非心源性脑梗死的发生、发展与血清miRNA-145、miRNA-210水平的相关性

徐 亮，石 瑜，王广军△

江苏省徐州市肿瘤医院：1.重症医学科；2.神经内科，江苏徐州 221000

脑梗死的常见诱因为动脉粥样硬化。非心源性脑梗死为常见类型，包括粥样硬化斑块脱落、肺静脉血栓或凝块等所引起的脑梗死，对患者生命有严重威胁。早期干预对改善患者预后具有重要价值[1-2]。微小RNA(miRNA)为内源性非编码的小RNA分子，在真核生物中广泛存在，能调节基因表达。较多临床研究指出，miRNA可调控中枢神经，在多种脑血管疾病中发挥重要作用，提示miRNA可作为脑血管病领域诊疗的新方向[3-4]。本研究通过检测非心源性脑梗死不同发展程度患者血清miRNA-145、miRNA-210水平并探讨其与病情的相关性，旨在为非心源性脑梗死的诊治提供参考。

1 资料与方法

1.1一般资料 经本院医学伦理委员会批准，选取2019年3月至2021年10月本院收治的106例非心源性脑梗死患者作为研究组，选取同期40例体检健康者作为对照组。研究组患者住重症监护病房。研究组纳入标准：符合《中国急性缺血性脑卒中诊治指南》[5]中关于非心源性脑梗死的标准，分型为非心源性脑梗死，且经MRI等影像学检查确诊。排除标准：合并其他恶性肿瘤；不配合有关检查；合并其他血管相关疾病；存在精神疾病或意识障碍。采用美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分[6]对纳入的患者进行分组：NIHSS评分不足4分作为轻度卒中组，共32例；4～15分作为中度卒中组，共45例；评分超过15分作为重度卒中组，共29例。各组性别、年龄、体质量指数(BMI)、血压等基本资料比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。见表1。

表1 各组一般资料比较

1.2方法 采集各组受试者空腹静脉血备用。炎症因子水平检测：使用酶联免疫吸附试验检测患者血清白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平，严格按试剂盒说明书进行操作。血清miRNA-145、miRNA-210水平检测：采用实时荧光定量PCR检测miRNA-145、miRNA-210水平。(1)提取血清总RNA。使用RNA提取试剂盒(来源于QuantoBio)从血清中将RNA提取，按试剂盒提供的说明书对血清总RNA进行提取并纯化，使用紫外分光光度计检测260 nm处吸光度值并计算RNA水平。(2)反转录。根据miScritpt Ⅱ反转录试剂盒说明书操作，反转录合成cDNA；总反应体系为20 μL，反应条件为于37 ℃下反应1 min，95 ℃下反应5 min；使用无酶水对其稀释并放于冰箱中冷冻保存。(3)实时荧光定量PCR。由MRC 基因公司设计合成引物，按说明书配制反应混合物，各反应体系20 μL，使用荧光定量PCR仪(罗氏，型号：LightCycler480)；PCR反应条件为95 ℃下预变性30 s，95 ℃下反应5 s，再于60 ℃下反应30 s，重复40个循环后扩增，95 ℃下反应15 s，60 ℃下反应1 min，再于95 ℃下反应15 s绘制溶解曲线。各样品设置3个复孔，采用2-ΔΔct法计算miRNA-145、miRNA-210的相对表达水平。

2 结 果

2.1各组炎症因子水平比较 轻、中、重度卒中组IL-10、TNF-α水平均高于对照组(P<0.05)；重度卒中组IL-10、TNF-α水平均高于轻、中度卒中组(P<0.05)。见表2。

表2 各组炎症因子水平比较

2.2各组血清miRNA-145、miRNA-210水平比较 轻、中、重度卒中组血清miRNA-145、miRNA-210水平均高于对照组(P<0.05)；重度卒中组miRNA-145、miRNA-210水平均高于轻、中度卒中组(P<0.05)。见表3。

表3 各组血清miRNA-145、miRNA-210水平比较

2.3血清miRNA-145、miRNA-210诊断非心源性脑梗死的效能分析 经ROC曲线分析，miRNA-145诊断非心源性脑梗死的曲线下面积(AUC)为0.764，灵敏度、特异度分别为79.2%、62.5%；miRNA-210诊断非心源性脑梗死的AUC为0.784，灵敏度、特异度分别为69.8%、75.0%。见表4和图1。

