鸡蛋花锈病、鸡蛋花鞘锈菌和重寄生现象(Hyperparasitism)的英文名或学名的首字母组合PR-CPH标记单孢纯化的菌株。

1.2.2 鸡蛋花鞘锈菌重寄生真菌的重寄生性验证

将单孢纯化的菌株置于PDA平板上活化，当菌落直径达3 cm时，用牙签刮取菌丝体，按照1.2.1节的方法制作分生孢子悬浮液。用血球计数板将分生孢子悬浮液浓度调节至108个/mL。将分生孢子悬浮液喷洒于鸡蛋花锈病叶片背面的夏孢子堆上，以喷洒无菌水为对照，每处理3张鸡蛋花锈病叶片，重复3次。将接种后的鸡蛋花锈病叶片放在底部垫有湿棉花的泡沫盒中保湿，置于28℃下培养，每日观察鸡蛋花锈病叶片上夏孢子堆表面的变化，用光学显微镜观察拍摄夏孢子的形态特征。

1.2.3 光学显微镜下鸡蛋花鞘锈菌重寄生真菌的形态特征观察

选择鸡蛋花鞘锈菌重寄生真菌的代表菌株，将其菌丝块置于PDA平板中部，在菌丝块附近呈45°斜插一块灭菌盖玻片(20 mm×20 mm)，置于光照16 h/黑暗8 h、28℃的恒温培养箱中。当菌丝体长满盖玻片时，置于光学显微镜下观察。

1.2.4 扫描电子显微镜下鸡蛋花鞘锈菌重寄生真菌的形态特征观察

首先将有重寄生现象的鸡蛋花锈病叶片切为3 mm×3 mm的小块，浸入2.5%的戊二醛中，在4℃下固定12 h；然后在0.1 mol/L磷酸盐缓冲液(pH值6.8)中漂洗3次，每次10 min，室温下用乙醇系列浓度(30%、50%、70%、80%、90%和95%)分别脱水15 min；最后用100%乙醇脱水3次，每次30 min。脱水后的样品置于干燥箱中，28℃干燥1 d。用喷金仪在干燥后的叶片小块上喷一层铂钯合金，置于扫描电子显微镜下观察，加速电压为10 kV。

1.2.5 鸡蛋花鞘锈菌重寄生真菌的ITS、SSU和LSU基因测序与分析

将鸡蛋花鞘锈菌重寄生真菌的单孢菌株置于PDA平板上，28℃培养至菌落直径3 cm，用灭菌牙签收集菌丝体，置于1.5 mL离心管中，使用Biospin真菌基因组DNA提取试剂盒，按照说明书提取总DNA，并置于-20℃冰箱保存。用引物对ITS1/ITS4扩增ITS区域，NS1/NS4扩增SSU基因，NL1/NL4扩增LSU基因。引物序列见表1。

表1 引物对的核酸序列Table 1 Nucleotide sequence of primer pair

PCR反应体系20 μL：模板DNA 1 μL(20 ng/μL)、上下游引物各1 μL(1 mmol/L)、Dream Taq Green PCR Master Mix (2×)10 μL、ddH2O 7 μL。PCR扩增程序：94℃预变性5 min；94℃变性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸50 s，共35个循环；最后72℃延伸10 min。用1%琼脂糖凝胶电泳PCR产物，在凝胶成像系统中观察。将扩增获得清晰单一条带的PCR产物送至生工生物技术(上海)股份有限公司测序。将获得的核酸序列上传至NCBI的GenBank数据库，同时用BLAST比对序列的一致性。将3个序列联合(ITS-SSU-LSU)后，选择MEGA 6.0软件的邻接法(Neighbor-joining method，NJ法)构建系统发育树[12]。系统发育树的每个分支以自展法(Bootstrap)检验，重复值设定为1 000次。

