中药冰片对腹部切口大鼠血生化和血常规的影响

黄小琼，严家荣，姚欣伶，梁志健，陈桂煌，白建瑜，冯学轩，黎耀俊，江国健，郑佳琳

（广东省医学实验动物中心，广东 佛山 528248）

缓解动物产生的疼痛是动物福利基本要求，也是兽医管理的重要内容，在实验动物行业，2014 年实施的《实验动物机构质量和能力的通用要求》（GB/T27416-2014）明确规定术后观察、镇痛和护理[1]，对疼痛和痛苦已做出相关要求。但目前对小动物模型制备术后镇痛护理的研究报道很少，特别镇痛药物的使用、效果和对研究的不良副作用等可参考的相关研究极少，目前没有一个很好的指导原则，导致试验人员不清楚或担心对研究结果有不良影响而忽略动物术后的镇痛护理，难以保障动物福利，对研究数据也会造成偏差。国内越来越意识到使用有效的识别方法和镇痛药，疼痛和痛苦是可以被有效控制的，选择合适的术后镇痛药的研究迫在眉睫。现代研究表明冰片具有保护脑缺血、促进血脑屏障开放、镇痛、抗炎等药理作用[2]，但冰片在治疗用药的毒副作用报道比较少。本研究采用冰片灌胃给予腹部切口手术大鼠，检测血常规11 项和总胆红素（TBIL）、碱性磷酸酶（ALP）、尿素氮（BUN）、肌酸激酶（CK），为动物实验术后镇痛用药和相关实验研究提供参考数据，拓展冰片的临床应用范围[3]。

1 材料与方法

1.1 动物来源

SPF 级雄性 SD 大鼠 50 只，194~221 g，由广东省医学实验动物中心提供[SCXK（粤）2022-0002]。饲养于屏障设施[SYXK（粤）2022-0002]。动物实验经广东省医学实验中心实验动物伦理委员会审查批准。

1.2 实验药物

中药冰片：批号10917，福建南平青松化工有限公司；双氯芬酸钠肠溶片：批号X1506，北京诺华制药有限公司。冰片低剂量组和高剂量组剂量分别为0.0125 g/kg体重和0.05 g/kg体重（按药典0.24 g/60kg体重的剂量折算成大鼠用量,每天给药2 次。低、高剂量组分别相当于临床正常用量的1、4 倍）。双氯芬酸钠肠溶片大鼠剂量为5 mg/kg 体重（按临床剂量 100 mg/60 kg 体重计算，10 mg/kg 体重分 2 次给药）。以0.5%的CMC-Na 溶液作为溶媒配制试验药物[4~5]。

1.3 主要仪器和试剂

全自动血细胞分析仪：型号BC5000，深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司；全自动生化分析仪：型号日立7020，日本株式会社日立高新技术。BS-3000A 电子天平：感量0.1 g，上海友声衡器有限公司；KDC-2046 低速冷冻离心机，科大创新股份有限公司中佳分公司；R550lP 小动物麻醉机，深圳市瑞沃德生命科技有限公司；异氟烷，批号20080701，有效期至202308，深圳市瑞沃德生命科技有限公司；乌来糖（氨基甲酸乙酯），批号20201030，有效期至：20251029，国药集团化学试剂有限公司；M52LH溶血剂：批号2021101501，有效期至20231014，深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司；M-52DIFF 溶血剂：批号2021090301，有效期至 20230902，深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司；DS 稀释液：批号2021110401，有效期至20231103，深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司；TBIL 试剂盒：批号20210712，有效期至20221231，上海科华生物工程股份有限公司；ALP 试剂盒：批号20210912，有效期至20230325，上海科华生物工程股份有限公司；BUN 试剂盒：批号20210722，有效期至 20220704，上海科华生物工程股份有限公司；CK 试剂盒：批号20210512，有效期至20221109，上海科华生物工程股份有限公司；

