气相色谱法测定鱼、虾中拟除虫菊酯类农药残留

常利民 张洋 蒋文菊 施鹏婓 郑园 汪春明 王姝苇

（1.中国检验检疫科学研究院综合检测中心 北京 100123；2.中轻检验认证有限公司；3.中检科（北京）测试技术有限公司）

1 前言

中国作为世界最大的渔业养殖国和水产品贸易国，水产品产量多年稳居世界首位，随着鱼、虾等水产品的消耗量不断增加，水产品的质量安全问题受到广泛关注。拟除虫菊酯类农药被普遍应用于水产养殖[1]和农业作业[2]，其性质稳定、不易降解，残留物会引起哺乳动物的神经、遗传和免疫系统的病变[3]，可随食物链传递，在人体内富集。

但多年来水产品质量安全的关注点多集中于兽药残留类项目[4-6]，对水产品中农药的残留关注较少，关于拟除虫菊酯类农药残留的分析也主要集中于果蔬方面，一般采用凝胶渗透色谱净化的前处理方法，所用设备昂贵，且操作复杂，不适合大范围推广。乙腈饱和正己烷的除脂效果良好[7-8]，氟罗里硅土柱净化是常用且成熟的农药残留检测手段，与凝胶渗透色谱净化相比，具有简单、易操作、经济等优点，故本文对此进行研究，以期为相关人员提供参考。

2 材料与方法

2.1 仪器与试剂

气相色谱仪（Agilent7890，美国安捷伦公司）；气相色谱柱（HP-5，规格：30 m×0.25 mm，0.25 μm，美国安捷伦公司）；涡旋混匀器（VORTEX GENIE2，美国Scientific Industries公司）；固相萃取装置（VISIPREP DL，美国色谱科公司）；离心机（CR21N，日本日立公司）；振荡器（SR-2DS，日本TAITEC公司）；氮吹仪（EVA50A，中国普立泰科公司）；超纯水系统（Milli-Q，美国密理博公司）；移液枪（德国艾本德公司）；分析天平（XS105&PL303，瑞士梅特勒-托利多集团）。

氰戊菊酯农药标准品、溴氰菊酯农药标准品、氯氰菊酯农药标准品（纯度≥95%，德国Dr Ehrenstorfer）；乙腈、正己烷（色谱纯，美国费希尔公司）；氯化钠、丙酮（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）；固相萃取柱（Mega Be-Fl，1 g/6 mL，天津博纳艾杰尔科技有限公司）。

样品来源于中国检验检疫科学研究院综合检测中心样品间。

2.2 标准溶液配制

分别准确称取＞10 mg的标准品，置于10 mL容量瓶中；用正己烷溶解并定容，得到适当浓度的标准储备液A；准确吸取适量的标准储备液A，置于10 mL容量瓶中，得到10 mg/L标准混合溶液B；将其逐级稀释为1.0mg/L标准混合溶液C；准确吸取适量1 mg/L标准混合溶液，用正己烷逐级稀释成质量浓度为5、10、25、50、100、200、500 μg/L的系列标准工作溶液。

2.3 气相色谱条件

开始温度160℃，保持1min；30℃/min升至250℃，保持2 min；5℃/min升至280℃，保持8 min。进样口温度：230℃；检测器温度：310℃；进样量：1 μL；载气：氦气；流速：1.5 mL/min。

2.4 提取溶剂的选择

采用乙腈作为提取溶剂，与丙酮和乙酸乙酯相比，乙腈无法对大量的动物脂肪和亲脂性干扰物进行提取，且对氰戊菊酯、氯氰菊酯和溴氰菊酯的溶解度较大[9]。因用乙腈提取会使蛋白质变性，导致样品成团而提取不完全，故提取前需加入5 mL超纯水。

2.5 样品前处理

称取5 g样品，加入5 mL超纯水；剧烈涡旋30 s，用15 mL乙腈振荡提取10 min；加入1.5 g氯化钠，涡旋1 min；以5 000 r/min离心5 min，重复提取2次；合并上清液，置于50 mL离心管中；加入10 mL乙腈饱和正己烷，振荡2 min；以5 000 r/min离心5 min，弃去正己烷层[10]，重复2次；将提取液转移至100 mL鸡心瓶中，40℃旋蒸至近干；加入3 mL正己烷复溶，待净化。

依次用5 mL丙酮、5 mL正己烷预淋洗氟罗里硅土柱，倒入上述待净化溶液，弃去流出液；用3 mL丙酮+正己烷（10+90，V/V）洗脱2次[11]；用10 mL氮吹管接收洗脱液，40℃氮吹至近干；加入1 mL正己烷复溶，待测。

3 结果与分析

3.1 氰戊菊酯、氯氰菊酯和溴氰菊酯的色谱图

采用HP-5色谱柱进行采集，5 μg/kg添加水平下的样品色谱图见图1。从图1可以看出，3种化合物的分离效果很好，在12 min内可完全分离。

图1 氰戊菊酯、氯氰菊酯和溴氰菊酯的色谱图

3.2 方法回收率、精密度和定量限

在空白鱼、虾样品中，加入氰戊菊酯、氯氰菊酯和溴氰菊酯的标准混合溶液C，使其添加水平为5 μg/kg、10 μg/kg和50 μg/kg，按“2.4”项进行前处理，每个添加水平重复测定6次，计算样品加标平均回收率和相对标准偏差（RSD），结果见表1。结果显示，平均回收率在70%～100%，RSD＜15%，符合GB 27404-2008对实验室内变异系数的要求。在最低添加浓度5 μg/kg，以10倍信噪比计算样品中氯氰菊酯、氰戊菊酯和溴氰菊酯的定量限（LOQ），低于GB 29705-2013所要求的定量限（LOQ）。

表1 鱼、虾加标回收率、精密度及定量限（n=6）

3.3 实际样品测定

采用该方法检测企业送检和市场随机抽检的10批鱼、虾样品，同一类样品做2个加标实验，每个样品平行测定2次。结果显示，样品均未检出该方法所涉及的农药残留，回收率在70%～100%之间。

4 结论

本文采用乙腈饱和正己烷结合氟罗里硅土柱对鱼、虾中氰戊菊酯、氯氰菊酯和溴氰菊酯进行测定。结果表明，3种农药在5 μg/kg、10 μg/kg和50 μg/kg 3个添加水平的回收率、准确度、精密度均良好，能够满足实验室检测要求。该方法可有效检测鱼、虾中的氰戊菊酯、氯氰菊酯和溴氰菊酯残留，且具有准确、可靠、有效、经济的优点。