1.2.6 鸡蛋花鞘锈菌重寄生真菌寄主范围的测定

将鸡蛋花鞘锈菌重寄生真菌的分生孢子悬浮液喷洒到无花果锈病、鸡矢藤锈病、甘蔗锈病、玉米锈病、杨树锈病、虎杖锈病、美人蕉锈病和紫苏锈病叶片背面的夏孢子堆上，按照1.2.2节的方法进行重寄生性测定。每日观察夏孢子堆表面的变化，当观察到夏孢子堆上出现白色菌丝体时，在光学显微镜下观察夏孢子的形态变化。

2 结果与分析

2.1 鸡蛋花鞘锈菌重寄生现象

鸡蛋花锈病叶片背面的夏孢子堆呈橙黄色[图1(b)]，在超景深三维显微系统下，可见夏孢子呈橙黄色、卵圆形，聚集成堆[图1(c)]。有重寄生现象的鸡蛋花锈病叶片背面的夏孢子堆表面呈白色[图1(a)]，在超景深三维显微系统下发现有大量白色菌丝体覆盖橙黄色夏孢子堆[图1(d)]，拨开表面的白色菌丝体，发现夏孢子堆变成白色[图1(e)]。

(a)鸡蛋花锈病叶背夏孢子堆上覆盖白色菌丝体；(b)鸡蛋花锈病叶背夏孢子堆橙黄色；(c)鸡蛋花鞘锈菌的夏孢子堆；(d)被重寄生真菌覆盖的夏孢子堆；(e)菌丝体下的夏孢子堆变白(a) The uredinia were covered by white mycelia on the reverse side of plumeria rust leaf；(b) The orange-yellow uredinia on the reverse side of plumeria rust leaf；(c) The uredinia of C.plumeriae；(d) The uredinia were covered by the hyperparasitic fungus；(e) The uredinia under the mycelia became white图1 鸡蛋花锈病及鸡蛋花鞘锈菌的重寄生现象Fig.1 Plumeria rust and the hyperparasitism of Coleosporium plumeriae

2.2 鸡蛋花鞘锈菌重寄生真菌的分离和纯化及其重寄生性验证

挑取鸡蛋花鞘锈菌夏孢子堆表面的白色菌丝体，经分离和单孢纯化，得到菌落形态相同、分生孢子特征一致的真菌菌株12个，标记为PR-CPH1至PR-CPH12。选择菌株PR-CPH1为代表菌株进行重寄生性验证，在鸡蛋花锈病叶片背面喷洒菌株PR-CPH1的分生孢子悬浮液后3 d，观察到大量白色菌丝体覆盖夏孢子堆表面[图2(a)]，喷洒无菌水的对照叶片背面夏孢子堆保持橙黄色[图2(b)]。喷洒分生孢子悬浮液后7 d，在光学显微镜下，可见被重寄生的夏孢子周围长有菌丝，夏孢子边缘破碎，失去原有的形状，颜色由橙黄色变为透明[图2(c)]。正常的夏孢子边缘完整，近圆形，橙黄色[图2(d)]。在扫描电子显微镜下，被重寄生的夏孢子畸形、皱缩，周围可见许多菌丝体和分生孢子[图2(e)]，正常的夏孢子饱满、近球形[图2(f)]。

2.3 鸡蛋花鞘锈菌重寄生真菌的形态特征

在PDA平板上，菌株PR-CPH1菌落近圆形，白色，凸起，表面有皱褶，边缘光滑，气生菌丝质地紧密；菌落背面黄色，有皱褶；28℃培养7 d，菌落直径26-27 mm。在光学显微镜下，菌株PR-CPH1的分生孢子梗细长，呈菌丝状；分生孢子呈头状聚生在分生孢子梗顶端，近圆形或卵圆形，单胞，无色，大小(0.5-1.0) μm×(0.9-1.2) μm。在扫描电子显微镜下，分生孢子梗细长，呈菌丝状，分生孢子分散，呈长椭圆形(图3)。