0.5 %的CMC-Na 溶液的配制：准确称量1 g CMC-Na，磁力搅拌器室温边搅拌边缓慢加入装有约160 mL 氯化钠注射液的烧杯中，搅拌至溶解，2℃~8 ℃过夜，第二天量筒中定容至200 mL 后混匀，210℃高压灭菌后2℃~8 ℃保存备用。20%乌来糖溶液的配制：准确称取20 g 乌来糖，加入氯化钠注射液至100 mL，摇匀。

1.4 实验方法

50 只大鼠按体重区组随机分为假手术组、模型组、双氯芬酸钠组、中药冰片低剂量组、中药冰片高剂量组，每组10 只/组。模型组、双氯芬酸钠组、中药冰片低剂量组、中药冰片高剂量组参考文献建立大鼠腹部切口痛模型，大鼠异氟烷吸入麻醉，4%~5%诱导，1%~2%维持[6]，选择剑突下 0.5cm 腹正中切口，每层切口长度均为2cm。切割皮肤肌肉腹膜，行内脏探查。探查方法[7]：无菌手套操作，右手食指深入腹腔，先环行探查腹腔一圈，再用拇指和食指探查肠管，提出靠近十二指肠末端长约10cm 的一段小肠至腹腔外，放在生理盐水打湿的无菌纱布上，一直探查肠管2min。探查完毕后再按顺序回纳肠管至腹腔，分层缝合伤口，假手术组大鼠只做相同浓度异氟烷吸入麻醉。术后每天检查伤口，用碘酊消毒伤口及周围皮肤。肌注青霉素8 万U/只，1 次/d，连续3d，以防并发感染。术后连续2 d 中药冰片低剂量组、中药冰片高剂量组和双氯芬酸钠组分别灌胃给予0.005 g/mL、0.02 g/mL 的冰片和0.5 mg/mL 双氯芬酸钠肠溶片混悬液，假手术组、模型组灌胃给予0.5%CMC-Na 溶液。术后24h 内、48 h 内称重、称摄食摄水量、测定大鼠术后48 h 内血常规 11 项和胆红素（TBIL）、碱性磷酸酶（ALP）、尿素氮（BUN）、肌酸激酶（CK）（表 1 和表 2）。

1.5 统计方法

数据以均数±标准差表示；采用SPSS 21.0 统计软件分析，检查各种数据的分布状况，体重、摄食、摄水采用重复测量资料方差分析方法，组间LSD 法，血生化和血常规计量资料数据方差齐，或数据经转换后方差齐，则采用多因素方差分析方法，若数据经转换后方差仍不齐，采用秩和检验进行统计分析，组间LSD 法。检验水平α=0.05。

2 结果

2.1 对大鼠体重、摄食量和的摄水量的影响

结果表明（表1），手术后24h 和48h 内模型组和各给药组大鼠体重有不同程度下降，与模型组比较，24h 内中药冰片高剂量组和双氯芬酸钠肠溶片组体重变化有显著性增加（P<0.05 或P<0.01），中药冰片低剂量组体重变化无显著性增加（P>0.05），48h内双氯芬酸钠肠溶片组体重变化有显著性减少（P<0.05），中药冰片低剂量组和中药冰片高剂量组体重变化无显著性增加（P>0.05）；与双氯芬酸钠肠溶片组比较，24 h 内中药冰片低剂量组体重变化有显著性减少（P<0.05），48 h 内中药冰片低剂量组、24h 内和48 h 内中药冰片高剂量组体重变化均无显著性减少（P>0.05）；与假手术组比较，模型组、各给药组24 h 内体重变化有显著性减少（P<0.01），48 h 内体重变化无显著性减少（P>0.05）。

表1 中药冰片对腹部切口大鼠术后体重变化、摄食和饮水的影响 g

与模型组比较，24h 内双氯芬酸钠肠溶片组摄食量有显著性增加（P<0.05），中药冰片高剂量组和中药冰片低剂量组摄食量均无显著性增加（P>0.05），48h 内各给药组摄食量均无显著性增加（P>0.05）；与双氯芬酸钠肠溶片组比较，24 h 内中药冰片高剂量组摄食量有显著性减少（P<0.05），48 h 内中药冰片高剂量组、24h 内和48 h 内中药冰片低剂量组体重均无显著性减少（P>0.05）；与假手术组比较，模型组和各给药组24 h 内大鼠体重变化和24 h、48h 内大鼠摄食量均有显著性减少（P<0.05或 P<0.01）。