图1 血清miRNA-145、miRNA-210诊断非心源性脑梗死的ROC曲线

表4 血清miRNA-145、miRNA-210诊断非心源性脑梗死的效能分析

2.4患者血清miRNA-145、miRNA-210水平与NIHSS评分的相关性 经Spearman相关分析显示，血清miRNA-145、miRNA-210水平与患者NIHSS评分均呈正相关(r=0.457、0.362,P<0.001)。见图2。

图2 血清miRNA-145、miRNA-210水平与NIHSS评分的相关性分析

3 讨 论

脑梗死是由多种原因导致的脑部血液循环障碍，局部脑组织因缺血缺氧而出现坏死，继而表现出相应神经功能缺损。脑梗死为常见的脑血管疾病，其中多数为非心源性脑梗死，非心源性脑梗死发病迅速且进展快，具有较高的发病率、复发率、致残率与病死率[7-8]。

脑梗死的发生、发展与机体炎症反应、免疫功能紊乱等有关。miRNA有转录后调节功能，在细胞受刺激后参与激活磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B等脑梗死相关信号途径与免疫功能调控[9]。多数miRNA为JAK激酶/信号转导和转录激活因子途径中的重要调控因子，核因子κB为多数炎症因子的转录因子，激活后生成大量IL-10、TNF-α等炎症细胞因子并激发炎症反应，同时产生抗炎因子使抗炎与促炎反应紊乱。IL-10/TNF-α可反映机体免疫紊乱状态，比值越大提示机体抗炎反应越强烈。本研究中轻、中、重度卒中组患者血清IL-10、TNF-α水平均高于对照组，且重度卒中组IL-10、TNF-α水平高于轻、中度卒中组，可能是由于本研究纳入的高龄患者免疫功能低下，且部分血标本留取时间点错过了TNF-α分泌高峰，患者处于抗炎关键阶段等[10-11]。轻、中、重度卒中组患者IL-10、TNF-α水平高于对照组，说明脑梗死患者体内炎症反应较为严重。

miRNA广泛分布于真核细胞中，是非编码的小分子RNA。目前临床已证实人类基因组中有超过400种miRNA与癌症有关，miRNA水平与肿瘤生物学特征关联，可调控基因表达以发挥原癌、抑癌基因作用，在肿瘤发生、发展中具有重要作用[12-13]。近期有研究者对miRNA在脑梗死发生、发展过程中的调控作用进行研究，在与脑梗死相关的循环miRNA实验中经基因芯片发现miRNA表达有所差异[14]。miRNA-145为少数在5个时间点上升的miRNA。目前已证实miRNA-145在乳腺癌、食管癌等多种肿瘤中表达异常，可通过调控信号通路以发挥抑癌作用[15]。miRNA-210在脑缺血后有一定表达异常，研究显示，miRNA-210能促进脑缺血后血管新生过程，与脑梗死病情发展有密切关系[16]。本研究对非心源性脑梗死不同程度患者的血清miRNA-145、miRNA-210水平进行研究，结果显示重度卒中组患者miRNA-145、miRNA-210水平显著高于轻、中度卒中组患者。提示miRNA-145、miRNA-210可作为非心源性脑梗死的有效生物标志物，用于评估病情严重程度[17-18]。ROC曲线分析显示，miRNA-145诊断非心源性脑梗死的AUC为0.764，灵敏度、特异度分别为79.2%、62.5%；miRNA-210诊断非心源性脑梗死的AUC为0.784，灵敏度、特异度分别为69.8%、75.0%，说明血清miRNA-145、miRNA-210水平在诊断非心源性脑梗死的灵敏度与特异度方面具有一定优势，提示这2项指标可作为判断非心源性脑梗死的无创指标[19-20]。本研究通过Spearman相关性分析，研究组血清miRNA-145、miRNA-210水平与NIHSS评分呈正相关，说明miRNA-145、miRNA-210有助于对脑梗死患者预后及炎症反应状态进行判断。

综上所述，非心源性脑梗死患者血清miRNA-145、miRNA-210水平显著上升，可反映机体炎症反应状态，与脑梗死发生、发展密切相关，可为有效预防、诊疗非心源性脑梗死提供参考依据。