(a)喷洒菌株PR-CPH1的分生孢子悬浮液3 d的鸡蛋花锈病叶片背面；(b)喷洒无菌水3 d的鸡蛋花锈病叶片背面；(c)被重寄生的夏孢子周围可见菌丝与分生孢子，(c1)菌丝，(c2)分生孢子；(d)橙黄色的正常夏孢子；(e)被重寄生的夏孢子边缘皱缩；(f)近球形的正常夏孢子(a) The reverse of plumeria rust leaf was sprayed with conidia suspension of strain PR-CPH1 for 3 d；(b) The reverse of plumeria rust leaf were sprayed with sterile water for 3 d；(c) The mycelia and conidia appeared around urediniospore with hyperparasitized,(c1) Myceliumum,(c2) Conidium；(d) Normal orange-yellow urediniospore；(e) The edge of the urediniospore with hyperparasitized was shrunken；(f) Normal subglobose urediniospore图2 菌株PR-CPH1的重寄生性验证Fig.2 Hyperparasitism assay of strain PR-CPH1

(a),(b)在PDA上28℃培养7 d的菌落；(a)菌落正面白色；(b)菌落背面黄色；(c)分生孢子呈头状聚集在分生孢子梗顶端，(c1)分生孢子梗，(c2)分生孢子；(d)分生孢子；(e)菌丝体和分生孢子，(e1)菌丝体，(e2)分生孢子；(f)分生孢子梗和分生孢子，(f1)分生孢子梗，(f2)分生孢子(a),(b) The colony on PDA after incubated at 28°C for 7 d；(a) The obverse side of the colony was white；(b) The reverse side of the colony was yellow；(c) Conidia capitate aggregation at the apex of the conidiophore，(c1) Conidiophore，(c2) Conidia；(d) Conidia；(e) Mycelia and conidia，(e1) Mycelium，(e2) Conidia；(f) Conidiophore and conidium，(f1) Conidiophore，(f2) Conidium图3 鸡蛋花鞘锈菌重寄生真菌菌株PR-CPH1的形态特征Fig.3 Morphological characteristics of strain PR-CPH1 of hyperparasitic fungus of Coleosporium plumeriae

2.4 鸡蛋花鞘锈菌重寄生真菌ITS、SSU和LSU的序列分析

菌株PR-CPH1的总DNA经PCR获得的ITS序列(MW505984)、SSU序列(MW505988)和LSU序列(MW505987)均与Simplicilliumsubtropicum的相应片段序列有98%以上的序列一致性，即与GenBank数据库中S.subtropicum的ITS(AB603990)、SSU(LC496895)和LSU(LC496880)的序列一致性分别达99.00%、98.11%和98.11%。下载GenBank上发布的10种Simplicillium主要真菌种类的ITS、SSU和LSU序列，以Lecconicillium真菌L.acerosum(菌株号：CBS418.81)作为外种，在3个片段联合序列(ITS-SSU-LSU)构建的系统发育树中，菌株PR-CPH1与S.subtropicum(菌株号：JCM18180)的联合序列(ITS-SSU-LSU)聚在同一分支(图4)。

图4 菌株PR-CPH1与Simplicillium属的10种真菌基于ITS-SSU-LSU联合序列的系统发育树Fig.4 Phylogenetic tree of strain PR-CPH1 and 10 species fungi in Simplicillium based on the combined sequences (ITS-SSU-LSU)

根据Nonaka等[13]对S.subtropicum的形态特征描述及菌株PR-CPH1的ITS、SSU和LSU3个片段联合序列的系统发育分析，鉴定菌株PR-CPH1为S.subtropicum。S.subtropicum的菌落正面凸起，白色气生菌丝致密，菌落背面黄色或棕色，无色素分泌；在PDA上25℃培养7 d后，菌落直径为22-25 mm[13]。S.subtropicum的分类地位为子囊菌门Ascomycota粪壳菌纲Sordariomycetes肉座菌目Hypocreales虫草菌科Cordycipitaceae单梗霉属Simplicillium。

