液相色谱法测定半成品泡菜中乙二胺四乙酸二钠残留量

周至均，王丽兰，罗红梅，王莎莎

（国家泡菜质检中心（四川），四川眉山 620010）

我国是泡菜生产加工大国，泡菜也是我国传统的消费食品，产品种类多，消费量较大[1]。但由于土壤污染，蔬菜铅含量较高，泡菜企业在生产加工过程中，加人一定量的乙二胺四乙酸二钠，不仅可以降低泡菜中的铅含量，其还具有抗氧化和防腐功能，具有良好的抗菌活性，可以防止食品褐变。《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》（GB 2760—2014）规定在腌渍蔬菜中乙二胺四乙酸二钠的最大使用量为0.25 g·kg-1，但泡菜企业在生产加工过程中，由于EDTA二钠混合不均、加入量不同等因素，在经过脱铅工艺后，可能会造成泡菜中EDTA二钠残留量超标[2]。现有检测标准只适用于成品样品，而半成品泡菜与成品泡菜在很多方面都有所差异[3-4]。因此，本文建立了一种操作简单且成本低的半成品泡菜中EDTA二钠含量的检测方法，可用于企业在生产过程中对半成品泡菜中EDTA二钠含量进行快速检测。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

乙二胺四乙酸二钠（EDTA二钠），纯度：99.97%，标准物质GBW(E)060311；甲醇，色谱纯；三氯化铁，四丁基氢氧化铵，实验用水为电阻率18.2 MΩ·cm的超纯水；0.45 μm水系微孔滤膜。

1.2 仪器与设备

液相色谱仪Agilent1260（配DAD检测器），美国安捷伦科技公司；漩涡混合器，上海谷宁仪器有限公司；超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；万分之一电子天平ML 104T，梅特勒-托利多仪器有限公司。

1.3 溶液配制

三氯化铁溶液：称取0.54 g三氯化铁溶于90 mL水中，用纯水溶解并定容至100 mL容量瓶中混匀。

四丁基氢氧化铵溶液：吸取40%四丁基氢氧化铵水溶液3.25 mL，置于烧杯中，加水130 mL，再用甲酸稀溶液将pH调至3.30，将此溶液转移至1 000 mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，脱气后备用。

1.4 实验方法

1.4.1 样品预处理

从腌制池中取出通过加入EDTA处理过的半成品泡菜样品，按照泡菜加工工艺用自来水冲洗2 min，沥干后将蔬菜放入空烧杯中，作为待测样品。取有代表性样品约500 g用组织捣碎机捣碎，装入一次性密封袋中保存。称取约5.0 g样品于50 mL具塞玻璃管中，加入20 mL蒸馏水、1 mL三氯化铁溶液，混匀后于超声波中超声20 min，使之充分衍生化。冷却至室温后，用蒸馏水定容至刻度混匀。将衍生化样品溶液在旋涡混合器上混合2 min，在离心机中以4 000 r·min-1离心5 min。取上清液过0.45 μm水系滤膜后供液相色谱仪测定[5]。

1.4.2 标准曲线配制

准确称取0.100 0 g乙二胺四乙酸二钠（EDTA二钠），用纯水溶解并定容至100 mL容量瓶中，得到EDTA二钠标准中间溶液（1 mg·mL-1）；分别吸取EDTA二钠标准中间溶液0 mL、0.25 mL、0.50 mL、1.00 mL、2.00 mL和4.00 mL于50 mL容量瓶中，分别加入1 mL三氯化铁溶液，用蒸馏水定容至刻度，摇匀后，即得到EDTA二钠标准系列溶液衍生物，同时做标液空白，分别含EDTA二钠0 μg·mL-1、5.0 μg·mL-1、10.0 μg·mL-1、20.0 μg·mL-1、40.0 μg·mL-1和 80.0 μg·mL-1，临用时配制。

1.4.3 色谱条件

色谱柱：迪马C18柱（250 mm×4.6 mm，粒度5.0 μm）；泵：四元泵；流动相：四丁基氢氧化铵水溶液∶甲醇=90∶10；流速：1 mL·min-1；柱温：35 ℃；检测器：二极管阵列检测器，检测波长260 nm；进样量：20 μL。

2 结果与分析

2.1 检测波长的选择

在190～400 nm处对EDTA二钠标准系列溶液衍生物进行扫描，结果显示在250～260 nm处有最大吸收，如图1所示。为了减少干扰杂峰，选择波长为260 nm进行检测。

图1 EDTA二钠标准系列溶液衍生物光谱图

2.2 色谱图

将配制好的EDTA二钠标准系列溶液衍生物和样品预处理后得到的滤液在上述1.4.3条件下测定，得到EDTA二钠标准溶液衍生物色谱图（图2）和样品中EDTA二钠衍生物色谱图（图3），走样时间22 min，标准品保留时间在19 min左右。

图2 EDTA二钠标准溶液衍生物色谱图

图3 样品中EDTA二钠衍生物色谱图

2.3 线性范围和检测限

在选定的色谱条件下，进样20 μL，以EDTA二钠质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。回归方程为y=6.830 2x-0.198 3，相关系数R2=1，说明在 0 ～ 80.0 μg·mL-1存在良好线性关系，根据信号与噪声比值等于10时作为定量检出限，得出本方法定量检出限为20 mg·kg-1。

2.4 方法学验证实验

选择半成品泡青菜为样品，称取样品后精密添加3种浓度标准品，分别按照1.4.1进行样品预处理后，按1.4.3条件测定。加标回收率和相对标准偏差见表1。

表1 不同加标水平条件下的回收率与精密度（n=6）

2.5 脱铅后样品EDTA二钠残留量

称取脱铅后的半成品泡菜样品5 g左右，以相同的仪器条件测定脱铅后样品中EDTA二钠残留量。经检测，处理后的青菜半成品EDTA二钠残留量为0.118 g kg-1，豇豆半成品EDTA二钠残留量为0.082 g·kg-1，检测结果较为稳定。

3 结论

加入适量食品级乙二胺四乙酸二钠对半成品泡菜进行铅处理后，采用液相色谱法测定脱铅后样品中EDTA二钠残留量，该法操作简单、快速，具有准确度高和精密度好等优点，可为半成品泡菜中EDTA二钠残留量的检测提供参考。