三叶青不同部位显微特征研究

李振斌，杜家会，沈 刚，邓朝义

(1.黔西南民族职业技术学院，贵州 兴义 562400；2.成都市中草药研究所，四川 成都 610016；3.贵州黔西南喀斯特区域发展研究院，贵州 兴义 562400)

三叶青为葡萄科崖爬藤属植物三叶崖爬藤(TetrastigmahemsleyanumDiels et Gilg)的新鲜或干燥块根，有清热解毒、消肿止痛、化痰散结的功效，常用于小儿高热惊风、百日咳、毒蛇咬伤等[1]；也可选用干燥全草，具有清热解毒、消肿止痛、活血祛风等功效，用于流行性感冒、肝炎、泌尿系统结石、跌打损伤等[2]。

目前，三叶青(蛇附子)的本草考证[3-4]、生物学研究[5-7]、化学成分[8]、药理作用[9-10]已有不少研究报道，但在显微特征方面，仅见于对其块根、须根进行的探究[11-12]，未见茎、叶的详细报道。为准确应用三叶青，本研究从块根、茎、叶进行显微特征研究，以期为后期更深入的研究及制定质量标准提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 材料

本研究所用三叶青经贵州黔西南喀斯特区域发展研究院邓朝义研究员鉴定为葡萄科崖爬藤属植物三叶崖爬藤(TetrastigmahemsleyanumDiels et Gilg) 的全株。其样品来源的详细信息，见表1。

表1 样品来源

1.2 仪器

DMEX20生物显微镜(带有成像显微系统)；HistoCore AUTOCUT全自动转轮式切片机。

1.3 方法

1.3.1 石蜡切片显微鉴别 取药材块根、中茎、叶制成适当规格，FAA液固定，冲洗，脱水，透明，浸蜡，包埋，切片，脱蜡，二重染色，封藏，贴标签。显微镜下观察，描述其植物组织特征[13]。

1.3.2 粉末显微鉴别 取少量的药材粉末于载玻片上，加2～3滴水合氯醛，在酒精灯上透化后，加稀甘油1～2滴，盖上盖玻片置于显微镜下观察，描述其粉末显微特征。

2 结果

2.1 横切显微鉴定

2.1.1 块根横切面 木栓层由 2～5列木栓细胞组成。皮层数列细胞，散有含草酸钙针晶束的黏液细胞，部分薄壁细胞含棕色物；纤维束排列呈断续环状，位于维管束上方；韧皮部细胞较小，排列紧密；韧皮纤维呈条带状；形成层呈环状；木质部导管稀少，径向排列；导管周围木纤维发达；射线多宽阔，散有含草酸钙针晶束的黏液细胞；薄壁细胞含草酸钙簇晶和淀粉粒。见图1。

注：1.木栓层；2.皮层；3.纤维束；4.草酸钙针晶束；5.韧皮部；6.韧皮纤维；7.木质部；8.射线；9.草酸钙簇晶；10.导管；11.中央薄壁组织。

2.1.2 中茎横切 表皮细胞一列，外被角质层。皮层由 6～8 列类圆形的薄壁细胞组成，有的含草酸钙蔟晶，黏液细胞内含草酸钙针晶束。中柱鞘纤维束环列，棱角处较大，壁厚。维管束环列，相对两边维管束较发达。木质部顶端木纤维束发达，一至多条带状排列，导管孔径较大，径向排列，周围木纤维发达。髓部薄壁细胞类圆形，有的含草酸钙簇晶。见图 2、图3。

注：1.表皮；2.皮层；3.纤维束；4.木质部；5.韧皮部；6.导管；7.髓部；8.中柱鞘纤维。

2.1.3 叶横切面 表皮细胞一列，类圆形或扁方形，外被角质层。栅栏组织为1～2列细胞，紧密排列，海绵组织疏松，有空隙。主脉维管束外韧型，近环状，周围薄壁细胞含草酸钙簇晶。见图4。

注：1.表皮；2.栅栏组织；3.主脉维管束；4.草酸钙簇晶；5.海绵组织。

2.2 三叶青粉末显微

2.2.1 块根粉末显微 粉末浅红棕色或浅棕色。淀粉粒类圆形、椭圆形、纺锤形等，直径8～56 μm，多单粒，脐点点状或裂缝状，层纹不明显。网纹细胞黄棕色，壁稍厚，具有类圆形网状壁孔，直径171～219 μm。草酸钙簇晶单个散在，直径12～60 μm。草酸钙针晶较多，散在，长32～196 μm。见图5。

注：1.淀粉粒；2.网纹细胞；3.草酸钙针晶束；4.草酸钙簇晶。

2.2.2 茎粉末显微 浅黄褐色。表皮细胞方形，细胞壁较厚，胞腔常含黄棕色物，断面观外被较厚角质层。孔纹导管多破碎，直径42～98 μm。草酸钙簇晶较多，散在或排列成行直径10～66 μm。草酸钙针晶散在或成束存在于类方形黏液细胞内，长45～182 μm。纤维长，单个散在或成束，直径6～18 μm壁木化，有纹孔。见图6。

注：1.角质层；2.表皮细胞；3.孔纹导管；4.草酸钙簇晶；5.草酸钙针晶；6.纤维。

2.2.3 叶粉末显微 绿色或黄绿色。草酸钙簇晶散在，直径22～58 μm。草酸钙针晶散在或成束存在于纺锤形黏液细胞内，长65～195 μm。导管为螺纹导管，直径15～35 μm。叶片下表皮细胞多角形，气孔为平轴式或不定式。见图7。

注：1.含草酸钙针晶的黏液细胞；2.草酸钙簇晶；3.螺纹导管；4.气孔。

3 讨论

通过对三叶青块根、茎、叶横切特征进行研究，发现块根皮层结构明显，纤维束较规律排列于维管束上方，呈断续环状；韧皮部韧皮纤维呈条带状，一至多条，或连续，或间断；射线薄壁细胞常见草酸钙簇晶；茎皮层中柱鞘纤维束环列，在5个棱角处较大，棱角间较小，壁厚；维管束排列成环状，5边中有两边相对，该两边维管束较发达。木质部顶端木纤维束一至多条带状排列，或呈“口”“日”等闭合形状。此研究结果与《浙江省中药材标准》《湖南省中药材标准》记载的三叶青横切特征相对比，发现《标准》中均未见描述，结合本研究目标物为黔地喀斯特地区采集样品，地域特点较为突出，与湖南、浙江等地差异较大，推测该差异或因此产生，也体现了三叶青生物特性随区域不同变化较大的特点。而《湖南省中药材标准》三叶青茎横切特征中“韧皮部外缘的两径向面有草酸钙簇晶环列”又异于本研究，也佐证了地域性差异的影响。

本研究还对三叶青块根、茎、叶粉末特征进行了对比，发现均含有草酸钙簇晶，大小无明显差异，茎中簇晶常成排；草酸针晶甚多，块根、茎中晶体多散在，存在于类方形黏液细胞，而叶晶体存在于纺锤形黏液细胞中；块根中淀粉粒较大，脐点及层纹不明显，网纹细胞大型，黄色。其中，块根粉末特征与已报道的特征差异不明显[1，12]，而茎、叶粉末显微特征，未见相关文献报道。研究还发现，叶片中草酸晶体(簇晶、针晶)数量明显多于茎叶中，而三叶青叶片口味较酸，或与该特点密切相关。

综上，本研究较为详细地阐明了三叶青不同部位的显微特征，为其准确合理应用提供了参考，也为后续深入研究、制定地方标准及申报国家标准提供了有价值的理论依据。