2.5 鸡蛋花鞘锈菌重寄生真菌对其他植物锈病菌的重寄生测定

将菌株PR-CPH1的分生孢子悬浮液分别喷洒到8种锈病叶片背面的夏孢子堆上，第3天发现鸡矢藤锈病和紫苏锈病叶背的夏孢子堆表面长出白色菌丝体，第10天发现杨树锈病叶背的夏孢子堆长出白色菌丝体，说明这3种植物锈病菌已被重寄生[图5：(a)(e)(i)]，喷洒清水的对照锈病叶片背面夏孢子堆保持橙黄色[图5：(b)(f)(j)]。在光学显微镜下，被重寄生的鸡矢藤鞘锈菌和落叶松杨栅锈菌的夏孢子表面长出菌丝体，菌丝体穿透夏孢子，落叶松-杨栅锈菌夏孢子表面除长出大量的菌丝体外，还可见分生孢子梗及分生孢子，被重寄生的3种锈病菌的夏孢子均变形，呈透明无色[图5:(c)(g)(k)]，而对照的夏孢子近圆形，呈橙黄色[图5：(d)(h)(l)]。可见，菌株PR-CPH1可以寄生鸡矢藤鞘锈菌、香茶菜鞘锈菌和落叶松-杨栅锈菌；而接种于无花果锈病、甘蔗锈病、玉米锈病、虎杖锈病和美人蕉锈病叶片背面的夏孢子堆上15 d后，夏孢子堆表面仍未观察到白色菌丝体，即无重寄生现象。

3 讨论

本研究从鸡蛋花鞘锈菌夏孢子堆表面分离到1种重寄生真菌，经形态学观察、重寄生性验证和代表菌株PR-CPH1的ITS、SSU和LSU3个序列联合分析，鉴定鸡蛋花鞘锈菌重寄生真菌为一种单梗霉属Simplicillium真菌：Simplicilliumsubtropicum。

在单梗霉属真菌中，仅见报道两种真菌S.obclavatum和S.lanosoniveum为植物锈菌的重寄生真菌。Wang等[14]报道S.obclavatum重寄生小麦条锈菌P.striiformis，其夏孢子的萌发率降低。Baiswar等[15]报道S.lanosoniveum重寄生宽叶胡颓子Elaeagnuslatifolia锈病的病原菌宽叶胡颓子内锈菌Endophyllumelaeagni-latifoliae(原名：Aecidiumelaeagni-latifoliae)，被重寄生的夏孢子萎缩，萌发率降低。S.lanosoniveum不仅是植物锈菌的重寄生菌，还是昆虫病原真菌和植物病原真菌。王妮等[16]报道S.lanosoniveum寄生白蜡树Fraxinuschinensis害虫桑白盾蚧Pseudaulacaspispentagona，喷洒浓度为108个/mL的孢子悬浮液36 h后，桑白盾蚧即被感染，144 h后桑白盾蚧雌成虫的死亡率可达93.33%。Skaptsov等[17]报道S.lanosoniveum寄生鸭脚木Scheffleraoctophylla害虫褐软蜡蚧Coccushesperidum，喷洒浓度为105个/mL的孢子悬浮液7 d后，褐软蜡蚧即被感染。Chen等[18]报道，在中国台湾省，Simplicilliumlanosoniveum可引起耳叶槐叶萍Salviniaauriculata和人厌槐叶萍S.molesta的褐斑病。此外，Zhao等[19]发现，Simplicilliumchinense可作为大豆胞囊线虫Heteroderaglycines和大豆根结线虫Meloidogyneincognita的生物防治剂，施用S.chinense48 h后，大豆胞囊线虫和大豆根结线虫幼虫的死亡率均达到99%。本研究中鸡蛋花鞘锈菌的重寄生真菌S.subtropicum，仅见在喀麦隆被报道为一种杜氏木属药用植物Duguetiastaudtii的内生真菌[20],未见其为植物锈菌重寄生真菌的报道。