与模型组比较，24 h 内和48 h 内各给药组大鼠摄水量均无显著性增加（P>0.05）；与双氯芬酸钠肠溶片组比较，24 h 和48 h 内中药冰片高剂量组和中药冰片低剂量组摄水量均无显著性增加（P>0.05）；与假手术组比较，模型组24 h 内和48 h 内大鼠摄水量均无显著性减少（P>0.05）。

2.2 对腹部切口大鼠血生化的影响

结果表明（表2），与模型组比较，中药冰片低剂量组BUN 有显著性减少（P＜0.05 或P＜0.01），双氯芬酸钠肠溶片组BUN 有显著性增加（P＜0.01）；与双氯芬酸钠肠溶片组比较，模型组、中药冰片高剂量组和中药冰片低剂量组BUN 有显著性减少（P＜0.05）；与假手术组比较，模型组、中药冰片高剂量组和中药冰片低剂量组BUN有显著性减少（P＜0.05），中药冰片高剂量组、中药冰片低剂量组和双氯芬酸钠肠溶片组ALP 有显著性减少（P＜0.05 或P＜0.01）。

表2 中药冰片对腹部切口大鼠血生化的影响 umol/L、U/L、mmol/L

2.3 对腹部切口大鼠血常规的影响

结果表明（表3），与模型组比较，各组血常规11 项均无显著性差异（P>0.05）；与双氯芬酸钠肠溶片组比较，各组血常规11 项均无显著性差异（P>0.05）；与假手术组比较，各组血常规11 项均无显著性差异（P>0.05）。

表3 中药冰片对腹部切口大鼠血常规11 项的影响

续表3 中药冰片对腹部切口大鼠血常规11 项的影响

3 讨论

动物术后镇痛须由专业人员判断和选用最适宜的镇痛剂、麻醉剂或其他措施，既要符合兽医临床和人道方面的要求，又不能影响科学实验的结果。国内越来越关注动物福利和兽医临床用药的安全，减少疼痛痛苦是一项综合措施，包括药物、操作、器械、程序等，需要针对特定的实验制定方案。改善术后疼痛反应，对动物的术后恢复是密不可分的，使用镇痛药物时，需要注意监测镇痛药物的治疗反应，若出现副作用或临床疼痛反应不能改善时，应该改变或停止镇痛药物的使用。吗啡等阿片类镇痛药效果镇痛明显，但由于价格昂贵和购买困难，同时引起呕吐、起效时间长等难以得到广泛应用[8]，朱敏等研究表明中药雪莲注射液用于切口痛大鼠有明显镇痛效果[9]。中药冰片具有开窍醒神、清热止痛作用，其使用的领域非常广，可应用于热病神昏、痉厥与中风痰厥等多种疾病的治疗中，此外，冰片还能起到抑杀细菌、止痛和对中枢神经保护作用[10]。路艳丽研究提示[11]，冰片重复给药 6 个月，1.2 g/kg 组雌性大鼠碱性磷酸酶(ALP)增高，雄性大鼠和雌性大鼠尿素氮(BUN)升高，0.3 和1.2 g/kg 组雄性大鼠的总胆红素(TBIL)升高，其他生化指标与对照组比较未见异常；本研究结果提示，0.05 g/kg 体重中药冰片可显著增加术后24h 内动物体重，具有明显的镇痛效果，与模型组比较，中药冰片低剂量组BUN 有显著性减少（P＜0.05 或 P＜0.01），各组血常规 11 项、TBIL、ALP 和 CK 均无显著性差异（P＜0.05）；冰片用于术后镇痛对血常规和血生化指标相对安全，在组织损害方面和镇痛机制有待进一步研究。