(a)，(e)，(i)喷洒菌株PR-CPH1分生孢子悬浮液，病叶背面的夏孢子堆被白色菌丝体覆盖；(a)鸡矢藤锈病；(e)紫苏锈病；(i)杨树锈病；(b)，(f)，(j)喷洒无菌水，病叶背面的夏孢子保持橙黄色；(b)鸡矢藤锈病；(f)紫苏锈病；(j)杨树锈病；(c)，(g)，(k)被重寄生的夏孢子；(c)鸡矢藤鞘锈菌夏孢子表面长出菌丝体；(g)香茶菜鞘锈菌夏孢子变透明；(k)落叶松-杨栅锈菌夏孢子表面长出菌丝体，(k1)分生孢子梗，(k2)头状聚生的分生孢子；(d)，(h)，(l)正常的橙黄色近圆形夏孢子；(d)鸡矢藤鞘锈菌；(h)香茶菜鞘锈菌；(l)落叶松-杨栅锈菌(a)，(e)，(i) Sprayed with conidia suspension of strain PR-CPH1，the uredinia on the reverse of diseased leaf was covered by white mycelia；(a) Paederia rust；(e) Perilla rust；(i) Poplar rust；(b)，(f)，(j) Sprayed with sterile water，the uredinia on the reverse of diseased leaf was kept orange-yellow；(b) Paederia rust；(f) Perilla rust；(j) Poplar rust；(c)，(g)，(k) The urediniospores were hyperparasitized；(c) The mycelia were grown from the surface of C.paederiae；(g) The urediniospore of C.plectranthi became transparent；(k) The mycelia were grown from the surface of M.larici-populina，(k1) The conidiophore of isolate PR-CPH1，(k2) Conidia capitate aggregation at the apex of the conidiophore；(d)，(h)，(l) Normal urediniospores were orange-yellow and suborbicular；(d) C.paederiae；(h) C.plectranthi；(l) M.larici-populina图5 菌株PR-CPH1对鸡矢藤鞘锈菌、香茶菜鞘锈菌和落叶松-杨鞘锈菌的重寄生测定Fig.5 Hyperparasitism assay of strain PR-CPH1 to Coleosporium paederiae,C.plectranthi,and Melampsora larici-populina

广西大学校园内，在常规喷洒农药的绿化区域中，鸡蛋花锈病发生比较严重，但未发现重寄生现象；在从未喷施农药的学生宿舍区中，鸡蛋花鞘锈菌的重寄生现象较为普遍。因此，推测常规喷洒农药对鸡蛋花鞘锈菌的重寄生有一定的抑制作用。研究鸡蛋花鞘锈菌重寄生真菌S.subtropicum的重寄生条件，利用重寄生真菌生物防治鸡蛋花锈病，从而减少鸡蛋花锈病的发生和危害，减少农药的使用频率，减少环境污染，具有重要的经济效益和社会效益，值得进一步研究。

本研究发现，重寄生真菌S.subtropicum可以重寄生鸡矢藤鞘锈菌、香茶菜鞘锈菌和落叶松-杨栅锈菌。香茶菜鞘锈菌仅为害紫苏，引起紫苏锈病[21]，另外2种锈病菌可引起其他植物的锈病，其中鸡矢藤鞘锈菌可引起鸡矢藤、毛鸡矢藤Paederiacavaleriei和紫皮石斛Dendrobiumdevoninum[22]的锈病；落叶松-杨栅锈菌可引起杨树和松树[23]的锈病。因此，进一步开展重寄生真菌S.subtropicum对鸡蛋花锈病的生物防治研究，其研究成果可应用于由鸡矢藤鞘锈菌、香茶菜鞘锈菌和落叶松-杨栅锈菌引起的其他植物锈病上，使应用范围更加广泛。

4 结论

本研究在南宁市上林县万古茶园采集到有重寄生现象的鸡蛋花锈病叶片，大量白色菌丝体覆盖病叶背面的夏孢子堆。经过重寄生性验证、形态特征观察和ITS-SSU-LSU联合序列分析，鉴定鸡蛋花鞘锈菌的重寄生真菌为S.subtropicum。S.subtropicum还可以重寄生鸡矢藤鞘锈菌、香茶菜鞘锈菌和落叶松-杨栅锈菌。可见，重寄生真菌S.subtropicum在植物锈病的生物防治中具有潜在的应用前景，值得进一步研究。